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    • 1. 发明申请
    • His-Tag融合フェニルアラニン脱水素酵素を用いた固定化酵素チップによるL-フェニルアラニンの定量方法
    • 通过使用具有His-Tag-FUSED苯丙氨酸脱氢酶的固定化酶切片来定量L-苯丙氨酸的方法
    • WO2006022113A1
    • 2006-03-02
    • PCT/JP2005/013952
    • 2005-07-29
    • 富山県財団法人富山県新世紀産業機構浅野 泰久橘 信二郎
    • 浅野 泰久橘 信二郎
    • C12N9/06
    • C12Q1/32C07K2319/21C12N9/0018C12N11/14G01N2333/906
    •  3~12個のヒスチジンからなるオリゴペプチドをN末端に融合したフェニルアラニン脱水素酵素。3~12個のヒスチジンからなるオリゴペプチドをC末端に融合したフェニルアラニン脱水素酵素。基板表面に複数のウェルを有し、これらのウェル中に、上記フェニルアラニン脱水素酵素を固定化した固定化酵素チップ。基板表面に複数のウェルを有し、これらのウェル中に、6~9個のヒスチジンからなるオリゴペプチドをN末端に融合したフェニルアラニン脱水素酵素を固定化したL-フェニルアラニン分析用固定化酵素チップ。上記固定化酵素チップのウェル中で、被検試料をレサズリン、ジアホラーゼ、及びニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)を含む反応液とともにインキュベーョンし、反応液の発色を検出することを含む、被検試料に含まれるL-フェニルアラニンの分析方法。
    • 具有包含在N末端融合的3〜12个组氨酸残基的寡肽的苯丙氨酸脱氢酶; 具有包含在C末端融合的3至12个组氨酸残基的寡肽的苯丙氨酸脱氢酶; 在基板表面上具有多个孔的固定化酶芯片,其中如上所述的苯丙氨酸脱氢酶已固定在这些孔中; 用于分析在底物表面上具有多个孔的L-苯基丙氨酸的固定化酶芯片,其中具有包含在N末端融合的6至9个组氨酸残基的寡肽的苯丙氨酸脱氢酶已经固定在这些孔中; 以及分析测试样品中所含的L-苯丙氨酸的方法,其包括将上述固定化酶芯片的孔中的测试样品与含有甲霜灵,心肌黄酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的液体反应混合物一起温育并检测颜色 开发液体反应混合物。
    • 2. 发明申请
    • 機能改変フェニルアラニン脱水素酵素、およびこの酵素を用いた生体試料中のアミノ酸の分析方法
    • 功能改性的苯乙烯脱氢酶,以及使用酶的生物样品中氨基酸的分析方法
    • WO2008029921A1
    • 2008-03-13
    • PCT/JP2007/067527
    • 2007-09-07
    • 富山県財団法人富山県新世紀産業機構浅野 泰久橘 信二郎
    • 浅野 泰久橘 信二郎
    • C12N15/09C07K19/00C12N1/15C12N1/19C12N1/21C12N5/10C12N9/04C12Q1/32
    • C12N9/0018G01N2333/906
    • A modified enzyme having such modification of at least three amino acid residues that the modified enzyme can have improved substrate specificity of phenylalanine dehydrogenase (EC 1.4.1.20) for methionine; DNA encoding the modified enzyme; a method for the preparation of a modified enzyme which has such modification of at least three amino acid residues that the modified enzyme can have improved substrate specificity of phenylalanine dehydrogenase (EC 1.4.1.20) for methionine, comprising the steps of culturing a transformant transformed with a vector carrying the DNA, and collecting the modified enzyme from the culture; and a method for the analysis of L-methionine contained in a sample by using the modified enzyme or protein. A phenylalanine dehydrogenase having a substrate specificity for L-methionine can be produced by an evolutionary molecular engineering approach to provide a function-modified amino acid dehydrogenase suitable for enzymatic fluorometry of methionine. It becomes possible to provide a method for the analysis of L-methionine contained in a sample (a blood sample) by using the function-modified amino acid dehydrogenase.
    • 具有至少三个氨基酸残基修饰的修饰酶,所述修饰的酶可以改善甲硫氨酸的苯丙氨酸脱氢酶(EC 1.4.1.20)的底物特异性; 编码修饰酶的DNA; 一种制备修饰酶的方法,所述修饰酶具有至少三个氨基酸残基的修饰,所述修饰的酶可以改善甲硫氨酸的苯丙氨酸脱氢酶(EC 1.4.1.20)的底物特异性,所述方法包括以下步骤:培养转化了 携带DNA的载体,并从培养物中收集修饰的酶; 以及通过使用修饰的酶或蛋白质分析样品中所含的L-甲硫氨酸的方法。 具有对L-甲硫氨酸的底物特异性的苯丙氨酸脱氢酶可以通过进化分子工程方法产生,以提供适用于甲硫氨酸的酶学荧光测定的功能修饰的氨基酸脱氢酶。 通过使用功能修饰的氨基酸脱氢酶,可以提供对样品(血液样品)中所含的L-甲硫氨酸进行分析的方法。
    • 3. 发明申请
    • 機能改変フェニルアラニン脱水素酵素を用いた生体試料中のL-メチオニンの分析方法
    • 使用功能修饰的苯乙烯胺脱氢酶在生物样品中分析L-甲硫氨酸的方法
    • WO2008029920A1
    • 2008-03-13
    • PCT/JP2007/067524
    • 2007-09-07
    • 富山県財団法人富山県新世紀産業機構株式会社札幌イムノ・ダイアグノスティック・ラボラトリー浅野 泰久橘 信二郎藤井 正山崎 思乃
    • 浅野 泰久橘 信二郎藤井 正山崎 思乃
    • C12Q1/32C12N15/09C12Q1/48G01N21/78
    • G01N33/6815G01N21/78
    • 被検試料を、分岐鎖アミノ酸の少なくとも一部をオキソ酸に変換し得る処理に供する工程、処理後の被検試料を、改変型フェニルアラニン脱水素酵素と、レサズリン、ジアホラーゼ、および酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD + )を含む反応液とともにインキュベーションする工程、及びインキュベーション後の反応液の発色を検出する工程を含む、被検試料に含まれるL-メチオニンの分析方法。L-メチオニンを分析するための被検試料に含まれる可能性がある分岐鎖アミノ酸の少なくとも一部をオキソ酸に変換することを含む、分岐鎖アミノ酸の被検試料中の量を低減する方法。L-メチオニンに対して基質特異性を有する改変型フェニルアラニン脱水素酵素を用いた、被検試料に含まれるL-メチオニンの高感度かつ簡便な分析方法、及び血液試料に存在するL-メチオニン以外のアミノ酸による測定誤差を抑制できる方法を提供する。
    • 公开了一种用于分析样品中所含的L-甲硫氨酸的方法,其包括以下步骤:使样品经受能够使支链氨基酸的至少一部分转化为含氧酸的处理; 将经处理的样品与改性的苯丙氨酸脱氢酶和含有赤藓红素,心肌黄酶和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH +)的反应溶液一起孵育。 并检测孵育后反应溶液中显色的颜色。 还公开了减少样品中支链氨基酸量的方法,其中支链氨基酸是经常包含在用于分析L-甲硫氨酸的测试样品中的支链氨基酸,并且其包括至少转化 一部分支链氨基酸转化为含氧酸。 通过使用对L-甲硫氨酸具有底物特异性的改性苯丙氨酸脱氢酶,可以提供一种用于分析样品中所含的L-甲硫氨酸的高灵敏度和方便的方法,并且还提供了减少由氨基酸引起的测量误差的方法 血液样品中出现L-氨基酸以外的其他物质。