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    • 9. 发明申请
    • BESTIMMUNG DER AKTIVITÄT VON PROTEASEN
    • 蛋白酶活性的测定
    • WO2009006877A2
    • 2009-01-15
    • PCT/DE2008/001104
    • 2008-07-07
    • PAPST LICENSING GMBH & CO. KGHOFER, Hans, WernerMEIER, Hans, Jörg
    • HOFER, Hans, WernerMEIER, Hans, Jörg
    • C12Q1/37C12M1/36
    • C12Q1/37G01N2333/96413
    • Es werden ein Verfahren und Vorrichtungen zur Bestimmung des Gesamtgehalts von Proteasen mit Hilfe der Messung ihrer Enzymaktivität nach vorheriger Deinhibierung offenbart. Lysosomale Proteasen sind in biologischen Proben ganz (z. B. im Blutserum) oder teilweise (z. B. in Gewebehomogenaten) inhibiert. Zur Deinhibierung wird ein Verfahren vorgeschlagen, bei dem man ein festes Trägermaterial (z. B. Nylon oder Nitrocellulose) als Kunststoffstreifen in die Messprobe eintaucht, an dem eine Inhibitorbindesubstanz kovalent oder adsorptiv gebunden ist, die den der Protease korrespondierenden Inhibitor stärker bindet als die Protease. Nach erfolgter Deinhibierung wird der Kunststoffstreifen aus der flüssigen Messprobe entfernt und die Messprobe der Enzymaktivitätsmessung zugeführt. Als besonders vorteilhaft für die Aktivitätsmessung erweisen sich fluorogene Substrate, aus denen das Fluorogen 7-Amino-4-Trifluormethylcumarin abgespalten wird. Diese Substrate ermöglichen gegenüber den herkömmlichen AMC-Substraten im Blutserum bei der Messung in Mikrotiterplatten mit dem Fluoreszenzreader eine mindestens 10fach höhere Empfindlichkeit und damit bei dieser Messanordnung, die breite Anwendung im klinischen Labor findet, eine effektive fluorimetrische Bestimmung solcher Enzymaktivitäten im Blutserum.
    • 公开了一种通过在事先解除抑制之后测量它们的酶活性来确定蛋白酶的总含量的方法和装置。 生物样品(例如血清中)或部分(例如组织匀浆中)完全抑制溶酶体蛋白酶。 对于Deinhibierung提出一种方法,其中一固体Tr的BEAR浸入germaterial至于其中抑制剂结合物质共价或吸附结合的测定试样中的塑料带材,所述第一蛋白酶抑制剂和AUML的相应的一个(例如,尼龙或硝化纤维素); rker 作为蛋白酶结合。 抑制发生后,将塑料条从液体测量样品中取出并将测量样品送至酶活性测量。 证明荧光原7-氨基-4-三氟甲基香豆素被裂解的荧光底物对活性测量特别有利。 这些衬底ERMö针对OVER的海尔克&OUML匹配; mmlichen AMC底物血清中在测量与所述荧光读数器在至少10倍的H&ouml微量滴定板;这里灵敏度,因此,在这种测量装置,有广泛应用在临床实验室中,有效荧光法测定 这种酶在血清中的活性。