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    • 10. 发明专利
    • Cassette as well as methods for transformation and for the selection of yeast transformants by homologous recombination
    • JP2014519840A
    • 2014-08-21
    • JP2014516449
    • 2011-06-20
    • アミカナ, バイオロジクス
    • クリステル ペリン−イーストパブロ グルシャンコフ
    • C12N15/09C12N1/16C12Q1/68
    • C12N15/81C12N15/64C12N15/905
    • 本発明は、相同組み換えによる注目する核酸フラグメントを統合する形質転換酵母細胞を選択する方法に関し、当該方法は、ポジティブ選択遺伝子、制限部位を構成する5'位および3'位の組み換え領域を含む相同組み換えサイト、を含むベクター、および前記ベクターの相同組み換えサイトに相同組み換えによる挿入する注目の核酸フラグメント、相同組み換えサイトの5'位および3'位の組み換え領域と実質的に同一の領域に隣接する前記核酸フラグメント、とを酵母細胞と接触させる工程、ならびに、(ii)上記酵母細胞を上記ベクターおよび上記注目の核酸フラグメントと共に形質転換する工程、(iii)ポジティブ選択遺伝子を伴う前記ベクターを含む酵母細胞を選択する工程であって、ネガティブ選択遺伝子はさらに前記相同組み換えサイトの下流にあるベクター中に、前記相同組み換えサイトの上流に位置するプロモーターの制御下で存在し、前記プロモーターおよびネガティブ選択遺伝子は、注目のDNAフラグメントの挿入前に前記ベクター中で作動可能に連結されていることを特徴とし、(iv)前記方法が注目のDNAフラグメントを含む酵母細胞を前記ネガティブ選択遺伝子を用いて選択する工程をさらに含む方法に関する。 本発明は、本発明を行うためのカセットおよびキットをさらに提供する。
      【選択図】図1