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    • 77. 发明申请
    • タンパク質の配向制御固定化に適したタンパク質及び当該タンパク質の固定化担体
    • 蛋白质适用于蛋白质定向控制/蛋白质的固定和固定支持的蛋白质
    • WO2008044692A1
    • 2008-04-17
    • PCT/JP2007/069722
    • 2007-10-10
    • 独立行政法人産業技術総合研究所巌倉 正寛広田 潔憲曽田 裕行皿良 剛有賀 由樹子山子 知織
    • 巌倉 正寛広田 潔憲曽田 裕行皿良 剛有賀 由樹子山子 知織
    • C07K14/00C12N15/09C07K17/00
    • C07K14/31C07K14/315C07K17/06C07K2319/21
    •  本発明は、タンパク質をカルボキシ末端を介して特異的且つ効率よく固定化担体に結合させるために改変した、下記のアミノ酸配列を有する新規なタンパク質を提供することを課題とする。  一般式 R1-R2-R3-R4-R5で表されるアミノ酸配列  [式中、配列は、アミノ末端側からカルボキシ末端側に向かう配列を示し、  R1部分の配列は、固定化対象タンパク質の配列であり、リジン残基及びシステイン残基を含まないことを特徴とする配列であり;  R2部分の配列は存在しなくてもよく、存在する場合はリジン及びシステイン残基以外のアミノ酸残基により構成されるスペーサー配列であり;  R3部分の配列はシステイン-X(Xは、リジン及びシステイン以外のアミノ酸残基)で表される2残基のアミノ酸で構成される配列であり;  R4部分の配列は存在しなくてもよく、存在する場合はリジン残基及びシステイン残基を含まない配列であり、一般式 R1-R2-R3-R4-R5で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質全体の等電点を酸性側にし得る酸性アミノ酸残基を含むことを特徴とする配列であり;そしてR5部分の配列はタンパク質を精製するためのアフィニティータグ配列である] からなるタンパク質であって、R1-R2で表される部分を固定化担体に固定化するために用いるタンパク質。
    • 一种新的蛋白被修饰以便通过其羧基末端获得蛋白质与固定化载体的特异性高效连接,其具有以下通式的氨基酸序列:R1-R2-R3-R4-R5,其中该序列以氨基末端 以羧基末端结束,R1段序列为固定化对象蛋白序列,其特征在于不含赖氨酸和半胱氨酸残基; R2片段的序列可以不存在,并且当存在时是由除赖氨酸和半胱氨酸残基之外的氨基酸残基组成的间隔序列; R3区段的序列是由表达为半胱氨酸-X(X是除赖氨酸和半胱氨酸残基之外的氨基酸残基)的两个氨基酸残基组成的序列; R4区段的序列可以不存在,并且当存在时是不含赖氨酸和半胱氨酸残基的序列,其特征在于含有能够引起通式R1-的氨基酸序列的蛋白质的等电点的酸性氨基酸残基, R2-R3-R4-R5整体落在酸侧; R5片段的序列是用于蛋白质纯化的亲和标签序列。 在蛋白质中,R1-R2片段用于固定在固定支持物上。
    • 79. 发明申请
    • ORGANIC COMPOUNDS
    • 有机化合物
    • WO2006113957A2
    • 2006-11-02
    • PCT/AT2006/000165
    • 2006-04-25
    • SANDOZ AGBOEHRINGER INGELHEIM AUSTRIA GMBHWERTHER, FlorianACHMÜLLER, ClemensWECHNER, PhilippAUER, BernhardPODMIRSEG, Silvio
    • WERTHER, FlorianACHMÜLLER, ClemensWECHNER, PhilippAUER, BernhardPODMIRSEG, Silvio
    • C12N15/62C12N9/50C12P21/06
    • C12P21/02C07K1/22C07K17/06C12N9/506C12N15/62
    • The invention relates to a process for the recombinant production of a heterologous polypeptide of interest, comprising, (i) cultivation of a bacterial host cell which is transformed with an expression vector which comprises a nucleic acid molecule which codes for a fusion polypeptide, the fusion polypeptide comprising a derivative of an autoprotease N pro of Pestivirus, wherein at least one cysteine residue of the naturally occuring autoprotease N pro of Pestivirus is replaced by another amino acid residue, and a second polypeptide which is connected to the first polypeptide at the C-terminus of the first polypeptide in a manner such, that the second polypeptide is capable of being cleaved from the fusion polypeptide by the autoproteolytic activity of the first polypeptide, said second polypeptide being a heterologous polypeptide, wherein cultivation occurs under conditions which cause expression of the fusion polypeptide and formation of corresponding cytoplasmic inclusion bodies, (ii) isolation of the inclusion bodies from the host cell, (iii) solubilization of the isolated inclusion bodies, (iv) induction of autoproteolytic cleavage of the heterologous polypeptide of interest from the fusion polypeptide, and (v) isolation of the cleaved heterologous polypeptide of interest.
    • 本发明涉及重组产生感兴趣的异源多肽的方法,其包括(i)培养用表达载体转化的细菌宿主细胞,所述表达载体包含编码融合多肽的核酸分子,所述融合 其包含蚜虫病毒的自身蛋白酶N N a a a a a a a a,,,,,,,,,,,and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and and 第二多肽以第一多肽的C末端连接到第一多肽的方式,使得第二多肽能够通过第一多肽的自身蛋白水解活性从融合多肽切割,所述第二多肽是 异源多肽,其中培养在引起融合多肽表达和形成相应细胞质的条件下发生 包含体,(ii)从宿主细胞分离包涵体,(iii)分离的包涵体的溶解,(iv)从融合多肽诱导感兴趣的异源多肽的自体蛋白水解切割,和(v)分离 切断的感兴趣的异源多肽。