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    • 2. 发明申请
    • PROCEDE DE PREPARATION DE PEPTIDES PAR ASSEMBLAGE DE MULTIPLES FRAGMENTS PEPTIDIQUES
    • 通过组装多肽肽片段制备肽的方法
    • WO2012110536A1
    • 2012-08-23
    • PCT/EP2012/052548
    • 2012-02-15
    • CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUEMELNYK, OlegOLLIVIER, NathalieMHIDIA, RedaDHEUR, Julien
    • MELNYK, OlegOLLIVIER, NathalieMHIDIA, RedaDHEUR, Julien
    • C07K1/00C07K1/02C07K1/107
    • C07K1/026C07K1/003
    • Procédé de préparation d'un assemblage peptidique de n fragments et de n-1 acides aminés portant une fonction thiol, représenté par la formule (I) : A 1 -C 1 -A 2 -A 3 -... -C i-1 -A i -...-C n-1 -A n dans laquelle A 1 , A 2 , A 3 ... A i .., A n sont des fragments peptidiques, C 1 , C 2 , C 3 ... C i-1... C n-1 sont des restes d'acides aminés portant une fonction thiol, n est compris entre 3 et 50, et i est 2 à n, dans lequel on prépare un peptide-thioester de formule : A 1 SR (I I) dans laquelle A 1 est un fragment peptidique et SR est le reste d'un thioester alkylé, R étant alkyle éventuellement substitué, à partir d'un bis(2-sulfanyléthyl)amino peptide : A 1 -SEAoff dans laquelle SEAoff est groupement bis(2-sulfanyléthyl)amino cyclique, par action d'un thiol R-SH, en présence d'un réducteur de disulfures cycliques, suivie de la condensation sur un fragment peptidique de structure : H-C 1 (SR')-A 2 -SEAoff (III) dans laquelle (SR') représente un reste disulfure sur le thiol de l'amino-acide C 1 , en présence d'un thiol aromatique ArSH, puis transforme le nouveau peptide obtenu, de structure :A 1 -C 1 -A 2 - SEAoff (IV), en un peptide-thioester de formule : A 1 -C 1 -A 2 -SR (II'), par action d'un thiol R-SH, en présence d'un agent réducteur de disulfures cycliques, et condense sur un fragment peptidique de structure H-C 2 (SR')-A 3 -SEAoff (ΙΙI') en présence d'un thiol aromatique ArSH, pour donner un fragment peptidique, de structure A 1 -C 1 -A 2 -C 2 -A 3 -SEAoff (IV') et réitère ces 2 opérations jusqu'à n-2 fois, pour obtenir un fragment peptidique de structure A 1 -C 1 -A 2 -C 2 -A 3 -... -C i-1 -A i -....-C n-2 -A n-1 -SEAoff (IV m ), puis met en œuvre une réaction de ligation native de ce fragment peptidique (IV m ) obtenu, avec un peptide de formule : H-C n-1 -A n (V n ) par réduction en présence d'un agent réducteur de disulfures cycliques, pour donner l'assemblage peptidique multiple de formule générale (I).
    • 本发明涉及一种由式(I)表示的n个片段和具有硫醇官能团的n-1个氨基酸的肽组合物的制备方法:A1-C1-A2-A3- ... -Ci-1 -Ai -...-Cn-1-An,其中A1,A2,A3 ... Ai ..,An是肽片段,C1,C2,C3 ... C11-1Cn-1是具有 硫醇官能团,n为3至50,i为2至n,所述方法包括制备式A1SEa(II)的肽硫酯,其中A1为肽片段,SR为烷基化硫酯的残基R 作为任选取代的双(2-磺基乙基)氨基肽的烷基:A1-SEAoff,其中SEAoff是环状二(2-磺基乙基)氨基,通过硫醇R-SH,在环状二硫化物还原剂 然后在C1氨基酸的硫醇上在具有以下结构的肽片段上冷凝:在C1氨基酸的硫醇上,其中(SR')为二硫化物残基的H-C1(SR')-A2-SEAoff(III) 芳香族硫醇ArSH,然后转化所得的新型肽 de,具有结构A1-C1-A2-SEAoff(IV),通过硫醇R-SH在环状二硫化物存在下转化成式A1-C1-A2-SR(III')的肽 - 硫酯 还原剂,并在芳香族硫醇ArSH存在下,在具有结构H-C2(SR')-A3-SEAoff(III')的肽片段上缩合,得到具有结构A1-C1-A2- C2-A3-SEAoff(IV),并且重复两个所述步骤直至n-2次,以获得具有结构A1-C1-A2-C2-A3-的肽片段。 (IVm),然后使用所得到的肽片段(IVm)与式H-Cn-1-An(Vn)的肽的天然连接反应通过 在环状二硫化物还原剂的存在下还原,其产生通式(I)的多肽组装体。