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    • 10. 发明公开
    • Verfahren zur gentechnologischen Herstellung von Stoffwechselprodukten in Eukaryontenzellen
    • 在Eukaryontenzellen的Verfahren zur gentechnologis Herstellung von Stoffwechselprodukten。
    • EP0273127A2
    • 1988-07-06
    • EP87115585.9
    • 1987-10-23
    • BOEHRINGER MANNHEIM GMBH
    • Hirth, Peter, Dr.Buckel, Peter, Dr.
    • C12N15/00
    • C12N15/86C12N9/644C12N9/6459C12N2740/13043C12Y304/21022C12Y304/21069
    • Zur gentechnologischen Herstellung von Stoffwechselpro­dukten in Eukaryontenzellen durch Einführung eines das gewünschte Stoffwechselprodukt kodierenden Fremdgens mit Hilfe eines retroviralen Provirus als Vektor in eine Eukaryontenzelle und Expression des durch das Fremdgen kodierten Produktes, baut man das zu exprimie­rende Fremdgen in einen in einem Vektor integrierten Provirus ein, der keine funktionsfähigen Gene für die Replikations- und Verpackungsfunktionen gag, pol oder/­und env mehr enthält, führt den so erhaltenen, den Provirus enthaltenden Vektor und einen weiteren, minde­stens eine Markerfunktion, aber keine mit den Verpak­kungsfunktionen interferierenden Gene enthaltenden Vektor in eine eukaryontische Zelle ein, die im Genom die retroviralen Gene der Replikations- und Verpackungs­funktionen gag, pol oder/und env enthält, wobei Provirus und retrovirale Gene im Genom zusammen einen kompletten Retrovirus kodieren müssen, kloniert die transfektierte Zelle und selektioniert nach Markerfunktion und gewünsch­tem Stoffwechselprodukt, infiziert mit den im Wachstums­medium der selektionierten Zellen gebildeten Retroviren eine Eukaryontenzelle und gewinnt das gewünschte Stoff­wechselprodukt aus der infizierten Zelle oder ihrem Züchtungsmedium.
    • 对于通过将逆转录病毒原病毒作为载体的逆转录病毒原病毒的编码所需的代谢产物的外源基因导入真核细胞中的代谢产物的遗传工程制备,并将外源基因表达为真核细胞, 表达的整合入前病毒中,其整合到载体中,并且不再含有复制和包装功能gag,pol和/或env的功能基因,导入含有以这种方式获得的原病毒的载体与另一种载体 含有至少一个标记功能,但没有干扰包装功能的基因转化成在基因组中含有复制和包装功能的反转录病毒基因gag,pol和/或env的真核细胞,前病毒和逆转录病毒基因是必需的 一起在基因组中编码完整的逆转录病毒,克隆转染的细胞,进行选择 根据标记功能和所需的代谢产物,在所选细胞的生长培养基中产生的逆转录病毒用于感染真核细胞,并且从感染的细胞或其培养基中分离所需的代谢产物。