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    • 3. 发明申请
    • VERFAHREN ZUR QUANTIFIZIERUNG METHYLIERTER DNA
    • 方法定量甲基化的DNA
    • WO2005123941A1
    • 2005-12-29
    • PCT/DE2005/001109
    • 2005-06-15
    • EPIGENOMICS AGSCHUSTER, MatthiasSCHATZ, Philipp
    • SCHUSTER, MatthiasSCHATZ, Philipp
    • C12Q1/68
    • C12Q1/6827C12Q2537/164C12Q2521/331
    • Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht eine Quantifi­zierung von methylierter DNA durch eine Kombination aus Restriktionsverdau und Real-Time-PCR. Hierzu wird die zu untersuchende DNA zunächst aus einer biologischen Probe isoliert. Danach wird die isolierte DNA mit einem methy­lierungsspezifischen Restriktionsenzym umgesetzt und an­ schließend mittels einer Real-Time-PCR amplifiziert, wo­bei nur dann Amplifikate gebildet werden, wenn die DNA zuvor nicht geschnitten wurde. Anschließend wird mit Hil­fe einer Referenzmessung der Anteil methylierter und un­methylierter DNA in der ursprünglichen Probe berechnet. Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich insbesondere zur Diagnose und Prognose von Krebs und anderen mit einer Veränderung des Methylierungsstatus assoziierten Krank­heiten sowie zur Vorhersage von Arzneimittelwirkungen.
    • 本发明的方法允许对甲基化DNA的定量通过限制性消化和实时-PCR的组合。 对于这一点,要被检查的DNA首先从生物样品中分离。 此后,将分离的DNA与甲基化特异性限制性内切酶反应,并通过实时-PCR,其中当DNA没有被预先切割的扩增产物仅形成的装置在关闭扩增。 甲基化和未甲基化DNA的比例,然后用参考测量的辅助下在原始样品中进行计算。 本发明的方法特别适合用于治疗癌症和其它与所述甲基化状态的变化,以及预测的药物的影响相关联的诊断和预后。