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1. 发明授权

CN100403028C BT－CRY毒素的迅速检测失效
公开(公告)号：CN100403028C
公开(公告)日：2008-07-16
申请号：CN03817641.6
申请日：2003-05-29
申请人：印度农业研究委员会
发明人： K·R·克兰西
IPC分类号： G01N33/53 , G01N33/538 , G01N33/566 , G01N33/68
CPC分类号： G01N33/68 , G01N2333/325
摘要：本发明基于使用1)抗两种Cry毒素的2个多克隆IgG，2)从鳞翅目幼虫分离的Cry毒素受体以及3)制造免疫层析带的手工剥离方法，该层析带用于检测多种分析物。免疫层析带促进迅速检测分析物，如果用单克隆抗体产生带则费用贵且印度农民和推广人员不能承受。本发明的主要目的是简化检测Cry(Bt)毒素的免疫层析检测方法，使用特异于分析物的亲和纯化多克隆抗体，也提供一种在印度社会中适用于制造“Cry1 Ac/Cry 1Ab/Cry2 Aa/Cry2 Ab毒素”检测带的费用可接受且有力而简便的方法。抗Bt(抗Cry1 Ac或抗Cry2 Aa/Ab或两者)抗体或Cry受体蛋白通过手工剥离固定于硝酸纤维素膜。用酪蛋白或BSA和防腐剂封闭膜。抗Bt(抗Cry1 Ac或抗Cry2 Aa/Ab或两者)抗体用金标记并吸收在玻璃纤维膜上，此膜置于硝酸纤维素膜底部以重叠2mm。由于使用两种不同动物(山羊和兔)中培养的抗原亲和和蛋白A亲和纯化多克隆IgG，测定的特异性和精确性大为提高。Cry毒素检测侧向流动带的原理图示于所附图。因而产生的带代表迅速、敏感的装置和方法，用于检测Cry1 Ac/Cry 1Ab/Cry2 Aa/Cry2 Ab和结晶毒素的存在，它们来自转基因植物或在Bt-发酵产物中。方法和装置有高敏感性用于同时检测单一带上的一种或两种Cry毒素。使用本发明提供测定系统，系统含最少数量的步骤，即使由未经训练的人使用也产生可靠结果。

2. 发明公开

CN108291233A 用于蛋白质检测的组合物以及方法有权
公开(公告)号：CN108291233A
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201680051974.X
申请日：2016-08-25
申请人：先正达参股股份有限公司
发明人： S·坤铭斯 , J·史密斯 , M·福格
IPC分类号： C12N15/82 , G01N33/68 , G01N33/569 , C07K16/12
CPC分类号： C07K16/1278 , C07K2299/00 , G01N2333/325
摘要：本发明总体上涉及免疫测定，并且更具体地涉及用于在复合生物样品中示差检测和定量来自苏云金芽孢杆菌的野生型晶体蛋白(如野生型Cry1Ab)和杂合晶体蛋白的单克隆抗体和免疫测定，该杂合晶体蛋白包含全部或很大一部分野生型Cry蛋白，该复合生物样品包含野生型Cry蛋白和一种或多种杂种Cry蛋白两者。

3. 发明公开

CN1114358A 从苏云金芽孢杆菌中鉴定、定量和纯化杀昆虫蛋白质失效
公开(公告)号：CN1114358A
公开(公告)日：1996-01-03
申请号：CN94107241.X
申请日：1994-06-27
申请人：加拿大国家研究院
发明人： P·C·玛丽安 , R·C·保尔 , 矢口诚 , L·提莫斯
IPC分类号： C12Q1/04 , C12Q1/37 , C12Q1/68 , C07K1/22 , G01N30/00
CPC分类号： C07K14/325 , A01N63/02 , C12Q1/04 , G01N30/02 , G01N30/34 , G01N2333/325 , Y10S435/803 , B01D15/36
摘要：公开了鉴定由苏云金芽孢杆菌基因表达的蛋白质前毒素的方法。根据该方法，首先在pH约为9.5的含水悬浮液中用胰蛋白水解酶对含前病毒材料如苏云金芽孢杆菌的多分结晶进行有限的水解以产生子毒素。然后在大于10的恒定pH下在渐增的盐较好是氯化钠的梯度中用高效阴离子液相层析法分离子毒素。利用具有渐增浓度盐的并在预定时间和以一定速度被引入的一系列缓冲液达到对所使用的柱特异的梯度条件。

4. 发明公开

CN106459158A 针对Cry1CA特异性的单克隆抗体和相关的检测方法审中-实审
公开(公告)号：CN106459158A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201580021810.8
申请日：2015-04-23
申请人：美国陶氏益农公司
发明人： E·H·马 , G·单 , T·P·格兰西 , S·E·卡纳达
IPC分类号： C07K14/325
CPC分类号： C07K16/1278 , C07K2317/14 , C07K2317/33 , G01N2333/325 , G01N2430/10
摘要：本申请中描述了可用于测定和定量Cry1Ca delta内毒素的存在的单克隆抗体和方法。请求保护的抗体特异性地结合核心毒素区，使得它们既适合于检测全长Cry1Ca毒素，亦适合于检测氨基核心毒素和N-末端29残基截短形式。

5. 发明公开

CN1241213A 苏云金芽孢杆菌CryET33和CryET34组合物及其使用失效转让
公开(公告)号：CN1241213A
公开(公告)日：2000-01-12
申请号：CN97180002.2
申请日：1997-09-24
申请人：艾可根公司
发明人： W·P·多诺范 , J·C·多诺范 , A·C·斯莱尼
IPC分类号： C12N15/32 , C07K14/325 , C12N15/82 , A01N63/00 , C07K16/12 , C12Q1/68 , G01N33/68 , C12N1/21 , C12R1/07
CPC分类号： G01N33/56911 , C07K14/325 , G01N2333/325 , Y10S435/81 , Y10S530/825 , Y10T436/143333
摘要：本发明公开了含新型晶体蛋白质的苏云金芽孢杆菌,所述蛋白质呈现抗鞘翅目昆虫,包括红色面粉甲虫幼体和日本甲虫幼体(Popilliajaponica)的杀虫活性。还公开了被命名为cryET33和cryET34的新苏云金芽孢杆菌晶体毒素基因,它们编码鞘翅目－毒素晶体蛋白质,CryET33(29－kDa)晶体蛋白质,而cryET34基因编码14－kDa CryET34晶体蛋白质。CryET33和CryET34晶体蛋白质对红色面粉甲虫幼体和日本甲虫幼体是有毒的。还公开了制造和使用含本发明新型核酸序列的转基因细胞。

6. 发明公开

CN105884892A 一种BtCry毒素广谱检测用蛋白及其编码基因与应用有权
公开(公告)号：CN105884892A
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201610485539.X
申请日：2016-06-28
申请人：江苏省农业科学院
发明人：徐重新 , 刘贤金 , 张霄 , 刘媛 , 胡晓丹 , 仲建锋 , 张存政
IPC分类号： C07K16/12 , C12N15/13 , C12N15/11 , G01N33/68
CPC分类号： C07K16/1278 , C07K2317/21 , C07K2317/569 , G01N33/68 , G01N2333/325
摘要：本发明提供一种Bt Cry毒素广谱检测用蛋白及其编码基因与应用，该蛋白DNA序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，本发明提供的蛋白与5种Bt Cry (Cry1Ab、Cry1Ab、Cry1B、Cry1B、Cry1F)毒素均具有较好结合活性，可用于小麦样品Bt毒素广谱性检测；本发明不经动物免疫而获得的Bt Cry毒素广谱检测用单域抗体蛋白，制备周期短，氨基酸序列小，适合体外大规模生产，对开发快速检测试剂盒具有重要的科学及现实意义。

7. 发明授权

CN100473725C 苏云金芽孢杆菌CryET33和CryET34组合物及其使用失效转让
公开(公告)号：CN100473725C
公开(公告)日：2009-04-01
申请号：CN97180002.2
申请日：1997-09-24
申请人：孟山都技术有限公司
发明人： W·P·多诺范 , J·C·多诺范 , A·C·斯莱尼
IPC分类号： C12N15/32 , C07K14/325 , C12N15/82 , A01N63/00 , C07K16/12 , C12Q1/68 , G01N33/68 , C12N1/21 , C12R1/07 , C12R1/19 , C12R1/38
CPC分类号： G01N33/56911 , C07K14/325 , G01N2333/325 , Y10S435/81 , Y10S530/825 , Y10T436/143333
摘要：本发明公开了含新型晶体蛋白质的苏云金芽孢杆菌，所述蛋白质呈现抗鞘翅目昆虫，包括红色面粉甲虫幼体和日本甲虫幼体(Popilliajaponica)的杀虫活性。还公开了被命名为cryET33和cryET34的新苏云金芽孢杆菌晶体毒素基因，它们编码鞘翅目-毒素晶体蛋白质，CryET33(29-kDa)晶体蛋白质，而cryET34基因编码14-kDa CryET34晶体蛋白质。CryET33和CryET34晶体蛋白质对红色面粉甲虫幼体和日本甲虫幼体是有毒的。还公开了制造和使用含本发明新型核酸序列的转基因细胞。

8. 发明公开

CN1672049A BT－CRY毒素的迅速检测失效
公开(公告)号：CN1672049A
公开(公告)日：2005-09-21
申请号：CN03817641.6
申请日：2003-05-29
申请人：印度农业研究委员会
发明人： K·R·克兰西
IPC分类号： G01N33/53 , G01N33/538 , G01N33/566 , G01N33/68
CPC分类号： G01N33/68 , G01N2333/325
摘要：本发明基于使用1)抗两种Cry毒素的2个多克隆IgG，2)从鳞翅目幼虫分离的Cry毒素受体以及3)制造免疫层析带的手工剥离方法，该层析带用于检测多种分析物。免疫层析带促进迅速检测分析物，如果用单克隆抗体产生带则费用贵且印度农民和推广人员不能承受。本发明的主要目的是简化检测Cry(Bt)毒素的免疫层析检测方法，使用特异于分析物的亲和纯化多克隆抗体，也提供一种在印度社会中适用于制造“Cry1Ac/Cry1Ab/Cry2Aa/Cry2Ab毒素”检测带的费用可接受且有力而简便的方法。抗Bt(抗Cry1Ac或抗Cry2Aa/Ab或两者)抗体或Cry受体蛋白通过手工剥离固定于硝酸纤维素膜。用酪蛋白或BSA和防腐剂封闭膜。抗Bt(抗Cry1Ac或抗Cry2Aa/Ab或两者)抗体用金标记并吸收在玻璃纤维膜上，此膜置于硝酸纤维素膜底部以重叠2mm。由于使用两种不同动物(山羊和兔)中培养的抗原亲和和蛋白A亲和纯化多克隆IgG，测定的特异性和精确性大为提高。Cry毒素检测侧向流动带的原理图示于所附图。因而产生的带代表迅速、敏感的装置和方法，用于检测Cry1Ac/Cry1Ab/Cry2Aa/Cry2Ab和结晶毒素的存在，它们来自转基因植物或在Bt－发酵产物中。方法和装置有高敏感性用于同时检测单一带上的一种或两种Cry毒素。使用本发明提供测定系统，系统含最少数量的步骤，即使由未经训练的人使用也产生可靠结果。

9. 发明授权

US06517856B1 Insecticide resistance assay 失效
标题翻译：杀虫剂抗性测定
公开(公告)号：US06517856B1
公开(公告)日：2003-02-11
申请号：US09567319
申请日：2000-05-09
申请人： R. Michael Roe , Woodward D. Bailey , Fred Gould , George G. Kennedy , Chester L. Sutula
发明人： R. Michael Roe , Woodward D. Bailey , Fred Gould , George G. Kennedy , Chester L. Sutula
IPC分类号： A01N2534
CPC分类号： G01N33/48 , A01N25/006 , A23K50/90 , G01N33/5085 , G01N2333/325 , G01N2333/43552
摘要： Methods of assaying insects for pesticide resistance and to identify insect species are based on feeding disruption caused by insecticide such as the biopesticide Bacillius thuringiensis toxin (Bt). Further provided are methods for monitoring insecticide resistance in a population of insects, as well as methods of screening compounds for insecticidal activity. Insecticide resistance can be assessed at the level of an individual insect or at population levels. Apparatus and dehydrated insect meal pads useful in such assays are described.
摘要翻译：测定昆虫抗药性和鉴定昆虫物种的方法是基于杀虫剂引起的饲料破坏，如生物农药芽孢杆菌毒素（Bt）。还提供了用于监测昆虫群体中的杀虫剂抗性的方法以及筛选化合物的杀虫活性的方法。杀虫剂抗性可以在个别昆虫水平或群体水平进行评估。描述了可用于这种测定的装置和脱水的昆虫粉垫。

10. 发明申请

WO2017044310A1 COMPOSITIONS AND METHODS FOR PROTEIN DETECTION 审中-公开
标题翻译：蛋白质检测的组合物和方法
公开(公告)号：WO2017044310A1
公开(公告)日：2017-03-16
申请号：PCT/US2016/048580
申请日：2016-08-25
申请人： SYNGENTA PARTICIPATIONS AG , SYNGENTA CROP PROTECTION, LLC
发明人： CUMMINGS, Simone , SMITH, Julie , FOEGE, Magda
IPC分类号： C12N15/82 , G01N33/68 , G01N33/569 , C07K16/12
CPC分类号： C07K16/1278 , C07K2299/00 , G01N2333/325
摘要： The invention relates generally to immunoassays, and more particularly to monoclonal antibodies and immunoassays for the differential detection and quantitation of a wild-type crystal protein, such as a wild-type-Cry1Ab, from Bacillus thuringiensis and hybrid crystal proteins, which comprise all or a significant portion of the wild-type Cry protein in complex biological samples comprising both the wild-type Cry protein and one or more of the hybrid Cry proteins.
摘要翻译：本发明一般涉及免疫测定，更具体地涉及用于差异检测和定量来自苏云金芽孢杆菌的野生型Cry1Ab和杂合晶体蛋白质的杂交晶体蛋白的单克隆抗体和免疫测定法，其包括全部或包含野生型Cry蛋白和一种或多种杂交Cry蛋白的复杂生物样品中野生型Cry蛋白的重要部分。

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