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    • 6. 发明申请
    • VERFAHREN ZUR SYNTHESE EINER cDNA IN EINER PROBE IN EINER ENZYMATISCHEN REAKTION
    • METHOD FOR A cDNA在一个示例合成在酶反应
    • WO2008020008A1
    • 2008-02-21
    • PCT/EP2007/058369
    • 2007-08-13
    • QIAGEN GMBHENGEL, HolgerYERRAMILLI, SubrahmanyamKREUTZ, MartinLÖFFERT, DirkKORFHAGE, Christian
    • ENGEL, HolgerYERRAMILLI, SubrahmanyamKREUTZ, MartinLÖFFERT, DirkKORFHAGE, Christian
    • C12Q1/68
    • C12Q1/6806C12Q1/6848C12Q2527/101C12Q2521/131C12Q2521/107
    • Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Synthese einer cDNA in einer Probe in einer enzymatischen Reaktion, wobei das Verfahren die Schritte umfasst, gleichzeitige Bereitstellung eines ersten Enzyms mit Polyadenylierungsaktivität, eines zweiten Enzyms mit reverser Transkriptaseaktivität, eines Puffers, mindestens eines Ribonukleotids, mindestens eines Desoxyribonukleotids, eines Anker Oligonukleotids, Zugabe einer Probe umfassend eine Ribonukleinsäure sowie Inkubation der Agenzien der vorhergehenden Schritte bei einem oder mehreren Temperaturschritten, welche so gewählt sind, dass das erste und das zweite Enzym Aktivität zeigen. Die Erfindung betrifft weiter einer Reaktionsgemisch umfassend ein erstes Enzym mit Polyadenylierungsaktivität, eines zweites Enzym mit reverser Transkriptaseaktivität, optional einen Puffer, optional mindestens ein Ribonukleotid, optional mindestens ein Desoxyribonukleotid und optional Anker Oligonukleotid. Zudem betrifft die Erfindung einen Kit umfassend ein entsprechendes Reaktionsgemisch.
    • 本发明涉及一种用于cDNA在酶反应的样品中的合成的方法,所述方法包括同时提供与多聚腺苷酸化的第一酶的步骤,具有逆转录酶活性的第二酶,缓冲液,其包含至少一个核糖核苷酸,至少一种脱氧核糖核苷酸 ,锚寡核苷酸,添加了对一个或多个温度的步骤之前的步骤,其被选择为使得所述第一和第二显示出酶的活性的药剂的含有核糖核酸的样品以及温育。 本发明还涉及包含多聚腺苷酸化与,具有逆转录酶活性的第二酶,任选的缓冲液中的第一种酶的反应混合物中,任选的至少一种核糖核苷酸,任选地至少一个脱氧核糖核苷酸和任选的锚寡核苷酸。 本发明还涉及一种包括一个相应的反应混合物的试剂盒。
    • 8. 发明申请
    • VERFAHREN ZUR SYNTHESE EINER CDNA IN EINER PROBE IN EINER ENZYMATISCHEN REAKTION
    • METHOD FOR A cDNA在一个示例合成在酶反应
    • WO2009021757A1
    • 2009-02-19
    • PCT/EP2008/051763
    • 2008-02-13
    • QIAGEN GMBHENGEL, HolgerYERRAMILLI, SubrahmanyamKREUTZ, MartinLÖFFERT, DirkKORFHAGE, Christian
    • ENGEL, HolgerYERRAMILLI, SubrahmanyamKREUTZ, MartinLÖFFERT, DirkKORFHAGE, Christian
    • C12Q1/68
    • C12Q1/6806C12N15/1096C12Q1/6844C12Q2527/101C12Q2521/131C12Q2521/107
    • Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Synthese einer cDNA in einer Probe in einer enzymatischen Reaktion, wobei das Verfahren die Schritte umfasst, gleichzeitige Bereitstellung eines ersten Enzyms mit Polyadenylierungsaktivität, eines zweiten Enzyms mit reverser Transkriptaseaktivität, eines Puffers, mindestens eines Ribonukleotids, mindestens eines Desoxyribonukleotids, eines Anker Oligonukleotids, Zugabe einer Probe umfassend eine Ribonukleinsäure sowie Inkubation der Agenzien der vorhergehenden Schritte bei einem oder mehreren Temperaturschritten, welche so gewählt sind, dass das erste und das zweite Enzym Aktivität zeigen, wobei zusätzlich in dem selben Reaktionsgemisch eine Amplifikation erfolgt. Die Erfindung betrifft weiter einer Reaktionsgemisch umfassend ein erstes Enzym mit Polyadenylierungsaktivität, eines zweites Enzym mit reverser Transkriptaseaktivität, optional einen Puffer, optional mindestens ein Ribonukleotid, optional mindestens ein Desoxyribonukleotid, optional Anker Oligonukleotid und ein Enzym mit DNA Sytheseaktivität.
    • 本发明涉及一种用于cDNA在酶反应的样品中的合成的方法,所述方法包括同时提供与多聚腺苷酸化的第一酶的步骤,具有逆转录酶活性的第二酶,缓冲液,其包含至少一个核糖核苷酸,至少一种脱氧核糖核苷酸 ,锚寡核苷酸,添加了对一个或多个温度的步骤之前的步骤,其被选择为使得所述第一和所述第二酶表现出活性,此外,放大发生在相同的反应混合物的试剂,其包括核糖核酸的样品以及温育。 本发明还涉及包含多聚腺苷酸化与,具有逆转录酶活性的第二酶,任选的缓冲液中的第一种酶的反应混合物中,任选的至少一种核糖核苷酸,任选地至少一种脱氧核糖核苷酸,任选的锚寡核苷酸和与DNASytheseaktivität的酶。