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1. 发明申请

WO2004108932A1 BAKTERIEN MIT ERHÖHTER PROTEINSEKRETION, NUKLEOTIDSEQUENZEN CODIEREND FÜR EIN SECA PROTEIN MIT ERHÖHTER PROTEINSEKRETION SOWIE VERFAHREN ZUR PRODUKTION VON PROTEINEN 审中-公开
标题翻译：与增加蛋白质分泌，核苷酸编码具有增加的蛋白分泌SECA蛋白质和方法蛋白质的生产菌
公开(公告)号：WO2004108932A1
公开(公告)日：2004-12-16
申请号：PCT/DE2004/001107
申请日：2004-05-28
申请人： FORSCHUNGSZENTRUM JÜLICH GMBH , KÖBERLING, Oliver , FREUDL, Roland
发明人： KÖBERLING, Oliver , FREUDL, Roland
IPC分类号： C12N15/31
CPC分类号： C12N9/14
摘要： Die Erfindung betrifft Bakterien, die auf Grund genetischer Modifikation eine erhöhte Sekretion für Proteine aufweisen, Nukleotidsequenzen sowie Genstrukturen, die mindestens ein Gen enthalten, welches für ein SecA Protein mit erhöhter Sekretion für Proteine codiert, ein SecA mit erhöhter Proteinsekretion sowie ein Verfahren zur Produktion gewünschter Proteine unter Verwendung der erfindungsgemässen Bakterien. Gegenstand der Erfindung sind Nukleinsäuren codierend für ein SecA Protein mit erhöhter Sekretion für Proteine, enthaltend eine Gensequenz SecA oder ein Allel, Homolog oder Derivat dieser Nukleotidsequenzen oder mit diesen hybridisierende Nukleotidsequenzen, welche minndestens eine Mutation aufweisen. In überraschender Weise wurde festgestellt, dass bereits eine Mutation in einem Nukleotid des secA Gens zu einer erhöhten Sekretion für Proteine bzw. zu einer erstmals möglichen Sekretion von Proteinen führt.
摘要翻译：本发明涉及细菌，由于遗传修饰，其含有编码SecA的蛋白具有增加的蛋白质的分泌的至少一种基因的蛋白质，核苷酸序列和基因结构的分泌增加，具有增加的蛋白分泌SecA的以及用于生产所期望的过程使用本发明的细菌的蛋白质。本发明涉及的核酸具有增加的含有基因序列SecA的或所述核苷酸序列或核苷酸序列与之杂交，这minndestens具有突变的等位基因，同系物或衍生物的蛋白质的分泌编码一个SecA的蛋白质。出人意料的是，发现即使在SecA的基因的核苷酸突变导致增加分泌蛋白质或蛋白质的第一种可能的分泌。

2. 发明申请

WO2004085649A1 FAKTOR PRFB (PEPTIDE CHAIN RELEASE FACTOR B) AUS BACILLUS LICHENIFORMIS UND DESSEN VERWENDUNG ZUR STEIGERUNG DER PROTEINBILDUNGSRATE 审中-公开
标题翻译： FACTOR PRFB（肽链释放因子B）来自地衣芽孢杆菌及其用于增加蛋白的形成速率
公开(公告)号：WO2004085649A1
公开(公告)日：2004-10-07
申请号：PCT/EP2004/001950
申请日：2004-02-27
申请人： HENKEL KOMMANDITGESELLSCHAFT AUF AKTIEN , HINTZ, Maren , FREUDL, Roland , FEESCHE, Jörg , BREVES, Roland
发明人： HINTZ, Maren , FREUDL, Roland , FEESCHE, Jörg , BREVES, Roland
IPC分类号： C12N15/31
CPC分类号： C12N15/70 , C07K14/32 , C12N15/74 , C12N15/75 , C12P21/02
摘要： Die vorliegende Anmeldung betrifft den Faktor PrfB (peptide chain release factor B; RF2) aus Bacillus licheniformis sowie alle mindestens zu 93% auf Aminosäure-Ebene und mindestens zu 80% auf DNA-Ebene identischen Faktoren PrfB. Diese und prinzipiell alle PrfB können zur Steigerung der Proteinbildungsrate bei Verfahren zur Proteinherstellung durch grampositive oder gramnegative Bakterien genutzt werden, inbesondere die, deren Sequenzen mit der vorliegenden Anmeldung bereitgestellt werden. Dabei handelt es sich um die aus den Spezies B. licheniformis, B. halodurans, B. subtilis und Escherichia coli . Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist somit die zusätzliche Bereitstellung des Faktors PrfB zur Steigerung der Proteinbildungsrate bei Verfahren zur Proteinherstellung durch grampositive oder gramnegative Bakterien. Besonders vorteilhaft sind hierfür in ihrer Aktivität verbesserte Faktoren PrfB. Eine hinsichtlich ihrer Aktivität verbesserte Variante wurde mit den Aminosäureaustauschen S71N/N100S in homologer Lage zur Wildtypsequenz des PrfB aus B. licheniformis gefunden.
摘要翻译：本申请涉及一种因子PRFB（肽链释放因子B; RF2）来自地衣芽孢杆菌和在氨基酸水平上所有的至少93％和至少80％的同一性在DNA水平PRFB因素。这些和原则上，所有PRFB可以通过革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌可用于增加在蛋白质生产的方法中的蛋白质的生产速度，特别是那些其序列提供与本申请。它是从物种地衣芽孢杆菌，嗜碱芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌和大肠杆菌中选择。本申请的另一个目的是这样的因子PRFB用于通过革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌增加对蛋白生产工艺的蛋白质生产速率的额外规定。是为此目的，在它们的活性提高的因素PRFB特别有利的。它们的活性变体的提高方面与氨基酸交流S71N / N100S在同源位置到PRFB地衣芽孢杆菌的野生型序列中发现。

3. 发明申请

WO2004078953A1 EIN TRANSLOKATIONSENZYM ALS SELEKTIONSMARKER 审中-公开
标题翻译：一个TRANSLOKATIONSENZYM AS选择标记
公开(公告)号：WO2004078953A1
公开(公告)日：2004-09-16
申请号：PCT/EP2004/001949
申请日：2004-02-27
申请人： HENKEL KOMMANDITGESELLSCHAFT AUF AKTIEN , HINTZ, Maren , FREUDL, Roland , FEESCHE, Jörg , BREVES, Roland
发明人： HINTZ, Maren , FREUDL, Roland , FEESCHE, Jörg , BREVES, Roland
IPC分类号： C12N1/21
CPC分类号： C12P21/02 , C12N9/14 , C12N15/74
摘要： Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist ein Selektionssystem für Mikroorganismen, welches auf der Inaktivierung eines essentiellen Translokationsenzyms und der Kurierung dieser Inaktivierung über einen gleichwirkenden Faktor beruht, welcher den betreffenden Zellen über einen Vektor zur Verfügung gestellt wird. Einen wichtigen Anwendungsbereich für dieses System bilden Verfahren zur Protein-Herstellung durch Kultivierung von Zellen eines Mikroorganismus-Stammes, die durch dieses Selektionssystem gekennzeichnet sind, insbesondere dergestalt dass auf demselben, dem kurierenden Vektor das interessierende Transgen liegt. Entsprechende Mikroorganismen, Verwendungsmöglichkeiten für Gene von Translokationsenzymen und Vektoren werden ebenfalls ausgeführt, hierunter insbesondere der Einsatz des Gens secA aus gramnegativen oder grampositiven Bakterien wie B. licheniformis.
摘要翻译：本申请是对微生物的选择系统是基于一个基本Translokationsenzyms和Kurierung这种失活的，在其上通过载体提供给各个小区的类似作用的因子的失活。对于该系统的一个重要应用包括通过在这样一种方式，在相同的，固化载体中，感兴趣的转基因位于培养微生物菌株的细胞，其特征在于，该选择系统，特别是蛋白质产生的方法。相应微生物用来Translokationsenzymen的基因，并且也进行载体，包括特别是革兰氏阴性或革兰氏阳性菌，如地衣芽孢杆菌的使用基因SECA的。

4. 发明申请

WO2009144161A1 SEKRETIONSOPTIMIERTER MIKROORGANISMUS 审中-公开
标题翻译： SEKRETIONSOPTIMIERTER微生物
公开(公告)号：WO2009144161A1
公开(公告)日：2009-12-03
申请号：PCT/EP2009/056142
申请日：2009-05-20
申请人： HENKEL AG & CO. KGAA , SCHEELE, Sandra , FREUDL, Roland , BONGAERTS, Johannes , MAURER, Karl-Heinz
发明人： SCHEELE, Sandra , FREUDL, Roland , BONGAERTS, Johannes , MAURER, Karl-Heinz
IPC分类号： C12P21/02 , C12N9/04 , C12N15/62 , C12N15/77
CPC分类号： C12P21/02 , C12N9/0006 , C12N15/63
摘要： Proteine, die einen Cofaktor umfassen, können in einem Mikroorganismus, der zugehörig ist zur Gattung Corynebacterium, verbessert sezerniert werden, sofern der Mirkoorganismus eine Nukleinsäuresequenz beinhaltet, die nicht natürlicherweise in diesem vorhanden ist und die mindestens folgende Sequenzabschnitte umfasst: a) Nukleinsäuresequenz codierend für ein Protein, welches einen Cofaktor enthält, und b) Nukleinsäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO.1 angegebenen Sequenz zu mindestens 20% identisch ist oder eine zu dieser Sequenz strukturhomologe Nukleinsäuresequenz. wobei die von der Nukleinsäuresequenz b) codierte Aminosäuresequenz mit der von der Nukleinsäuresequenz a) codierten Aminosäuresequenz derart funktionell zusammenwirkt, dass zumindest die von der Nukleinsäuresequenz a) codierte Aminosäuresequenz von dem Mikroorganismus sezerniert wird.
摘要翻译： a）编码的核酸序列：蛋白质包括可在属于棒状杆菌属的微生物是分泌可用于辅因子，条件是该微生物包含一个核酸序列，其不是天然存在于其中和至少以下序列段包括改进含蛋白质的辅助因子，和b）一个核酸序列，其是相同的，在SEQ ID NO.1所示的序列是至少20％，或结构上同源的该序列的核酸序列。其中s）编码的氨基酸序列由核酸序列的）编码的蛋白质的氨基酸序列，例如在功能上的核酸序列b的相互作用，即至少是：a）氨基酸序列是由微生物分泌的核酸序列编码的蛋白质。

5. 发明申请

WO2004078953A9 TRANSLOCATING ENZYME USED AS A SELECTION MARKER 审中-公开
标题翻译：一个TRANSLOKATIONSENZYM AS选择标记
公开(公告)号：WO2004078953A9
公开(公告)日：2005-08-04
申请号：PCT/EP2004001949
申请日：2004-02-27
申请人： HENKEL KGAA , HINTZ MAREN , FREUDL ROLAND , FEESCHE JOERG , BREVES ROLAND
发明人： HINTZ MAREN , FREUDL ROLAND , FEESCHE JOERG , BREVES ROLAND
IPC分类号： C12N1/21 , C12N9/14 , C12N15/31 , C12N15/74 , C12P21/02 , C07K14/195 , C12N1/20
CPC分类号： C12P21/02 , C12N9/14 , C12N15/74
摘要： The invention relates to a system for selecting microorganisms which inactivate essential translocating enzyme and recover said inactivation by an equivalent factor which is made available to respective cells by a vector. The inventive system is adapted, in particular to methods for producing proteins by cell culture of a micro-organism strain which are characterised by said selection system, a respective transgene being situated on a recovery vector. Said invention also relates to respective micro-organisms and to the use of translocating enzyme genes and vectors, in particular the use of
摘要翻译：本申请是对微生物的选择系统是基于一个基本Translokationsenzyms和Kurierung这种失活的，在其上通过载体提供给各个小区的类似作用的因子的失活。对于该系统的一个重要应用包括通过在这样一种方式，在相同的，固化载体中，感兴趣的转基因位于培养微生物菌株的细胞，其特征在于，该选择系统，特别是蛋白质产生的方法。相应微生物用来Translokationsenzymen的基因，并且也进行载体，包括特别是革兰氏阴性或革兰氏阳性菌，如地衣芽孢杆菌的使用基因SECA的。

6. 发明申请

WO1995020048A1 SECRETION OF PROTEINS FROM THE OUTER MEMBRANE OF GRAM-NEGATIVE BACTERIA BY GRAM-POSITIVE HOST ORGANISMS 审中-公开
标题翻译：的蛋白分泌外膜革兰氏阴性菌革兰氏阳性宿主生物体
公开(公告)号：WO1995020048A1
公开(公告)日：1995-07-27
申请号：PCT/DE1994001394
申请日：1994-11-21
申请人： FORSCHUNGSZENTRUM JÜLICH GMBH , MEENS, Jochen , KLOSE, Michael , SAHM, Hermann , FREUDL, Roland
发明人： FORSCHUNGSZENTRUM JÜLICH GMBH
IPC分类号： C12N15/62
CPC分类号： C12N9/20 , C07K14/245 , C07K2319/00 , C07K2319/02 , C07K2319/036 , C12N15/625 , G01N33/56911 , Y10S530/825
摘要： The invention relates to a process for producing outer membrane proteins of gram-negative bacteria by gram-positive host cells. To this end, a gene structure containing a gene coded for an outer membrane protein is constructed; in front of this gene there is a pro-gene sequence which codes for a propeptide of an export protein of a gram-positive bacterium. In front of the pro-gene sequence there is a pre-gene sequence which codes for a signal peptide of an export protein of a gram-positive bacterium. After the cloning of a gene structure thus constructed into a vector and transformation into a gram-positive bacterium, the outer membrane protein is expressed with a signal peptide and propeptide, transported through the membrane of the gram-positive host cell and released into the rest of the culture.
摘要翻译：本发明涉及一种用于通过革兰氏阳性宿主细胞生产的革兰氏阴性细菌的外膜蛋白的方法。为此，基因结构构成的，即包含的外膜蛋白基因的基因编码; 是该基因，促基因序列，其编码一种革兰氏阳性细菌的输出蛋白的前肽的上游。进而，被连接在亲基因序列的基因前序列编码一种革兰氏阳性细菌的输出蛋白的信号肽的上游。克隆如此构造的基因结构到载体并转化到外膜蛋白质的革兰氏阳性细菌后与该信号肽和前肽表达，通过革兰氏阳性宿主细胞的膜传递和释放到培养上清液中。

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