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    • 1. 发明申请
    • PROCEDE DE PREPARATION DE FRAGMENTS D'ADN PAR FRAGMENTATION SELECTIVE D'ACIDES NUCLEIQUES ET SES APPLICATIONS.
    • 通过核酸选择性分解制备DNA片段的方法及其应用
    • WO2004094662A2
    • 2004-11-04
    • PCT/FR2004/000963
    • 2004-04-19
    • COMMISSARIAT A L'ENERGIE ATOMIQUEUNIVERSITE JOSEPH FOURIERCENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUEBRACHET, Anne-GaëlleRIZO, PhilippeTABERLET, PierreTEXIER-NOGUES, Isabelle
    • BRACHET, Anne-GaëlleRIZO, PhilippeTABERLET, PierreTEXIER-NOGUES, Isabelle
    • C12Q1/68
    • C12Q1/6855C12Q2525/131C12Q2521/313
    • Procédé de préparation de fragments d'ADN par fragmentation sélective d'acides nucléiques qui comprend : I. Une première sélection de fragments courts comprenant : a) la préparation de premiers fragments d'ADN double-brin F1 ô l'aide d'au moins une enzyme de restriction E1, apte ô fragmenter de manière aléatoire l'échantillon d'acides nucléiques ô analyser, en générant lesdits fragments F1 d'ADN aux extrémités franches ou cohésives, b) la ligation des extrémités desdits fragments F1 d'ADN obtenus ô l'étape a) ô au moins un adaptateur AA', c) la coupure des fragments F'1 d'ADN obtenus en b) ô l'aide d'une enzyme de restriction E2, de façon ô sélectionner une fraction de fragments courts F2, et d) la purification par tout moyen approprié de ladite fraction de fragments courts F2, et éventuellement, II. Une deuxième sélection d'un ou plusieurs sous-ensembles de fragments ô partir de la fraction de fragments courts F2 obtenue ô l'étape d), qui comprend : e) la ligation de l'extrémité libre de fragments courts F2 obtenus en d) ô au moins un second adaptateur complémentaire BB' (obtention de fragments F'2), et f) l'amplification des fragments courts F'2. Applications dudit procédé pour l'analyse des génomes et des transcriptomes.
    • 本发明涉及通过选择性片段化核酸片段制备DNA片段的方法。 本发明的方法包括涉及选择短片段的第一选择步骤,其包括:a)使用至少一种限制酶E1制备第一双链DNA片段F1,所述限制酶E1可以通过产生所述DNA产生随机片段化的待分析的核酸样品 片段F1具有钝或粘性末端; b)将步骤(a)中获得的DNA片段F1的末端连接至至少一个衔接子AA'; c)使用限制酶E2切割步骤(b)中获得的DNA片段F'1,以选择一小部分短片段F2; 和d)使用任何合适的方法来纯化上述部分的短片段F2。 本发明的方法还包括以下任选步骤,其涉及从步骤(d)中获得的短片段F2的一个或多个片段亚组的第二选择,所述任选步骤包括:e)连接短片段的自由末端 步骤d)中获得的片段F2至少一个第二互补适配体BB'(片段F'2的产生); 和f)放大短片段F'2。 本发明还涉及上述用于分析基因组和转录组的方法的应用。