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    • 5. 发明申请
    • REGULATORISCHE NUKLEINSÄUREELEMENTE
    • 调控核酸ELEMENTS
    • WO2008012142A1
    • 2008-01-31
    • PCT/EP2007/055954
    • 2007-06-15
    • BOEHRINGER INGELHEIM PHARMA GMBH & CO. KGENENKEL, BarbaraSAUTTER, Kerstin
    • ENENKEL, BarbaraSAUTTER, Kerstin
    • C12N15/85C12N15/67
    • C12N15/85C07K14/47C12N15/63C12N2800/107C12N2830/46C12N2830/85
    • Die Erfindung betrifft DNA-Sequenzen, speziell transkriptions- bzw. expressionssteigernde Elemente (TE-Elemente) sowie deren Einsatz auf eine m Expressionsvektor in Verbindung mit einem Enhancer, einem Promotor, einem Produktgen und einem Selektionsmarker. Die Erfindung beschreibt die Sequenz Nr. 1 sowie die TE-Elemente TE-01, -02, -03, -04, - 06, -07, -08, -10, -11 oder -12. Aufgrund ihrer geringen Größe besonders bevorzugt sind TE-06, TE-07 oder TE-08. Die Sequenz Nr. 1 stammt aus einer Sequenzregion, die stromaufwärts von der Kodierregion des Ub/S27a-Gens aus CHO-Zellen liegt. TE-Elemente bewirken eine Expressionssteigerung des Produktgens bei stabiler Integration in das eukaryontische Genom, bevorzugt das CHO-DG44-Genom. Chromosomale Positionseffekte werden dadurch überwältigt, abgeschirmt oder aufgehoben. Dadurch wird sowohl der Anteil an Hochproduzenten eines Transfektionsansatzes als auch der absolute Expressionslevel um bis zu fünfzehnfach gesteigert.
    • 本发明涉及一种DNA序列,特别是转录或表达增强元件(TE元件),以及它们在表达载体米结合增强子,启动子,基因产物和选择性标记的用途。 本发明描述的序列号1和TE元件TE-01,-02,-03,-04, - 06,-07,-08,-10,-11或-12。 由于它们的尺寸小,最优选TE-06,TE-07和TE-08是。 该序列号1是来自位于从CHO细胞中的UB / S27A基因的编码区上游的序列区域。 TE元件引起的增加在稳定整合产物基因的表达到真核基因组中,优选CHO-DG44基因组中。 染色体位置的影响因此被克服的,屏蔽或撤回。 因此,转染和绝对表达水平较高的生产商都的比例增加了15倍。
    • 7. 发明申请
    • NOVEL RECOMBINATION SEQUENCES
    • 新型重组序列
    • WO2009068645A1
    • 2009-06-04
    • PCT/EP2008/066430
    • 2008-11-28
    • BOEHRINGER INGELHEIM PHARMA GMBH & CO. KGENENKEL, Barbara
    • ENENKEL, Barbara
    • C12N15/90C12N15/85
    • C12N15/902C12N15/8509C12N2800/30
    • The present invention relates to novel nucleotide sequences, which are variants of att recombination sequences, involved in sequence-specific recombination of DNA in eukaryotic cells, whereby sequence specific recombination is performed by a bacteriophage lambda integrase Int. Such novel att recombination sequences being e.g. att P.b, att P.a, att L.a, att R.a and att R.b. The present invention further relates to a method of sequence-specific recombination of DNA in eukaryotic cells, comprising the introduction of a first DNA comprising a nucleotide sequence containing at least one recombination sequence into a cell, introducing a second DNA comprising a nucleotide sequence containing at least one further recombination sequence into a cell, and performing the sequence specific recombination by a bacteriophage lambda integrase Int, whereby at least one of said first or second DNAs is a novel att recombination sequences being e.g. att P.b, att P.a, att L.a, att R.a and att R.b.
    • 本发明涉及新的核苷酸序列,其是att重组序列的变体,涉及DNA在真核细胞中的序列特异性重组,由此序列特异性重组通过噬菌体λ整合酶Int进行。 这样的新颖的att重组序列是例如。 attP.b,attP.a,attL.a,attR.a和attR.b. 本发明还涉及DNA在真核细胞中的序列特异性重组的方法,包括将包含至少一个重组序列的核苷酸序列的第一DNA引入细胞,引入包含含有 至少一个进一步的重组序列进入细胞,并通过噬菌体λ整合酶Int进行序列特异性重组,由此所述第一或第二DNA中的至少一个是新的att重组序列,例如 attP.b,attP.a,attL.a,attR.a和attR.b.