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    • 3. 发明申请
    • METHOD AND KIT FOR THE SAMPLE PRESERVATION AND CELL DISRUPTION BEFORE THE EXTRACTION OF NUCLEIC ACIDS
    • 在提取核酸之前对样品保存和细胞创建的工艺和工作板
    • WO2009080824A3
    • 2009-12-03
    • PCT/EP2008068210
    • 2008-12-22
    • LERCHE KG DREHWALD RUDOLFLERCHE DIETMARWOEHLECKE HOLGERLERCHE CHRISTINA
    • EHWALD RUDOLFLERCHE DIETMARWOEHLECKE HOLGERLERCHE CHRISTINA
    • C12N1/06
    • C12N1/063
    • The invention relates to a method for preserving samples and disrupting cells which can be employed for the preparation of the extraction of nucleic acids from live cells, cell aggregates and tissue samples, and to a kit for carrying out the method. The method includes the introduction of live cells, cell aggregates or tissue samples whose nucleic acids are to be extracted into an excess of water-miscible and volatile organic liquid. The saturation of the sample with the organic liquid has an advantageous effect on the extraction of the nucleic acids, which is subsequently carried out in an aqueous medium. The mechanical cell disruption is facilitated by the virtually complete removal of the water from the cells. The biomembranes are dissolved in the organic liquid. tRNA and other RNA fractions with a low degree of polymerization, which are capable of permeating across the cell wall, can be extracted selectively without mechanical disruption. Before high-molecular-weight nucleic acids are extracted, the cells, cell aggregates or tissue samples are disrupted in the organic liquid with the aid of mechanical pulses. Since the nucleases are inactive in the dehydrated organic liquid, the biological samples or the homogenates prepared therefrom can be stored at room temperature in the organic liquid as long as desired. After incubation in the largely anhydrous organic liquid, the sample's nucleases are largely denatured. An advantageous kit according to the invention contains a mixed organic/aqueous phase with denaturing properties and, for each sample, a shaped body for dehydration which is adapted to suit the size of the preservation container, and a mixture, adapted to suit the size of the preservation container, of a few large and many small disruption bodies for the disruption in the nonaqueous medium. A considerable advantage of the invention is the fact that cooling and powerful mechanical pulses when disrupting the cells and during the extraction may be dispensed with, and that DNA extraction and cell disruption can be carried out at different times.
    • 本发明涉及一种方法,用于保存样品和其可用于制备核酸从活细胞,细胞聚集物及组织样品中提取,以及用于实施该方法的试剂盒,工作细胞破碎。 该方法包括将其核酸将被提取的活细胞,细胞聚集体或组织样品引入过度与水混溶且挥发性有机液体中。 样品与有机液体的饱和对核酸提取具有有利影响,随后发生在含水介质中。 通过从细胞中几乎完全除去水分,促进了机械细胞的破坏。 在有机液体中,生物膜被溶解。 具有低聚合度的TRNAs和其他RNA部分可渗透通过细胞壁,可被选择性地提取而无机械破坏。 在提取高分子量核酸之前,使用机械冲击在有机流体中破坏细胞,细胞聚集体或组织样品。 在脱水有机液体由于核酸酶是无活性的,生物样品或从它们在有机液体中制备的匀浆物可被存储在室温下的任何时间长度。 在大量无水有机液体中孵育后,样品特异性核酸酶大部分变性。 根据本发明的工作餐具一个有利的包含在用变性性质和所要求的保存容器脱水模体的大小,并适合于少数大型和无数小消化体在非水性介质中的中断的保存容器中的混合物的尺寸每个样品一有机/水混合相。 本发明的一个显著优点是它可以用冷却和强的机械冲动在细胞破碎,并在提取被分配和DNA的提取可以独立地在时间上从细胞的消化而设计的。
    • 4. 发明申请
    • VERFAHREN UND ARBEITSBESTECK ZUR PROBENKONSERVIERUNG UND ZUM ZELLAUFSCHLUSS VOR DER EXTRAKTION VON NUKLEINSÄUREN
    • 流程和工作刀等,用于保存样品和细胞融合在提取之前的NUCLEIC
    • WO2009080824A2
    • 2009-07-02
    • PCT/EP2008/068210
    • 2008-12-22
    • DR. LERCHE KGEHWALD, RudolfLERCHE, DietmarWOEHLECKE, HolgerLERCHE, Christina
    • EHWALD, RudolfLERCHE, DietmarWOEHLECKE, HolgerLERCHE, Christina
    • C12N1/06
    • C12N1/063
    • Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Probenkonservierung und zum Zellaufschluss, das zur Vorbereitung der Extraktion von Nukleinsäuren aus lebenden Zellen, Zellverbänden und Gewebeproben einsetzbar ist, sowie ein Arbeitsbesteck zur Durchführung des Verfahrens. Das Verfahren umfasst das Einbringen lebender Zellen, Zellverbände oder Gewebeproben, deren Nukleinsäuren extrahiert werden sollen, in eine im Überschuss vorliegende mit Wasser mischbare und flüchtige organische Flüssigkeit. Die Sättigung der Probe mit der organischen Flüssigkeit wirkt vorteilhaft auf die anschließend im wässrigen Milieu stattfindende Extraktion der Nukleinsäuren. Durch nahezu vollständige Entfernung des Wassers aus den Zellen wird der mechanische Zellaufschluss erleichtert. In der organischen Flüssigkeit werden die Biomembranen aufgelöst. tRNA und andere RNA-Fraktionen mit geringem Polymerisationsgrad, die durch die Zellwand permeieren können, lassen sich ohne mechanischen Aufschluss selektiv extrahieren. Vor der Extraktion hochmolekularer Nukleinsäuren werden die Zellen, Zellverbände oder Gewebeproben in der organischen Flüssigkeit mit Hilfe mechanischer Impulse aufgeschlossen. Da in der entwässerten organischen Flüssigkeit die Nukleasen inaktiv sind, können die biologischen Proben oder die aus ihnen hergestellten Homogenate in der organischen Flüssigkeit beliebig lange bei Raumtemperatur gelagert werden. Nach der Inkubation in der weitgehend wasserfreien organischen Flüssigkeit sind die probeeigenen Nukleasen weitgehend denaturiert. Ein vorteilhaftes erfindungsgemäßes Arbeitsbesteck enthält eine organisch/wässrige Mischphase mit denaturierenden Eigenschaften und für jede Probe einen an die Größe des Konservierungsgefäßes angepassten Entwässerungs-Formkörper sowie eine an die Größe des Konservierungsgefäßes angepasste Mischung von wenigen großen und zahlreichen kleinen Aufschlusskörpern für den Aufschluss im nichtwässrigen Milieu. Ein wesentlicher Vorteil der Erfindung besteht darin, dass auf Kühlung und starke mechanische Impulse beim Aufbrechen der Zellen und bei der Extraktion verzichtet werden kann und dass die Extraktion der DNA zeitlich vom Aufschluss der Zellen unabhängig gestaltet werden kann.
    • 本发明涉及一种方法,用于保存样品和其可用于制备核酸从活细胞,细胞聚集物及组织样品中提取,以及用于实施该方法的试剂盒,工作细胞破碎。 该方法包括引入活细胞,细胞聚集体或组织样品中,核酸被提取,在一个存在于过量与水和挥发性有机液体混溶。 与有机液体样品的饱和度具有有利的作用,对随后发生在提取核酸的含水环境。 通过从机械破碎细胞的细胞几乎完全除去水变得容易。 在有机液体中,所述生物膜溶解。 tRNA和具有低的聚合度,其可通过细胞壁渗透其他RNA成分,可以在不机械制浆被选择性地提取。 到的高分子量核酸,细胞,细胞聚集体或组织样品提取之前被消化与机械脉冲的辅助有机液体。 在脱水有机液体由于核酸酶是无活性的,生物样品或从它们在有机液体中制备的匀浆物可被存储在室温下的任何时间长度。 在基本上无水的有机液体在温育后,将样品自己核酸酶基本上变性。 根据本发明的工作餐具一个有利的包含在用变性性质和所要求的保存容器脱水模体的大小,并适合于少数大型和无数小消化体在非水性介质中的中断的保存容器中的混合物的尺寸每个样品一有机/水混合相。 本发明的一个显著优点是它可以用冷却和强的机械冲动在细胞破碎,并在提取被分配和DNA的提取可以独立地在时间上从细胞的消化而设计的。