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    • 3. 发明公开
    • 융합 단백질의 자가단백질분해성 절단에 의한 재조합단백질 생산
    • 通过融合蛋白自动清除生产重组蛋白
    • KR1020080030551A
    • 2008-04-04
    • KR1020077024875
    • 2006-04-25
    • 산도즈 아게베링거 인겔하임 에르체파우 게엠베하 운트 코 카게
    • 베르더플로리안아흐뮐러클레멘스베흐너필립아우어베른하르트포드미르세그실비오
    • C12N15/62C12N9/50C12P21/06
    • C12P21/02C07K1/22C07K17/06C12N9/506C12N15/62
    • The invention relates to a process for the recombinant production of a heterologous polypeptide of interest, comprising, (i) cultivation of a bacterial host cell which is transformed with an expression vector which comprises a nucleic acid molecule which codes for a fusion polypeptide, the fusion polypeptide comprising a derivative of an autoprotease N pro of Pestivirus, wherein at least one cysteine residue of the naturally occuring autoprotease Npro of Pestivirus is replaced by another amino acid residue, and a second polypeptide which is connected to the first polypeptide at the C-terminus of the first polypeptide in a manner such, that the second polypeptide is capable of being cleaved from the fusion polypeptide by the autoproteolytic activity of the first polypeptide, said second polypeptide being a heterologous polypeptide, wherein cultivation occurs under conditions which cause expression of the fusion polypeptide and formation of corresponding cytoplasmic inclusion bodies, (ii) isolation of the inclusion bodies from the host cell, (iii) solubilization of the isolated inclusion bodies, (iv) induction of autoproteolytic cleavage of the heterologous polypeptide of interest from the fusion polypeptide, and (v) isolation of the cleaved heterologous polypeptide of interest.
    • 本发明涉及重组产生感兴趣的异源多肽的方法,其包括(i)培养用表达载体转化的细菌宿主细胞,所述表达载体包含编码融合多肽的核酸分子,所述融合 多肽,其包含蚜虫病毒的自身蛋白酶N pro的衍生物,其中蚜虫病毒的天然存在的自身蛋白酶Npro的至少一个半胱氨酸残基被另一个氨基酸残基替代,以及在C末端连接到第一多肽的第二多肽 第一多肽以第二多肽能够通过第一多肽的自体蛋白水解活性从融合多肽切割,所述第二多肽是异源多肽,其中培养发生在引起融合表达的条件下 多肽和相应的细胞质包涵体的形成,(ii )从宿主细胞分离包涵体,(iii)分离的包涵体的溶解,(iv)从融合多肽诱导感兴趣的异源多肽的自体蛋白水解切割,和(v)分离裂解的异源多肽 利益。
    • 4. 发明授权
    • 말토오스 결합 단백질을 이용한 생리활성 폴리펩타이드의고정화 방법
    • 通过使用麦芽糖结合蛋白使生物活性多肽固定化的方法
    • KR100973428B1
    • 2010-08-03
    • KR1020080046180
    • 2008-05-19
    • 한국과학기술연구원
    • 김상헌김수현한민
    • C12N11/00C12N11/02C12N11/16
    • C07K14/245C07K14/52C07K17/06C07K2319/24C12N11/06C12N11/08C12N11/14G01N33/54353
    • 본 발명은 말토오스 결합 단백질(maltose binding protein, MBP)을 이용한 생리활성 폴리펩타이드의 고정화 방법 및 이 방법에 의해 생리활성 폴리펩타이드가 고정된 생물활성 표면(bioactive surface)에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명은 1) 말토오스 결합 단백질의 카르복실 말단에 생리활성 폴리펩타이드가 결합된 융합 단백질을 얻는 단계; 및 2) 상기 융합 단백질을 말토오스 결합 단백질의 표면에 노출된 소수성 도메인을 링커로 이용하여 소수성 표면에 흡착시키는 단계를 포함하는, 생리활성 폴리펩타이드의 고정화 방법 및 이 방법에 의해 생리활성 폴리펩타이드가 고정된 생물활성 표면에 관한 것이다. 본 발명에 따른 생리활성 폴리펩타이드의 고정화 방법은 원형질막공간(periplasm) 단백질인 말토오스 결합 단백질의 표면에 노출된 소수성 도메인을 링커로 이용하여 생리활성 폴리펩타이드의 생물학적 활성은 그대로 유지하면서 간단한 물리적 흡착에 의해 이를 소수성 표면에 고정시킬 수 있고, 이렇게 생리활성 폴리펩타이드가 고정된 표면은 다양한 세포의 배양, 줄기세포의 분화 연구, 조직공학과 같은 재생의료분야, 세포 센서, 세포 칩 연구 등에 매우 유용하게 사용될 수 있다는 장점을 갖는다.
      말토오스 결합 단백질(MBP), 융합 단백질, 소수성 표면 흡착, 생리활성 폴리 펩타이드, 세포 배양
    • 5. 发明公开
    • 고분자 그래프팅에 의해 표면이 개질된 바이오 지지체 및 그 제조방법
    • 通过聚合物接枝改性表面的生物载体及其制备方法
    • KR1020040004725A
    • 2004-01-14
    • KR1020020035734
    • 2002-06-25
    • 주식회사 마크로젠
    • 이윤식김용권신동식김재권정우재장기훈이국녕
    • C12N11/10
    • C07K17/06B01J19/0046B01J2219/0061B01J2219/0072C07K17/08
    • PURPOSE: A bio-supporter of which surface is modified by polymer grafting and a preparation method thereof are provided, thereby improving bio-affinity to stably fix protein on the surface of the bio-supporter and decreasing nonspecific surface adsorption effect. CONSTITUTION: A bio-supporter of which surface is modified by polymer grafting comprises a spacer combined on the surface which grafted with polysaccharide or chitosan, wherein the polysaccharide is amino-dextran; and the spacer is a compound of the formula(2) of X-(CH2)n-Y or (3) of X-(CH2CH2O)m-Y in which X is carboxyl, amine, halide, epoxide, or aldehyde which is capable of binding to the polymer-modified surface, Y is optical-degradable compound-protected hydroxy, amine or aldehyde, n is an integer of 2 to 25, and m is an integer of 2 to 50. A method for preparing the bio-supporter of which surface is modified by polymer grafting comprises the steps of: (a) silanation of a solid supporter having hydroxy group on its surface to insert a function group to the surface; (b) directly coupling polysaccharide or chitosan to the surface of the supporter or modifying the surface of the supporter with a coupling linker and coupling it with polysaccharide or chitosan to graft the polymer thin layer to the surface; and (c) combining a spacer with the polysaccharide or chitosan-grafted surface.
    • 目的:提供通过聚合物接枝改性表面的生物支持体及其制备方法,从而提高生物亲和力,稳定地将蛋白质固定在生物支持体表面,降低非特异性表面吸附效果。 构成:通过聚合物接枝改性表面的生物支持物包括在表面上结合多孔或脱乙酰壳多糖的间隔物,其中多糖是氨基葡聚糖; 并且间隔基是X-(CH 2)n Y的式(2)的化合物或X-(CH 2 CH 2 O)m Y的(3)的化合物,其中X是羧基,胺,卤化物,环氧化物或醛,其能够结合 聚合物改性的表面,Y是光学可降解化合物保护的羟基,胺或醛,n是2〜25的整数,m是2〜50的整数。一种制备生物载体的方法, 通过聚合物接枝改性,包括以下步骤:(a)在其表面上硅烷化具有羟基的固体载体以将功能基团插入到表面; (b)将多糖或壳聚糖直接偶联到载体的表面或用偶联接头改性载体的表面,并将其与多糖或壳聚糖偶联以将聚合物薄层接枝到表面上; 和(c)将间隔物与多糖或壳聚糖接枝的表面组合。