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    • 1. 发明申请
    • NEUE VERFAHREN ZUR DETEKTION UND ANALYSE VON PROTEIN-INTERAKTIONEN IN VIVO
    • 有关检测和新方法体内蛋白相互作用的分析
    • WO2003076932A2
    • 2003-09-18
    • PCT/EP2003/002611
    • 2003-03-13
    • AXARON BIOSCIENCE AGROSSNER, MoritzLAAGE, RicoNAVE, ArminGRÜNEWALD, Sylvia
    • ROSSNER, MoritzLAAGE, RicoNAVE, ArminGRÜNEWALD, Sylvia
    • G01N33/50
    • C40B30/04C12N15/1055C12Q1/25C12Q1/37G01N33/542G01N2500/00
    • Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Detektion und Analyse von Protein-Interaktionen in einer Zelle umfassend die folgenden Verfahrensschritte a) Bereitstellen der Aktivität mindestens eines Enzyms aus der Gruppe der Rekombinasen und Proteasen in der Zelle als Folge einer Protein-Interaktion, b) andauernde Generierung eines aktiven Reporterproteins in der betreffenden Zelle als Folge der Enzymaktivität aus Schritt a), für einen Zeitraum, der über die Dauer der Protein-Interaktion aus Schritt a) hinausgeht, c) Erzeugung eines Detektionssignals durch die in b) generierten Reporterproteine. Die Erfindung betrifft weiterhin reverse Ausführungsformen des obigen Verfahrens zur Detektion und Analyse von Protein-Interaktionen in einer Zelle, wobei als Folge der induzierten Dissoziation einer definierten Interaktion zwischen Proteinen die Aktivität mindestens eines Enzyms aus der Gruppe der Rekombinasen und Proteasen in der Zelle bereitgestellt und in ein permanentes Detektionssignal der Zelle umgesetzt wird. Die Erfindung betrifft ausserdem Zellen, die die erfindungsgemässen Protein-Komponenten exprimieren, sowie Kits, die die erfindungsgemässen Protein-Komponenten auf DNA-Ebene in Form von geeigneten Expressionsvektoren und gegebenenfalls geeignete transizierbare bzw. infizierbare Zellen bereitstellen. Die bereitgestellten Zellen können gegebenenfalls einzelne erfindungsgemässe Protein-Komponenten stabil oder transient exprimieren.
    • 本发明涉及的检测和分析蛋白质相互作用的细胞,其包含选自下组的重组酶和蛋白酶的提供在细胞中至少一种酶的活性作为蛋白质相互作用,B持续产生活性的报告蛋白的结果的步骤的方法 在所讨论的小区作为来自步骤a酶活性的结果,对于延伸超出步骤的蛋白质相互作用的持续时间的时间段A,C由b中报道蛋白所产生的生成的检测信号。 本发明还涉及一种检测和在细胞分析蛋白质的相互作用上述方法的相反的实施例中,至少一种酶组成的组中的单元格,在重组酶和蛋白酶的活性的蛋白质之间的限定的相互作用的诱导解离的结果而提供的 小区的永久检测信号实现。 本发明还涉及表达本发明的蛋白质成分,以及其在合适的表达载体和任选的合适transizierbare或可感染细胞的形式在DNA水平提供新的蛋白质组分的试剂盒的细胞。 细胞可任选地明示稳定或瞬时提供个体本发明的蛋白组分。
    • 6. 发明申请
    • VERFAHREN ZUR DETEKTION UND ANALYSE VON PROTEIN-PROTEIN-INTERAKTIONEN
    • 方法检测和蛋白质 - 蛋白质相互作用分析
    • WO2005033706A1
    • 2005-04-14
    • PCT/EP2004/010391
    • 2004-09-16
    • AXARON BIOSCIENCE AGGRÜNEWALD, Sylvia
    • GRÜNEWALD, Sylvia
    • G01N33/542
    • C40B30/04
    • Verfahren zur Detektion und quantitativen und/oder qualitativen Analyse von Protein-Protein-Interaktionen, dadurch gekennzeichnet, dass die proteolytische Freisetzung des mindestens einen Proteins durch a) die Expression eines ersten Fusionsproteins, umfassend einen ersten Interaktionspartner und ein Proteasefragment, und b) die Expression eines zweiten Fusionsproteins, umfassend einen zweiten Interaktionspartner und ein zweites Proteasefragment, und c) die Transkomplementation einer funktionalen Protease durch die Interaktion des ersten und des zweiten Interaktionspartners miteinander, und d) die Expression eines dritten Fusionsproteins, umfassend ein freizusetzendes Protein und eine Domäne, die zur Verankerung des Fusionsproteins ausserhalb des Zellkerns führt, und e) die proteolytische Abspaltung des freizusetzenden Proteins durch die Komplementierte Protease erfolgt, wobei gegebenenfalls mindestens eines der beiden ersten Fusionsproteine eine weitere Domäne besitzt, die zur Verankerung des Fusionsproteins ausserhalb des Zellkerns führt.
    • 一种用于检测和蛋白质 - 蛋白质相互作用的定量和/或定性分析方法,其特征在于,由一个所述的至少一种蛋白质的蛋白水解释放)表达第一融合蛋白,其包括第一相互作用配偶和蛋白酶片段,和b)该表达 第二融合蛋白,其包括第二相互作用配偶体和第二蛋白酶片段,和c)通过与每个其他第一和第二相互作用配偶相互作用的功能性蛋白酶的反式互补,和d)包含一个freizusetzendes蛋白的第三融合蛋白的表达和域 导致细胞核外的融合蛋白的锚定,以及e)该蛋白质的蛋白水解裂解,以由补充蛋白酶被释放,与前两个融合蛋白的任选的至少一个具有用于维拉一个额外的域 nkerung导致细胞核外的融合蛋白。