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    • 5. 发明申请
    • A METHOD FOR CLONING OF A RARE, SPECIFICALLY MUTATED CELL
    • 用于克隆稀有特异性突变细胞的方法
    • WO2004046335A2
    • 2004-06-03
    • PCT/US2003/036882
    • 2003-11-18
    • METZ, RichardDICOLA, MikeBLAESE, Michael, R.
    • METZ, RichardDICOLA, MikeBLAESE, Michael, R.
    • C12N
    • C12N15/1034
    • The invention concerns a new method of detecting a rare product of a directed genetic alteration of a cultured cell. The method is applicable to any method of making the alteration. The method comprises sequentially using polymerase chain reaction (PCR) using an allele specific primer to preferentially amplify sequences containing one of the two linked alterations, coupled with a second technique that detects the second change in the PCR product. The second method may comprise restriction digestion, conventional DNA sequencing or pyro-sequencing. Experiments indicate that alterations as rare as one correctly altered copy in 10,000 cells can be detected using the methods provided.
    • 本发明涉及一种检测培养细胞的定向遗传改变的稀有产物的新方法。 该方法适用于任何改变方法。 该方法包括使用等位基因特异性引物依次使用聚合酶链反应(PCR)来优先扩增含有两个连接的改变之一的序列,加上检测PCR产物的第二个变化的第二个技术。 第二种方法可以包括限制性消化,常规DNA测序或热解测序。 实验表明,使用所提供的方法可以检测到10,000个细胞中一个正确改变的拷贝稀少的改变。