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    • 7. 发明授权
    • 기지의 서열에 인접한 미지의 DNA 서열을 증폭하는 방법
    • 扩增与已知序列相邻的未知DNA序列的方法
    • KR101231089B1
    • 2013-02-07
    • KR1020087027939
    • 2006-05-04
    • 주식회사 씨젠
    • 천종윤
    • C12Q1/68C12N15/09
    • C12Q1/6844C12Q1/6853C12Q2527/107C12Q2525/179C12Q2525/101C12Q2525/185C12Q2525/161
    • 본 발명은 DNA 워킹 어닐링 조절 프라이머(DW-ACP) 및 기지의 뉴클레오타이드 서열 한 위치에 혼성화할 수 있는 제1차 타깃-특이적 프라이머 (TSP)를 이용하여 미지의 뉴클레오타이드 서열을 제1차 증폭 (primary amplification)하는 단계(a)를 포함하며, 상기 단계 (a)는 다음의 과정을 포함하는 것을 특징으로 하는 기지 (旣知, known)의 뉴클레오타이드 서열에 인접한 미지의 뉴클레오타이드 서열을 증폭하는 방법에 관한 것이다. (a-1) (ⅰ) 상기 미지의 뉴클레오타이드 서열에 혼성화 되는 축퇴성 (degenerate) 랜덤 뉴클레오타이드 서열 및 (ⅱ) 상기 미지의 뉴클레오타이드 서열의 한 위치에 실질적으로 상보적인 혼성화 뉴클레오타이드 서열을 포함하며, 상기 제1차 축퇴성 DW-ACP 연장산물이 생성되는, 제1차 어닐링 온도에서 상기 미지의 뉴클레오타이드 서열의 제1단계 증폭 (first-stage amplification)을 실시하는 단계로서, 상기 제1차 어닐링 온도는 상기 제1차 축퇴성 DW-ACP가 프라이머로서 작용하도록 한다. 그리고 (a-2) 상기 제1차 어닐링 온도보다 높은 제2차 어닐링 온도에서 상기 단계 (a-1)에서 생성된 증폭 산물의 제2단계 증폭(second-stage amplification)을 실시하는 단계로서, 상기 단계 (a-1)에서 사용된 제1차 축퇴성 DW-ACP 및 상기 제1차 TSP를 이용하며, 상기 각 프라이머가 타깃 뉴클레오타이드 서열과 어닐링 되는 조건하에서, 제1차 증폭 산물이 생성된다.
      핵산, 올리고뉴클레오타이드, 디옥시이노신, 프라이머, 서열, 증폭