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    • 3. 发明授权
    • cDNA로부터의 비분절 네가티브 쇄 RNA 바이러스의 회수를 위한 개선된 방법
    • 从cDNA中回收非分段负链RNA病毒的改进方法
    • KR101020532B1
    • 2011-03-09
    • KR1020107014673
    • 2004-06-08
    • 와이어쓰 엘엘씨
    • 팍스크리스토퍼엘우뎀스티븐에이시두모딘데르지트에스
    • C12N7/00C12N15/86C12N15/33
    • C07K14/005A61K39/00A61K48/00A61K2039/5254A61K2039/5256A61K2039/5258C12N7/00C12N15/86C12N2760/18022C12N2760/18422C12N2760/18451C12N2760/18452C12N2760/18551C12N2760/18552C12N2760/18622C12N2760/18651C12N2760/18652C12N2760/18662C12N2760/20243C12N2760/20251C12N2760/20252C12N2760/20262
    • 본 발명은 바이러스 cDNA와 함께 필수적인 바이러스 단백질인 N, P 및 L 단백질을 RNA 폴리머라제를 암호화하는 발현 벡터로 일시적으로 형질감염된 숙주 세포내에서 공발현시킴을 포함하여, 모노네가비랄레스의 감염성의 비분절 네가티브 쇄 RNA 바이러스를 생산하는 방법을 제공한다. 다른 방법에서, 숙주 세포는 바이러스 cDNA 발현 벡터 및 RNA 폴리머라제, N 단백질, P 단백질 및 L 단백질을 암호화하는 하나 이상의 벡터로 형질감염된 후 재조합체 바이러스의 회수를 증가시키기에 충분한 조건하에 효과적인 열 쇼크에 노출시킨다. 다른 양태에서, 숙주 세포는, 바이러스 구조가 플라크 증대 세포, 통상적으로 증대 세포의 단층내로 개시된 후 형질감염되고, 조립된 감염성의 비분절 네가티브 쇄 RNA 바이러스는 공-배양물로부터 회수된다. 또한 모노네가비랄레스 목의 감염성의 비분절 네가티브 쇄 RNA 바이러스를 생산하기 위한 조성물, 당해 방법을 사용하여 생산된 재조합체 바이러스, 및 당해 재조합체 바이러스를 사용하는 면역원성 조성물 및 방법이 제공된다. 추가의 양태에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 성장- 또는 복제-결함의 분획화되지 않은 네가티브 쇄 RNA 바이러스 및 준바이러스 입자를 생산하는데 사용된다.
    • 本发明是必需的病毒蛋白N,P和L蛋白与病毒cDNA,包括在感染了瞬态与RNA聚合酶的表达载体编码转染的宿主细胞锡金球表达,单声道你比拉尔少感染的非 Lt分段的负链RNA病毒。 在替代方案中,所述宿主细胞是条件下有效的热休克足以然后用一种或多种载体编码病毒的cDNA的表达载体转染,和RNA聚合酶,N蛋白,P蛋白和L蛋白,增加重组病毒的回收 暴露出来。 在另一个实施方案中,宿主细胞,病毒结构,然后转染到所公开的斑块生长细胞的单个层,通常的细胞的增加,组装传染性非节段负链RNA病毒是共从培养物中回收。 生产在颈部的感染性非节段负链RNA病毒的这也你比拉尔单少的组合物,提供了一种使用重组病毒的免疫原性,以及使用该方法的身体组成和方法制得的重组病毒。 在进一步的实施方案中,本发明的生长方法和组合物被用于生产负链RNA病毒和病毒样颗粒不属于缺陷的或复制的半分馏。