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    • 1. 发明申请
    • TIEFENAUFLÖSUNGSGESTEIGERTE MIKROSKOPIE
    • LOW分辨率提高观察
    • WO2012065910A1
    • 2012-05-24
    • PCT/EP2011/069918
    • 2011-11-11
    • CARL ZEISS MICROIMAGING GMBHKALKBRENNER, ThomasLIPPERT, HelmutKLEPPE, Ingo
    • KALKBRENNER, ThomasLIPPERT, HelmutKLEPPE, Ingo
    • G01N21/64G01N21/00
    • G01N21/6447G01N21/64G01N21/6428G01N21/6458G02B21/0076G02B21/16G02B21/367G02B27/58
    • Beschrieben wird ein Verfahren zur hochauflösenden Lumineszenzmikroskopie einer Probe, die mit Markierungsmolekülen markiert ist, welche derart aktivierbar sind, daß sie erst aktiviert zur Abgabe bestimmter Lumineszenzstrahlung anregbar sind, wobei das Verfahren folgende Schritte aufweist: a) wiederholtes Aktivieren und Anregen einer Teilmenge der in der Probe vorhandenen Markierungsmoleküle zur Abgabe von Lumineszenzstrahlung, wobei in der Probe mindestens ein Teil der lumineszierenden Markierungsmoleküle zu den ihnen nächst benachbarten lumineszierende Markierungsmoleküle mindestens einen Abstand haben, der größer oder gleich einer Länge ist, welche sich aus einer vorbestimmten optischen Auflösung ergibt, b) wiederholtes Abbilden der Probe mit lumineszierenden Markierungsmolekülen längs einer Tiefenrichtung und mit der vorbestimmten optischen Auflösung und c) Erzeugen von Einzelbildern aus den Abbildungen aus Schritt b), wobei in den Einzelbildern die geometrischen Orte der lumineszierenden Markierungsmoleküle mit einer über die vorbestimmte optische Auflösung gesteigerten Ortsauflösung ermittelt werden, wobei zur Hochauflösung längs der Tiefenrichtung d) die Aktivierung und/oder Anregung in den Schritten a) mit einer Strahlung erfolgt, die in mindestens zwei Bereiche eingebracht wird, wobei - die Bereiche sich jeweils längs einer Ebene erstrecken, die im wesentlichen senkrecht zur Tiefenrichtung liegt, - die Bereiche in Tiefenrichtung eine vorbestimmte Ausdehnung haben und - die Bereiche so angeordnet sind, daß sie in Tiefenrichtung gesehen hintereinander liegen und sich nur teilweise überlappen, und e) in den Schritten b) getrennte Bilder der Probe bei Aktivierung und/oder Anregung jedes der mindestens zwei Bereiche aufgenommen werden, um aus den getrennten Bildern eine Tiefeninformation der lumineszierenden Markierungsmoleküle zu gewinnen.
    • 公开了一种用于样品,将其标记与标记分子,其被这样激活,它可以被激励用于递送某些发光辐射的只被激活的高分辨率的发光的方法,该方法包括以下步骤:a)重复激活和刺激的一个子集 反复样品现有标记分子以发射发光辐射,其中,所述样品将它们在下一个相邻的发光标记分子具有发光标记分子的至少一个距离,该距离大于或等于一个长度,它从一个预定的光学分辨率结果中的至少一部分,b)中 成像与发光标记沿深度方向,并在)预定的光学分辨率和c)产生来自步骤b的画面的图像帧,其中,在所述单个图像的位点的分子的样品 确定了发光标记物分子具有增加超过预定的光学分辨率的空间分辨率,其中,用于沿着深度方向D高分辨率),激活和/或激发到辐射步骤a),其在至少两个区域引入,其特征在于, - 所述 分别沿着平面延伸,其基本上垂直于深度方向的区域 - 在深度方向上的区域具有预定程度,以及 - 所述区域被布置为在彼此后面的深度方向可看出,仅延伸部分地重叠,以及e)在 步骤b)中的每个的所述至少两个区域中的样品的单独的图像在激活和/或激励被接收,以获得从单独的图像的发光标记分子的深度信息。
    • 3. 发明申请
    • MIKROSKOP
    • 显微镜
    • WO2011036096A1
    • 2011-03-31
    • PCT/EP2010/063667
    • 2010-09-17
    • CARL ZEISS MICROIMAGING GMBHLIPPERT, HelmutWOLLESCHENSKY, RalfHAUSCHILD, Robert
    • LIPPERT, HelmutWOLLESCHENSKY, RalfHAUSCHILD, Robert
    • G02B21/06G02B21/00
    • G02B21/06G02B21/0032G02B21/0076
    • Die Erfindung betrifft ein Mikroskop, welches eine Beleuchtungseinrichtung (19), mit der ein Lichtblatt zur Beleuchtung eines Probenbereichs (P) erzeugt wird, welches in Richtung einer Beleuchtungsachse (X) eines Beleuchtungsstrahlenganges (35) und in Richtung einer Querachse (Y), welche quer zur Beleuchtungsachse (X) liegt, annähernd flächig ausgedehnt ist, sowie eine Detektierungseinrichtung (1), mit der Licht detektiert wird, welches entlang einer Detektierungsachse (Z) eines Detektierungsstrahlengangs aus dem Probenbereich (P) abgestrahlt wird, wobei Beleuchtungsachse (X) und Detektierungsachse (Z), sowie Querachse (Y) und Detektierungsachse (Z) in einem von Null verschiedenen Winkel aufeinander stehen, umfaßt. Die Beleuchtungseinrichtung (19) umfaßt auch Mittel zur Umlenkung von Beleuchtungslicht in einen weiteren Beleuchtungsstrahlengang (36) und zur Erzeugung eines weiteren Lichtblatts, wobei das Lichtblatt und das weitere Lichtblatt den Probenbereich (P) auf der gleichen Beleuchtungsachse (X) aus entgegengesetzten Richtungen beleuchten, sowie Umschaltmittel zur Umschaltung des Beleuchtungslichts zwischen dem Beleuchtungsstrahlengang (35) und dem weiteren Beleuchtungsstrahlengang (36). Die Detektierungseinrichtung (1) umfaßt auch ein Detektierungsobjektiv (2) zur Abbildung von aus dem Probenbereich (P) abgestrahltem Licht auf einen ortsauflösenden Flächendetektor (4) zur ortsabhängigen Detektierung des Lichts. Bei einem solchen Mikroskop umfassen die Umschaltmittel ein schnell schaltbares Umschaltelement mit einer Schaltzeit von weniger als 10 ms, wobei eine vorgegebene Integrationszeit des Flächendetektors (4) und die Schaltzeit des Umschaltelements so aufeinander abgestimmt sind, daß der Probenbereich (P) während der Integrationszeit auf der Beleuchtungsachse (X) mindestens einmal aus jeder Richtung beleuchtet wird.
    • 本发明涉及具有照明装置(19)产生与光片以照明样本区域(P),一个显微镜,其在照明轴线(X)的照明光束路径(35)的方向上和在一横向轴线的方向(Y) 横向于所述照明轴线(X),是近似平面的延长,和一个检测装置(1),与所述光,该光沿着从样品区的Detektierungsstrahlengangs(P)的一个Detektierungsachse(Z)发射的检测,所述照明轴线(X)和 Detektierungsachse(Z)和横向轴线(Y)和Detektierungsachse(Z)相互之间保持一个非零角度包括。 该照明装置(19)还包括用于在进一步的照明光束路径偏转的照明光装置(36)和用于产生另外的光片,所述光片与其它光片材上的相同的照明轴从相反方向(X)的光的样品区(P), 和切换装置,用于切换照明光束路径(35)和所述另外的照明光束路径(36)之间的照明光。 所述检测装置(1)还包括一个Detektierungsobjektiv(2),用于从样本区域(P)出射的光为光的依赖于位置的检测位置敏感区域检测器(4)的映射。 在这样的显微镜,所述开关装置包括具有小于10ms的切换时间快速切换的切换,与区域检测器(4)和所述开关元件的开关时间的预定积分时间是匹配的,使得在积分时间对样品区域(P) 照明轴线(X)在每个方向上被照亮至少一次。
    • 4. 发明申请
    • METHOD FOR THE MICROSCOPIC THREE-DIMENSIONAL REPRODUCTION OF A SAMPLE
    • 方法样品的微观三维图像
    • WO2009043472A3
    • 2009-07-30
    • PCT/EP2008007686
    • 2008-09-16
    • ZEISS CARL MICROIMAGING GMBHLIPPERT HELMUTRADT BENNOKEMPE MICHAELDIETRICH CHRISTIAN
    • LIPPERT HELMUTRADT BENNOKEMPE MICHAELDIETRICH CHRISTIAN
    • G02B21/00G02B21/24G02B21/36
    • G06T7/97G02B21/002G02B21/244G02B21/367G06T7/0022
    • The invention relates to methods for the three-dimensional reproduction of a sample, according to which image information from different depth planes of the sample is stored in a locally resolved manner and the three-dimensional image of the sample is then reconstructed from said image information. In a method of this type relating to selective plane illumination microscopy (SPIM), a reference structure is applied to the illumination light, at least one fluorescent reference object is positioned next to or in the sample, images of the reference structure for the illumination light, for the reference objects or of a sample structure that is suitable for use as a reference structure are captured from at least one detection direction and evaluated, the light layer is brought into an optimal position using the result, image information for the reference object and for the sample that has been captured from several detection directions is stored, the image information stored for the reference object is used to obtain transformation operators and these form the basis of the reconstruction of the three-dimensional reproduction of the sample from the image information that has been stored for the sample.
    • 本发明涉及一种用于样品的三维成像,在从不同的平面中的试样的深度的图像信息的空间分辨被存储的方法和随后从这些画面中的试样的三维图像重建地层。 在这样的方法中,专用于选择性平面照明显微镜(SPIM)的制造方法是指,本发明提供了: - 所述照明光施加到参考结构, - 至少一个荧光基准对象旁边或在样品中被定位时, 光片被带入结果的基础上的最佳位置, - - - 至少一个检测的方向的图像被记录下来并通过参考对象或多个参考对象的检测方向的图像信息的适当的参考结构样本结构的照明光的参考结构和样品的评价 被存储, - 这些重构从所述图像信息的存储的样本的试样的三维图像获得基于使用从参考对象与变换算符所存储的图像信息。
    • 5. 发明申请
    • MICROSCOPE
    • 显微镜
    • WO2009080210A2
    • 2009-07-02
    • PCT/EP2008010455
    • 2008-12-10
    • ZEISS CARL MICROIMAGING GMBHLIPPERT HELMUTWOLLESCHENSKY RALF
    • LIPPERT HELMUTWOLLESCHENSKY RALF
    • G02B21/10G02B21/16G02B27/58
    • G02B21/06G02B21/10G02B21/16G02B26/0816G02B27/0911G02B27/58
    • The invention relates to a microscope, comprising an imaging lens (4) for imaging a sample (3) on a detector and means for illuminating the sample (3) with a light layer (7) in the focus plane of the imaging lens (4), comprising an illumination source (1) emitting coherent light. In a microscope of said kind, the means for illumination comprise a Bessel lens, creating at least two plane waves (6) from the light beam (5) and predefining propagation directions for the plane waves (6), wherein the propagation direction of each of the plane waves (6) forms an acute angle with the focus plane, the amount of the angle being the same for each of the plane waves (6), such that the plane waves (6) constructively interfere in the focus place, thus creating a light layer (7). In a similar way, the means for illumination can also comprise an optical element, with which a rotationally symmetrical Bessel beam is created from the light beam (5), for dynamically creating a light layer (7).
    • 本发明涉及一种包括成像透镜,用于到检测器的试样(3)成像(4)的显微镜和用于与成像透镜(4)的焦平面中的光片(7)照射所述样品(3),包括:相干光 辐射照射源(1)。 在这样的显微镜,用于照明的所述装置包括一个贝塞尔光学,(5)的至少两个平面波(6)和所述平面波(6)传播方向假装每个平面波(6)的与所述焦平面中的传播方向,其从光束产生 每一个都包括一个锐角,其量为每个平面波的(6)是相等的,从而使干扰平面波(6)在结构上在焦平面,从而提供光片(7)被产生。 类似地,与从所述光束(5),产生用于照明的装置,光学元件的旋转对称的贝塞尔光束,用于动态地生成光片(7)包括。
    • 6. 发明申请
    • VERFAHREN ZUR MIKROSKOPISCHEN DREIDIMENSIONALEN ABBILDUNG EINER PROBE
    • 用于样品的显微三维成像的方法
    • WO2009043472A2
    • 2009-04-09
    • PCT/EP2008/007686
    • 2008-09-16
    • CARL ZEISS MICROIMAGING GMBHLIPPERT, HelmutRADT, BennoKEMPE, MichaelDIETRICH, Christian
    • LIPPERT, HelmutRADT, BennoKEMPE, MichaelDIETRICH, Christian
    • G02B21/00G02B21/24G02B21/36
    • G06T7/97G02B21/002G02B21/244G02B21/367
    • Die Erfindung bezieht sich auf Verfahren zur dreidimensionalen Abbildung einer Probe, bei dem Bildinformationen aus unterschiedlichen Ebenen in der Tiefe der Probe ortsaufgelöst gespeichert werden und anschließend aus diesen Bildin formationen das dreidimensionale Bild der Probe rekonstruiert wird. Bei einem derartigen Verfahren, das sich auf die Methode der Selective-Plane-Illumination-Microscopy (SPIM) bezieht, ist erfindungsgemäß vorgesehen, daß - das Beleuchtungslicht mit einer Referenzstruktur beaufschlagt wird, - mindestens ein fluoreszierendes Referenzobjekt neben oder in der Probe positioniert wird, - aus mindestens einer Detektionsrichtung Bilder von der Referenzstruktur des Beleuchtungslichts, des Referenzobjektes oder einer als Referenzstruktur geeigneten Probenstruktur aufgenommen und bewertet werden, - anhand des Ergebnisses das Lichtblatt in eine optimale Position gebracht wird, - aus mehreren Detektionsrichtungen Bildinformationen von dem Referenzobjekt und von der Probe gespeichert werden, - anhand der vom Referenzobjekt gespeicherten Bildinformationen Transformationsoperatoren gewonnen und diese der Rekonstruktion der dreidimensionalen Abbildung der Probe aus den von der Probe gespeicherten Bildinformationen zugrunde gelegt werden.
    • 本发明涉及一种用于样品的三维成像,方法,其中,从不同的平面中空间分辨&OUML样品的深度的图像信息;被存储并随后&ST这个的ROAD端画中画地层样品的三维图像重建 是。 在这种涉及选择性平面照明显微镜(SPIM)方法的方法中,根据本发明。 只要&s; - 所述照明光施加到参考结构, - 至少一个荧光基准对象被定位成邻近或样品内, - 至少一个检测方向上的图像被记录和由参考对象或适当的参考结构样本结构的照明光的参考结构评价 - 的基础上 结果,光片被带入的最佳位置, - 从所存储的从所述样品的图像信息从所述参考对象的图像信息变换算符存储的数据的基础上,使样品的三维图像的重建得到的 - 被存储的多个参考对象和检测方向的图像信息的样本的 基于。

    • 8. 发明申请
    • SAMPLE HOLDING SYSTEM FOR A MICROSCOPE
    • 样品架在显微镜
    • WO2008131840A2
    • 2008-11-06
    • PCT/EP2008002681
    • 2008-04-04
    • ZEISS CARL MICROIMAGING GMBHLIPPERT HELMUTPOWER CHRISTOPHERDIETRICH CHRISTIANRADT BENNO
    • LIPPERT HELMUTPOWER CHRISTOPHERDIETRICH CHRISTIANRADT BENNO
    • G02B21/26
    • G02B21/26
    • The invention relates to a sample holding system for a microscope, comprising a sample chamber which has an upper opening and is filled with an immersion liquid, and in which a sample embedded in a transparent embedding compound is placed in a holder. The sample holding system also comprises means for the translatory movement of the sample in relation to a detection objective of the microscope, and means for rotating the sample about an essentially vertical rotational axis in a plane forming an angle different from zero with the optical axis of the detection objective. The means for rotating the sample in such a sample holding system comprise a rotational drive provided with a magnetic coupling or a belt drive and/or toothed wheel rotational drive arranged above the sample chamber, said drives transmitting the rotational movement to the holder, or the rotational movement is generated directly by the movement of the entire sample chamber.
    • 本发明涉及一种用于显微镜的样品保持器,其包括填充有浸没液体样品室中的塔,在其中一个嵌入透明灌封介质样品位于一个保持器,其特征在于,具有上开口的样品室,用于向检测目标的相对的样品的翻译 显微镜,以及用于将所述样品围绕旋转基本垂直的轴,其位于包含检测目标的一个非零角度的光轴的平面。 在这样的样品保持器,用于旋转驱动用磁耦合或样品室上方转动样品的装置置于带和/或齿轮的旋转驱动器,其传输所述旋转移动到保持架,或旋转运动是直接在整个的移动 样品室达到。
    • 9. 发明申请
    • MIKROSKOP
    • 显微镜
    • WO2011036094A1
    • 2011-03-31
    • PCT/EP2010/063665
    • 2010-09-17
    • CARL ZEISS MICROIMAGING GMBHLIPPERT, HelmutWALD, MatthiasPOWER, ChristopherHAUSCHILD, Robert
    • LIPPERT, HelmutWALD, MatthiasPOWER, ChristopherHAUSCHILD, Robert
    • G02B21/02G02B21/24G02B21/06
    • G02B21/241G02B21/002G02B21/06
    • Die Erfindung betrifft ein Mikroskop, umfassend eine Beleuchtungseinrichtung (19), mit der ein Lichtblatt zur Beleuchtung eines Probenbereichs (P) erzeugt wird, welches in Richtung einer Beleuchtungsachse (X) eines Beleuchtungsstrahlenganges und in Richtung einer Querachse (Y), welche quer zur Beleuchtungsachse (X) liegt, annähernd flächig ausgedehnt ist, außerdem umfassend eine Detektierungseinrichtung (1), mit der Licht detektiert wird, welches entlang einer Detektierungsachse (Z) eines Detektierungsstrahlengangs aus dem Probenbereich (P) abgestrahlt wird, wobei Beleuchtungsachse (X) und Detektierungsachse (Z) sowie Querachse (Y) und Detektierungsachse (Z) in einem von Null verschiedenen Winkel aufeinander stehen, und wobei die Detektierungseinrichtung außerdem im Detektierungsstrahlengang ein Detektierungsobjektiv (2) umfaßt. Bei einem solchen Mikroskop umfaßt die Detektierungseinrichtung (1) außerdem ein von einer Frontlinse des Detektierungsobjektivs (2) räumlich getrennt angeordnetes und von dieser unabhängig verstellbares optisches Detektierungselement, mittels dessen die Größe eines Detektierungsbildfeldes stufenlos variierbar ist, und / oder mittels dessen eine Detektierungsfokusebene im Probenbereich (P) stufenlos verschiebbar ist.
    • 本发明涉及包含产生与光片以照明样本区域(P),一个照明装置(19)的显微镜,其在照明轴线(X)的照明光束路径的方向上和在横向轴线(Y)的方向横向于照明的轴线 (X),也大致平坦展开,其包括一个检测装置(1),与所述光,其沿着Detektierungsstrahlengangs的从样品区的Detektierungsachse(Z)(P)发射的检测,所述照明轴线(X)和Detektierungsachse( Z)和横向轴线(Y)和Detektierungsachse(Z)相互之间保持一个非零角度,并且其中,所述检测装置还包括在Detektierungsobjektiv Detektierungsstrahlengang(2)。 在这样的显微镜,所述检测装置(1)还包括所述Detektierungsobjektivs的前透镜(2)在空间上分开且光学从此独立可调的检测元件,借助于该一个Detektierungsbildfeldes的大小排列的一个无限可变,和/或借助于所述一个Detektierungsfokusebene样本区域的 (P)是连续移动的。
    • 10. 发明申请
    • VORRICHTUNG UND VERFAHREN ZUM RÄUMLICHEN HOCHAUFLÖSENDEN ABBILDEN EINER STRUKTUR EINER PROBE
    • 装置和方法对样品的结构的空间高分辨率成像
    • WO2009100830A1
    • 2009-08-20
    • PCT/EP2009/000677
    • 2009-02-03
    • CARL ZEISS MICROIMAGING GMBHWOLLESCHENSKY, RalfLIPPERT, HelmutPOWER, ChristopherRADT, Benno
    • WOLLESCHENSKY, RalfLIPPERT, HelmutPOWER, ChristopherRADT, Benno
    • G02B21/00G02B21/10G01N21/64
    • G02B21/002G01N21/6458G02B21/10G02B27/58
    • Vorrichtung und Verfahren zum räumlich hochauflösenden Abbilden einer Struktur einer Probe, insbesondere ein Mikroskop, charakterisiert durch ein beugungsbegrenztes Auflösungsvolumen, mit mehreren zwischen unterschiedlichen Zuständen umschaltbaren Farbstoffmolekülen (UF), wobei mindestens ein Zustand fluoreszierend ist, die Fluoreszenz mit einem Objektiv (O) gesammelt und mit einem optischen System auf einen ortsauflösenden Detektor abgebildet wird, wobei die UF in mindestens einem Teil der Probe eine Verteilungsdichte aufweisen, die größer ist als das Inverse des beugungsbegrenzten Auflösungsvolumens; einer oder mehrere Lichtquellen zur Aussendung einer Umschaltstrahlung, um eine erste Untermenge der UF in der Probe umzuschalten und zur Aussendung einer Anregungsstrahlung, um die erste Untermenge der UF anzuregen, wobei mindestens eine der Lichtquellen derart angeordnet ist, dass sie die Probe durchstrahlt und eine Umschaltung und / oder Fluoreszenzanregung der UF in der Probe zumindest in einer Richtung annähernd senkrecht zur optischen Achse und insbesondere im Fokus des Objektives (O) erfolgt, wobei vorteilhaft die Umschaltung eine Photoaktivierung oder -deaktivierung der UF ist und die Lichtquelle zur Umschaltung und / oder die Lichtquelle zur Anregung eine Fokussieranordnung zur Erzeugung eines in Richtung der Beleuchtung ausgedehnten zumindest in einer Richtung zumindest annähernd senkrecht zur optischen Achse des Objektivs linienartigen Beleuchtungsbereiches vorgesehen ist.
    • 装置和试样的结构的高空间分辨率成像,尤其是显微镜,其特征在于通过衍射限制的分辨率体积,具有多个可切换的之间不同状态染料分子(UF)的方法,所述至少一个条件是荧光的,收集到的荧光与目标(O)和 由位置敏感检测器上的光学系统成像,所述UF具有在比衍射极限分辨率体积的倒数越大,样品的至少一部分上的分布密度; 一个或多个用于发射切换辐射来切换所述样品中的UF的第一子集和用于发送激发辐射来激发UF,其中所述光源中的至少一个被布置为使得其照射所述样品的所述第一子集多个光源,并切换 和/或样品中的UF的荧光激发发生在一个方向上至少近似垂直于所述光轴,并且特别是在物镜的焦点(O),其中,有利地,所述开关是光激活或UF的失活和光源,用于切换和/或 是用于在照明的方向上产生激动人心的聚焦光源的方向上至少延伸垂直于该目标线状照明区域的光学轴至少大致设置之一。