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    • 103. 发明公开
    • Einführung von Sequenzelementen in Nukleinsäuren
    • Einführungvon Sequenzelementen inNukleinsäuren
    • EP2316965A1
    • 2011-05-04
    • EP10009216.2
    • 2007-05-04
    • Qiagen GmbH
    • Korfhage, ChristianEngel, HolgerLöffert, Dirk
    • C12Q1/68
    • C12P19/34C12N15/10C12Q1/6816C12Q2563/179C12Q2525/161C12Q2521/101
    • Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Einführung einer Tag-Sequenz oder mehrerer Tag-Sequenzen in eine Nukleinsäure, das durch die folgenden Schritte gekennzeichnet ist: (a) Bereitstellen einer Template-Nukleinsäure; (b) Hybridisieren mindestens einer Anker-Sequenz mindestens eines Anker-Oligonukleotids mit einem Sequenzabschnitt der Template-Nukleinsäure; und (c) Synthetisieren eines neuen Nukleinsäurestrangs, welcher partiell komplementär zur Template-Nukleinsäure ist und welcher an seinem 3'-Ende eine zu dem nicht-hybridisierenden Teil des Anker-Oligonukleotids, d.h. der mindestens einen Tag-Sequenz, komplementäre Sequenz enthält
    • 将标签序列插入核酸包括将锚定寡核苷酸的锚定序列与模板核酸的序列区段杂交,并合成与模板部分互补的新核酸链,并具有与该模板互补的3'末端序列 非杂交部分的锚定寡核苷酸,从而形成双链区域。 还包括以下独立权利要求:(1)在第一链合成中以第一链合成方式合成并具有以矩阵独立的方式引入的3'末端标签序列的核酸,其中与标签序列互补的序列是 不是模板核酸的一部分; (2)具有在3'区域中的锚定序列的锚定寡核苷酸和5'区域中的标签 - 模板序列,使得锚定序列杂交,并且标签 - 模板序列在第二链期间不与模板核酸杂交 合成,其中与模板的一部分互补的第二链的合成与模板链上的锚序列的杂交位点开始3',并通过标记模板序列的5'末端终止 聚合酶模板切换。