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    • 1. 发明申请
    • 피브리노겐의 정제방법
    • 如何纯化纤维蛋白原
    • WO2017123012A1
    • 2017-07-20
    • PCT/KR2017/000389
    • 2017-01-12
    • 주식회사 녹십자홀딩스
    • 김준식김효진박지윤이주호손재운신용원
    • C07K1/30C07K1/34C07K1/36B01J20/08C07K14/75A61K38/36
    • A61K38/36B01J20/08C07K1/30C07K1/34C07K1/36C07K14/75
    • 본 발명은 피브리노겐의 정제방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 (a) 피브리노겐을 함유하는 용액에 포함된 피브리노겐을 1.5 ~ 2.5M의 글리신 농도가 되도록 글리신을 첨가하여 침전시킨 다음, 상등액을 제거하고, 침전물을 수득하는 단계(1차 글리신 침전(1 st glycine precipitation)); (b) 상기 (a) 단계의 1차 글리신 침전 침전물을 용해 버퍼에 용해화하여 용해액을 수득하고, 상기 용해액을 0.2 ~ 1.2M의 글리신 농도가 되도록 글리신을 첨가하여 침전시키고, 상등액(supernatant)을 회수하는 단계(2차 글리신 침전(2 nd glycine precipitation)); (c) 상기 (b) 단계의 상등액을 1.5 ~ 2.5M의 글리신 농도가 되도록 글리신을 첨가하여 침전시키고 침전물을 수득하는 단계(3차 글리신 침전(3 rd glycine precipitation)); 및 (d) 상기 (c) 단계의 침전물을 용해 버퍼에 용해화하여 용해액을 수득하고, 이를 나노필터로 나노여과(nanofiltration, NF)하는 단계; 를 포함하는 피브리노겐의 정제방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 피브리노겐 단백질의 새로운 정제방법은 병원성 동물 유래 성분(바이러스)의 유입이 원천적으로 차단되어 안전성이 우수한 방법이며, 간단한 공정으로 회수율이 높은 고순도의 피브리노겐 단백질을 정제할 수 있으므로 매우 경제적이고 효율적일 뿐 아니라, 기존의 방법으로 정제된 피브리노겐에 비해 순도가 높아 국소작용력이 증가하는 장점이 있어, 혈액 관련 질환, 특히 혈액응고 질환 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
    • 本发明涉及血纤维蛋白原的纯化,更具体地,通过加入甘氨酸与包含在含有纤维蛋白原的溶液1.5〜2.5M甘氨酸纤维蛋白原的浓度的沉淀(a)中 接下来,除去上清液并获得沉淀物(第一次甘氨酸沉淀); (B),其中(a)筛选沉淀物的主甘氨酸沉淀步骤溶于裂解缓冲液,得到的溶胞产物,并且将裂解物通过加入甘氨酸至0.2的甘氨酸浓度〜1.2M,将上清液(上清液中沉淀 )(第二次甘氨酸沉淀(第二次和第三次甘氨酸沉淀)); (C)步骤(第三甘氨酸沉淀物(3 RD 甘氨酸沉淀))中以沉淀和步骤的上清液(b)中的溶液中加入甘氨酸,使得1.5〜2.5M甘氨酸浓度和得到沉淀物 。 并且(d)将步骤(c)的沉淀溶解在溶解缓冲液中以获得溶液,并且通过纳滤器对溶液进行纳滤(NF)。 一种纯化纤维蛋白原的方法。 根据本发明的纤维蛋白原蛋白的新的净化过程被阻断与致病动物来源的成分(病毒)的一个根本条目,并且安全性是优良的方法,由于具有通过简单的工艺高回收率的高纯度的纤维蛋白原蛋白可被纯化和高度经济高效 以及,在具有与常规方法纯化的纤维蛋白原相比这是一个优点,即当地的力增加更高的纯度,可以在血液相关疾病是有用的,特别是血液凝固疾病的预防和治疗。