在本说明书中引用的所有参考文献，包括任何专利或专利申请，都在 此引入作为参考。不是承认任何参考文献构成现有技术。所述参考文献的 论述表明了它们的作者所主张的内容，本申请人对所引用文献的准确性和 相关性保留质疑的权利。可以清楚地理解，虽然在此参考了许多现有技术 出版物，但是在澳大利亚或任何其它国家，这种参考并不等于承认任何这 些文献构成本领域公知常识的一部分。
对于每个物种来说，认为在生物学上的寿命是固定的，而人的寿命是 不确定的，可以长达120年。由于本世纪的寿命预期显著地上升，所以老 年人在我们的人群中所占比例不断增加，他们的卫生保健需求将持续数十 年。
虽然自然老化的特征为人脑质量和体积的适度减少，这可能是由于脑 细胞的萎缩和/或死亡引起的，但是这些变化在神经变性病症对象的大脑中 的意义是非常深远的。这些病症中的大多数是间歇性的(即，不是由遗传突 变引起的)并且不知道原因，但是有显示在许多基因中的成百上千种不同的 突变造成几种神经变性病症的家族性(遗传)变种。在最近的十年中，在测定 神经变性病症遗传基础的调查中，发现了成打或更多中的一些藏匿这些突 变的基因。长时间的正常脑功能之后，由于特定脑部位的进行性退化(即， 神经细胞功能异常和死亡)，神经变性病症逐渐衍变。由于当神经细胞损失 超过由受影响脑部位执行的依次地功能(例如，记忆、运动)的“阙值”时， 出现疾病的症状表现，因此脑退化的实际发病可能要比临床表现早许多年。
在造成痴呆的神经疾病中，智力和高级综合认知能力逐渐受损并干扰 日常活动。在老年人群中，痴呆的确切发病率是未知的，但是在65岁以上 的老年人群中可能15％的人群患有痴呆，其中5％的人群情况严重，10％的 人群患有轻度至中等的痴呆。在85年中，65年以上人群患严重痴呆的发病 率从1％增加到了45％。有许多原因引起痴呆，但是阿尔茨海默氏病(AD)占 了65岁以上痴呆患者的50％。
AD是大脑的原发性退行性疾病。它的特点在于认知功能例如记忆、思 考、理解、计算、语言、学习能力和判断的进行性下降。当这些下降足以 损害到个人的日常生活时，被诊断为痴呆。AD表现出一种缓慢衰退的起病 隐袭。这种疾病需要与和年龄有关的认知功能的正常下降相区别。正常下 降要更小地、更逐渐地引起更轻度的残疾。尽管更早发病并不罕见，但是 AD的发病通常在65岁以后。随着年龄的增长，发病率也迅速增加(岁数每 增加5岁，发病率约增加一倍)。在老年人群中，随着寿命预期的增加，这 种疾病与个体的总数之间存在明显的关系。
AD痴呆的病原学还不清楚。大量证据表明某些形式的AD具有可遗传 素因(St George-Hyslop中的综述，2000)，并且某些ApoE同工型的表达同样 与AD的更高风险有关(Corder等人，1993；Czech等人1994)。铝的毒性累 积被认为是AD的致病因素，虽然这种假设现在已经基本上被废弃。AD患 者的大脑显示出异常沉积，其中包括β-淀粉状蛋白(Aβ)
已知Aβ存在于某些神经变性疾病患者的大脑中，但是不知道它是否是 潜在原发疾病过程的症状，或者实际上涉及所述疾病的病原学。例如，一 些作者相信Aβ沉积可以是正常脑防御机制的指示，其中大脑试图隐退Aβ； 这些沉积可以存在于正常个体的大脑中。存在神经原纤维纠缠在一起的tau 蛋白的突变，没有淀粉状斑块存在于大脑中；这种病症被称为tauopathy。
有人提出治疗AD的方法是抑制大脑中Aβ的产生。通过BACEl和γ- 分泌酶进行的APP的蛋白水解裂解生成全长的Aβ，然后将其从细胞中释放 (Nunan和Small，2000)。因此，BACEl或γ-分泌酶的抑制剂可能具有治疗 价值。另外，许多研究表明胆固醇可以影响Aβ的释放(Simons等人，1998； Hartmann，2001；Fassbender等人，2001；Frears等人，1999；Friedhoff等 人，2001)。但是，对于降低胆固醇含量的数值，在本领域中存在一些争论， 一些工作者认为胆固醇实际上是有益的。例如，Ji等人(2002)提出：通过抑 制它的低聚反应Aβ与胆固醇的结合可以预防Aβ的毒性。
在一种可选方法中，已经提出，通过舒展淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白 酶解加工，其生成Aβ淀粉样单体，许多潜在的治疗靶标是可能的(Shearman 等人，2000；Sinha等人，1999)，并且这种方法处在临床开发的早期。人们 试图通过Aβ免疫接种来清除脑部的Aβ，虽然在AD的转基因小鼠模型中是 有效的(Schenk等人1999)，但是现已发现这种方法具有显著的副作用 (Brower，2002)。
还有人提出，淀粉样原纤维的沉积在其它神经变性疾病中同样是重要 的。这些包括帕金森病、卢伊体(Lewy body)形成性痴呆、多系统萎缩症、 哈-斯氏病(Hallerboden-Spatz disease)和弥漫性卢伊体疾病。
AD病因学的一种竞争性理论是：致病步骤位于Aβ淀粉样蛋白质的脑 内生源说和累积的途径内(参见Selkoe最近述评，2001；Beyreuther等人， 2001；Bush，2001)。然而，到目前为止，还没有以此途径作为靶标的药物 或试剂已经表明在改变疾病的临床表达上或在预防或改善与神经变性疾病 包括阿尔茨海默氏病有关的认知功能下降中具有一种持久作用。
另一种假说是AD是由Aβ淀粉状蛋白的毒性累积引起的，部分原因是 由于铜和锌的过度结合，这些金属离子在最受影响的区域中很丰富。此外， 已经提出，当Zn2+和Cu2+离子与Aβ相互作用时，在原纤维和斑块中出现 Aβ的聚集(Atwood等人，1998)；这种情况已经被从缺乏突触Zn2+的动物中 获得的最新数据所证实(Lee等人，2002)。还已经提出，氧化还原活性的 Cu2+-Aβ相互作用可以由O2生成H2O2(Huang等人，1999)。Cu2+和Zn2+两 者都已经表明影响Aβ-类脂膜的相互作用(Curtain等人，2001)。
脑是一个富集金属离子的器官，最近的证据表明，金属内环境稳定的 破坏在各种与年龄有关的神经变性疾病中起关键性的作用。这些疾病的共 同特性包括错折叠蛋白质的沉积(每种疾病具有自己的特异性淀粉样蛋白质) 和由于氧化应激引起的大量细胞损伤。的确，目前数据被快速累积，金属 化学反应可以作为构成致淀粉状神经障碍例如阿尔茨海默氏病、肌萎缩性 侧索硬化(ALS)、朊病毒病(prion diseases)-包括克-雅二氏病(CJD)、传递性海 绵状脑病(TSE)、白内障、线粒体病、帕金森病和亨廷顿舞蹈病的共同点。 在这些情况中，通过生理环境(典型地存在过渡金属和有用的还原剂)中的异 常氧化还原活性，促进了特异性蛋白质的病理性聚集。[Bush，2000(Curr Opin Chem Biol.2000年4月；4(2)：184-91)]。
使用氯碘喹啉(iodochlorohydroxyquinoline)-抗生素[也已知为氯碘羟喹 (CQ)]治疗AD的方法已经在P.N.Geromylatos S.A的美国专利5,994,323和 6,001,852以及Bush等人的美国专利申请No.09/972,913中公开并且被要求 保护。1970年作为抗生素的CQ被取消，因为它与罕见的神经综合症，亚 急性脊髓视神经病(SMON)有关，其仅仅在六十年代的日本被观察到，在接 受长时间药物以及可能给予比建议剂量更高的剂量的病人中(Shiraki， 1975)。但是，最新证据表明，SMON是由特别弱人群中与维生素B12不足 有关的滥用引起的，因此在临床情况中可以进行修复研究(Yassin等人， 2000；Bush和Masters，2001)。
但是，在Geromylatos和Bush的专利中没有提供动物模型或人的体内 结果。US5,994,323公开了一种包含CQ和维生素B12的组合物，及其治疗 “对CQ给药起反应的同时抑制有害副作用的疾病或障碍”的用途。这些疾 病包括AD。美国6,001,852公开了一种使用CQ(优选与维生素B12一起)治 疗AD的方法。美国专利5,994,323和美国专利6,001,852提出的剂量范围是 10-750mg每天；美国专利5,994,323建议如果进行长期治疗，那么CQ应该 周期性地给予，给药3周后，接着进行一个1-4周的“清除”阶段。
在美国申请09/972,913中，CQ仅仅是指它解聚Aβ沉积的能力。没有 讨论神经毒性的其它机理。General Hospital公司申请的PCT/US599/05291 公开了使用CQ与特定的铜和锌螯合剂结合以促进淀粉样蛋白斑的溶解以 及抑制淀粉样蛋白斑的形成和/或抑制由Aβ引起的ROS的产生。
美国专利6,001,852还提出了一种包含CQ和维生素B12的组合物，这 种组合物可以在治疗帕金森氏病中使用；然而，在美国专利6,001,852中提 出，CQ主要是通过从黑质(substantia nigra)中清除铁起作用的。
CQ治疗AD的效力取决于它进入CNS然后从各种Aβ实体中螯合过渡 金属Cu、Zn和Fe的能力，由此减少Aβ毒性并将Aβ释放清除出去。由于 CQ差的水溶性，这限制了它的口服生物利用度，因此它的效果受到限制。 还已知，CQ进行大量的接合代谢(conjugative metabolism)，并且具有如上所 述的毒性史。CQ是一种二齿金属配体的事实使得捕获每个金属离子必须至 少需要两个分子。
发明概述
本发明提供治疗神经疾病的方法，所述神经疾病包括其特征为蛋白质 和金属间异常反应的那些。
国际专利公开WO2004/031161描述了具有两个稠合的6-员环的杂环化 合物，其中氮在1位上并且羟基或巯基基团在8位上并且至少一个环是芳 香性的。这些化合物可以用作药物或兽药，特别是用于治疗神经病症，更 具体地是用于治疗神经变性病症例如阿尔茨海默氏病。
现在，通过对下列一种或多种性质进行综合优化，我们已经开发出了 具有两个稠合的6-员杂环的化合物，其中氮原子在1位和3位上，羧基基 团在4位上并且羟基基团在8位上并且两个环是芳族的：
(a)金属鳌合(如下文所定义)；
(b)水溶性；
(c)减少的细胞毒性；
(d)淀粉分散性能；
(e)适合于CNS渗透的膜渗透性；以及
(f)代谢稳定性。
这些化合物在国际专利公开WO2004/031161的总的范围内，但是并没 有在其中具体地公开并包括通过主动转运它们集中在CNS中的药物例子， 除了它们的金属鳌合的特性还含有抗氧化活性，其在一些情况中导致金属 鳖合的性质增强并显示出一种前药策略，这种前药策略掩蔽了8-羟基部分 以有利于CNS渗透，并且利用保存在血脑屏障(BBB)内表面上的已知酯酶 活性。
尽管不希望被任何理论所限制，可以相信在2位和3位上的取代基的 性质对于提高斑的分解是很重要的。优选这些取代基用3D上是平面的。在 环结构上的平面的取代基可以使游离的配体以及金属螯合物更有效地与斑 相互作用并且分解斑。
根据本发明，这里提供了一种式I的化合物

其中
R2是H或CH2NR1R4，其中R1和R4独立地选自H、任选地被取代的 C1-6烷基和任选地被取代的C3-6环烷基；
R3是H、任选地被取代的C1-4烷基；任选地被取代的C1-4链烯基；任 选地被取代的C3-6环烷基；任选地被取代的6-员芳基，其任选地与任选地 被取代的6-员芳基或杂芳基稠合；任选地被取代的饱和或不饱和的5-或6- 员含氮杂环基，其任选地与任选地被取代的6-员芳基或杂芳基稠合； (CH2)nR6，其中n是1到6的整数并且R6是任选地被取代的C1-4烷基、任 选地被取代的C3-6环烷基、任选地被取代的饱和或不饱和的5-或6-员含氮 杂环基或任选地被取代的6-员芳基；NR8R9，其中R8和R9独立地选自H、 任选地被取代的C1-4烷基、任选地被取代的C3-6环烷基、任选地被取代的饱 和或不饱和的5-或6-员含氮杂环基或任选地被取代的6-员芳基；NHCOR10， 其中R10是任选地被取代的C1-4烷基、任选地被取代的C3-6环烷基、任选地 被取代的饱和或不饱和的5-或6-员含氮杂环基或任选地被取代的6-员芳基； CH2CONR11R12，其中R11和R12独立地选自H、任选地被取代的C1-6烷基、 任选地被取代的C2-6炔基和任选地被取代的饱和或不饱和的5-或6-员含氮 杂环基，其任选地与任选地被取代的6-员芳基稠合；和(CH2)mNHR13，其中 R13选自任选地被取代的C1-6烷基和SO2R14，其中R14选自任选地被取代的 C1-6烷基和任选地被取代的6-员芳基并且m是1到6；
R5和R7独立地选自H和卤素；并且
X是O或S，
条件是：
(i)R2和R3中至少一个不是H；
(ii)R5和R7中至少一个是卤素；并且
(iii)当X是O时，R5和R7是Cl并且R2是H的时候，则R3不是环丙基，
其盐、水合物、溶剂合物、衍生物、前药、互变异构体和/或异构体。
本发明还提供了式I的化合物作为药物的用途，优选是神经治疗药物或 神经保护药物，更优选是抗致淀粉样变性药物(antiamyloidogenic agent)。优 选地，所述神经病症是神经变性病症，更优选是神经变性淀粉样变性病， 例如阿尔茨海默氏病或帕金森病。
式I的化合物与药用或兽用可接受的载体一起以药物或兽药组合物的 形式有利地给药。
因此，本发明还提供了一种药物组合物或兽药组合物，其含有式I的化 合物和药用或兽用可接受的载体。
根据本发明，这里还提供了一种治疗、改善和/或预防神经疾病的方法， 该方法包括向需要治疗的受治疗患者给药有效量的式I的化合物。
根据本发明，这里还提供了式I的化合物在制备治疗、改善和/或预防 神经疾病的药物中的用途。
本发明还提供了式I的化合物在治疗、改善和/或预防神经疾病上的用 途。
本发明还提供了用于治疗、改善和/或预防神经疾病的式I的化合物。
本发明还提供了一种制备上述定义的式I的化合物的方法，该方法包括 以下步骤：
(a)使任选地被保护的式V的化合物

其中R5和R7如上定义，与H2NR3反应，其中R3如上定义，以形成任 选地被保护的式VII的化合物

(b)还原式VII的化合物以形成任选地被保护的式VIII的化合物

(c)环化式VIII的化合物以形成任选地被保护的式I的化合物，其中R2是 H；或者
(d)在R2CHO、R2CO2H或R2C(ORX)的存在下环化式VIII的化合物，其中 RX是任选地被取代的C1-4烷基或任选地被取代的6-员芳基。
本发明还提供了一种制备如上定义的式I的化合物的方法，其中R2是 H，该方法包括以下步骤：
(a)氨基化任选地被保护的式VI的化合物

其中R5和R7如上定义，以形成任选地被保护的式IX的化合物

IX；和
(b)将式IX的化合物与R3-L或R3OSO2RX反应，其中L是离去基团并且 RX如上所定义。
本发明还提供了一种制备如上定义的式I的化合物的方法，其中R2是 H，该方法包括以下步骤：
(a)将如上定义的任选地被保护的式VI的化合物与甲酰化试剂反应以形 成任选地被保护的式X的化合物

X，或
任选地被保护的式XI的化合物

(b)将式X或XI的化合物与含有R2的酰化剂反应以形成任选地被保 护的式XII的化合物

其中R2如上所定义或形成式XIII的化合物

XIII；和
(c)将式XII或XIII的化合物与H2NR3反应，其中R3如上所定义。
应该意识到，当存在保护基团时，可以在上面所描述的方法中的合适 步骤中将其除去。
我们也已经发现可以高产率地通过更简单的方法来制备在下文中所描 述的式V和VI的中间体的前体，当其中R5和R7都是卤素的时候。
于是，根据本发明，这里还提供了一种制备式IV的化合物的方法

其中R5和R7如上面的式I中所定义，
该方法包括将式III的化合物重氮化的步骤

可以通过还原式II的化合物方便地制备式III的化合物

其中R5和R7如上面的式IV中所定义。
式IV的化合物是制备中间体V和VI的前体

其中R5和R7如上面的式IV中所定义，其可以用于制备式II的化合物。
于是，本发明还提供了一种制备如上定义的式V的化合物的方法，该 方法包括以下步骤；
(a)将如上定义的式III的化合物重氮化以形成如上定义的式IV的化合 物；并且
(b)硝化式IV的化合物。
于是，本发明还提供了一种制备如上定义的式VI的化合物的方法，该 方法包括以下步骤；
(a)将如上定义的式IV的化合物重氮化以形成如上定义的式V的化合 物；
(b)硝化式VI的化合物以形成如上定义的式V的化合物；并且
(c)还原式V的化合物。
发明详述
在本发明的说明书中，除非上下文由于表达措词或必要暗含之外，术 语“包含”或其变体以包括的含义使用，即，是指存在所述的特征，但是 并不排除本发明的各种实施方案中另外特征的存在或加入。
必须要指出，除非在上下文中清楚地指出为相反的意思，如在本发明 的说明书中所用的，单数形式“一个”或“这个”包括复数方面。于是， 例如，参考“一种化合物”包括单一化合物以及两个或更多的化合物；等 等。
优选的式I的化合物是式IA的化合物：

其中
R5、R7和X如上面的式I所定义；并且
R3A是任选地被取代的C1-4烷基；任选地被取代的C1-4链烯基；任选地 被取代的饱和或不饱和的5-或6-员含氮杂环基，其任选地与任选地被取代 的6-员芳基或杂芳基稠合；(CH2)nR6，其中n是1到3并且R6是任选地被 取代的C3-6环烷基或任选地被取代的饱和或不饱和的5-或6-员含氮杂环基； NR8R9，其中R8是H并且R9是H或任选地被取代的C1-4烷基或任选地被取 代的6-员芳基；NHCOR10，其中R10是任选地被取代的C1-4烷基或任选地被 取代的6-员芳基。
优选R5和R7都是卤素，更优选是氯。
式IA的化合物的列举性例子显示在下面。




在式IA的化合物的列举性例子中，化合物1076、1077、1082、1083、 1084、1085、1087、1088、1089、1091、1092、1093、1097、1098、1099、 1100、1101、1107、1108、1109、1110、1112、1115和1126具有在3位上 的平面的取代基，如任选地被取代的C1-4烷基；任选地被取代的C1-4链烯基； 任选地被取代的饱和或不饱和的5-或6-员含氮杂环基，其任选地与任选地 被取代的6-员芳基稠合；(CH2)nR6，其中n是1到3并且R6是任选地被取 代的C3-6环烷基或任选地被取代的饱和或不饱和的5-或6-员含氮杂环基； 和NR8R9，其中R8是H并且R9是H或任选地被取代的C1-4烷基或任选地 被取代的6-员芳基。在这些式IA的平面化合物中，化合物1100和1101也 具有非常好的分解性(disaggregation)。
另一种优选的式I的化合物是式IB的化合物：

其中R2、R5、R7和X如上面的式I所定义。
优选的R2是CH2NR1R4，其中R1和R4独立地选自H、任选地被取代的 C1-6烷基和任选地被取代的C3-6环烷基。
优选R5和R7都是卤素，更优选是氯。
式IB的化合物的列举性例子显示在下面。

式IB的化合物的两个列举性例子都在2位具有平面的取代基，如 CH2NR1R4，其中R1和R4独立地选自任选地被取代的C1-6烷基。化合物1128 也具有非常好的分解性。
另一种优选的式I的化合物是式IC的化合物：

其中
R5、R7和X如上面的式I所定义；并且
R1c是CH2NR1R4，其中R1和R4独立地选自H和任选地被取代的C1-6 烷基；并且
R3c是任选地被取代的C1-4烷基。
优选R5和R7都是卤素，更优选是氯。
式IC的化合物的列举性例子显示在下面。

在式I的化合物上的8-羟基基团可以被封闭以形成前药，特别是酯前 药。8-羟基基团代表式I的化合物代谢的主要位置：葡萄糖醛酸或硫酸盐结 合得到准备被排泄的亲水种类。这种结合可能不通过血脑屏障。酯前药可 以保护式I的化合物不结合。然后对于血脑屏障所必须的酯酶可以释放C8- 羟基通过屏障转送来活化该化合物在CNS中的作用。
虽然不希望被理论所限制，可以相信在本发明的化合物的螯合特性中， 取代基R3和R5通常具有有限的电效应或空间效应。因此可以用取代基来调 节其他参数如细胞毒性和物理化学特性，其包括氢键供体和受体的数目、 亲脂性(ClogP，ElogP和LogD)、溶解性和极性表面积。调节这些参数有助于 优化这些化合物的药物动力学特征。可以认为，如果该取代基提供鳌合特 性时，取代基R2和R7除了调节毒性和物理化学特性还影响活性。
单独使用或在组合的词如“任选地被取代的C1-4烷基”中的术语“C1-6 烷基”或“C1-4烷基”是指分别具有1到6个和1到4个碳原子的直链或支 链的烃基团。上述烷基基团的列举是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、 异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基或己基，优选甲基、乙基或丙基。
在此所用的术语“(CH2)n”或“(CH2)m”包括直链或支链。
单独使用或在组合的词如“任选地被取代的C2-6炔基”中的术语“C1-6 炔基”是指具有2到6个碳原子并且还具有一个三键的直链或支链的烃基 团。上述基团的列举是乙炔基、1-丙炔基、1-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、 2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔 基。
单独使用或在组合的词如“任选地被取代的C3-6环烷基”中的术语“C3-6 环烷基”是指具有3到6个碳原子的饱和碳环基团。上述基团的列举是环 丙基、环丁基、环戊基和环己基，优选环丙基。
单独使用或在组合的词如“任选地与任选地被取代的6-员芳基稠合的 任选地被取代的不饱和或饱和的5-或6-员含氮杂环基”中的术语“任选地 与任选地被取代的6-员芳基稠合的不饱和或饱和的5-或6-员含氮杂环基” 是指具有至少一个氮原子和任选地选自硫和氧的其他杂原子的单环或多环 的杂环基团。
合适的杂环基团包括含氮杂环基基团如含有1到4个氮原子的不饱和 的5-或6-员杂单环基团，例如吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶 基、吡啶烷基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基或四唑基；
含有1到4个氮原子的饱和5-或6-员杂单环基团，例如吡咯烷基、咪 唑烷基、哌啶基或哌嗪基；
含有1到5个氮原子的不饱和的稠合杂环基团，例如吲哚基、异吲哚 基、中氮茚基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并三唑基或 四唑并哒嗪基；
含有1到2个氧原子和1到3个氮原子的不饱和5-或6-员杂单环基团， 例如噁唑基、异噁唑基或噁二唑基；
含有1到2个氧原子和1到3个氮原子的饱和5-或6-员杂单环基团， 例如吗啉基；
含有1到2个硫原子和1到3个氮原子的不饱和5-或6-员杂单环基团， 例如噻唑或噻二唑基；和
含有1到2个硫原子和1到3个氮原子的不饱和3到6-员杂单环基团， 例如噻唑烷基。
优选的杂环是含有1到3个氮原子的不饱和5-或6-员杂单环基团例如 吡唑基、吡啶基或嘧啶基；含有1到4个氮原子的饱和的5或6-员杂单环 基团，例如吡咯烷基或哌嗪基；含有1到5个氮原子的不饱和的稠合杂环 基团例如苯并咪唑基；含有1到2个氧原子和1到3个氮原子的饱和的5 或6-员杂氮环基团如吗啉基；或含有1到2个硫原子和1到3个氧原子的 不饱和5-到6-员杂单环基团，例如噻唑基。
单独使用或在组合的词如“任选地被取代的6-员芳基”中的术语“6- 员芳基”是指6-员碳环芳香基团。上述基团的列举是苯基。优选的芳基是 任选被取代的苯基如4-卤代苯基，更优选4-氟代苯基。
单独使用或在组合的词如“任选地被取代的6-员杂芳基”中的术语“6- 员杂芳基”是指含有1个或多个杂原子的6-员芳香杂环。例子包括吡啶基、 吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基，其中的每个可以任选地被甲基或甲氧基取代。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘，优选氟、碘或氯，更优选氯。
术语“任选取代的”是指基团可能或没有进一步被一个或多个选自以 下的基团所取代：烷基、链烯基、炔基、芳基、醛、卤素、卤代烷基、卤 代链烯基、卤代炔基、卤代芳基、羟基、烷氧基、链烯氧基、芳氧基、苄 氧基、卤代烷氧基、卤代链烯氧基、卤代芳氧基、硝基、硝基烷基、硝基 链烯基、硝基炔基、硝基芳基、硝基杂环基、氨基、烷基氨基、二烷基氨 基、链烯基氨基、炔基氨基、芳氨基、二芳基氨基、苄基氨基、二苄基氨 基、酰基、链烯基酰基、炔基酰基、芳基酰基、酰胺基、二酰基氨基、酰 氧基、烷基磺酰氧基、芳基亚磺酰氧基(arylsulphonyloxy)、杂环基、杂环氧 基、杂环氨基、卤代杂环基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷氧羰基 (carboalkoxy)、芳氧羰基(carboaryloxy)、巯基、烷硫基、苯甲硫基、酰硫基、 含磷基团等。优选地，所述的任选取代基是C1-4烷基、羟基、氟、C1-4烷氧 基或C1-4酰基。
术语“保护基团”是指一种引入的官能团，其使特定的官能基团如羟 基、氨基、羰基或羧基基团在选定的条件下不反应并且可以之后被任选地 除去来露出官能基团。羟基保护基团是可以暂时地使羟基基团的不反应。 羟基保护基团是指被羟基保护基团暂时地提供不反应的羟基基团。被保护 的苯基基团是其中所连接的反应性的基团如OH、NH2被保护基团保护。合 适的保护基团对于它们的结合和除去在本领域是已知的并且在Protective Groups in Organic Synthesis第三版，T.W.Greene和P.G.White，John Wiley & Sons，Inc.，1999(其内容在此通过引用被结合)中被描述。可以用来保护羟 基基团的保护基团的例子包括但不限于甲硅烷基基团(如三甲基甲硅烷基、 叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基)、苄基基团(如苄基、甲氧 基苄基、硝基苄基)、烷基基团(如甲基、乙基、正丙基和异丙基和正丁基、 仲丁基和叔丁基)和酰基基团(如乙酰基和苯甲酰基)。
离去基团可以是任何合适的已知的类型例如那些在J.March的 “Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms and Structure”第四 版，352-357页，John Wiley & Sons，New York，1992中公开的，其内容这 里引入作为参考。优选离去基团是卤素。
在此使用的术语“金属螯合剂”具有其最广泛的含义并且是指具有两 个或多个能与金属原子优选Cu、Zn或Fe结合的供体原子的化合物，其中 供体原子中的至少两个能与该金属原子同时结合，所得的金属络合物大于 或等于金属离子：生物配体络合物的热力学稳定性。在本发明中，使用金 属螯合剂用于治疗神经障碍不同于先前已知的“螯合疗法”的概念。“螯合 疗法”是一个与临床上除去大量金属有关的术语，例如在威尔逊病、β-地 中海贫血和血色素沉着症中。在这些疾病中，金属体内平衡的破坏被认为 是灾难性的事情，非常像引起大批问题的金属涌入的溃坝。这些化合物的 作用机理是大量金属被螯合剂所螯合并通过排泄被清除。通过比较，与本 发明神经病症有关的金属体内平衡破坏更像水龙头的恒定滴漏，如果其保 持足够长的时间，在长时间内最终将引起局部损伤。本发明的“金属螯合 剂”的目的是破坏异常金属-蛋白质的相互作用以获得金属的微妙再分配， 以及随后正常化的金属分布的目的在于一旦毒性循环是短循环的，内源性 清除过程可以更有效地处理累积的致淀粉状蛋白。
式I化合物的盐优选是药用可接受的，但是可以理解，非药用可接受的 盐同样属于本发明的范围，因为这些非药用可接受的盐在制备药用可接受 的盐的过程中可以作为有用的中间体。药用可接受的盐的实例包括药用可 接受的阳离子例如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵的盐；药用可接受的 无机酸例如盐酸、磷酸、硫酸、正磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和 氢溴酸的酸加成盐；或药用可接受的有机酸例如乙酸、丙酸、丁酸、酒石 酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲 酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、三卤代甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、 水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、 月桂酸、泛酸、丹宁酸、抗坏血酸和戊酸的盐。
此外，本发明的一些化合物可以与水或常见的有机溶剂形成溶剂合物。 这些溶剂合物包括在本发明的范围内。
优选地，衍生物是可药用衍生物。“药用可接受的衍生物”是指任何药 用可接受的盐、水合物、酯、醚、酰胺、活性代谢物、类似物、残基或没 有生物学上相反的不希望的作用并引起所需的药理学和/或生理作用的任何 其它化合物。
在此使用的术语“前药”具有广泛的含义并且包括在体内转化为式I 化合物的那些化合物。使用前药策略优化了药物向其作用部位例如脑的输 送。一方面，所述术语是指C1-6烷基或芳基酯部分的存在被设计用来阻止前 药越过BBB前的水解，其中BBB内表面上的酯酶对该酯进行水解并释放 出式I化合物的C8羟基。第二方面，所述的术语是指在2位附着抗氧化基 团，特别是3，4，5-三甲氧基苯基部分或其衍生物。然后，将脑暴露于前氧化 环境中将导致3，4，5-三甲氧基苯基的羟基化，得到2-羟基-3，4，5-三甲氧基苯 基取代基，其中的羟基基团将增强式I化合物的螯合性质。
在此使用的术语“抗氧化剂”具有其最广泛的含义并且是指能够与反 应性的氧类例如羟基基团以生成无毒性产物的方式反应的基团。实例包括 酚，例如3，4，5-三甲氧基苯基和3，5-二叔丁基-4-羟基苯基、吲哚胺例如褪黑 激素和黄酮类。其它实例可以在下面的文献(Wright，2001；Karbownik，2001； Gilgun-Sherki，2001)中找到。
在此使用的术语“互变异构体”具有广泛的含义并包括能够以两种异 构形式平衡态存在的式I的化合物。这些化合物可能在连接两个原子或基团 的键方面有差异以及化合物中这些原子或基团的位置上存在差异。
在此使用的术语“异构体”具有广泛的含义并包括结构上的、几何上 的和立体的异构体。由于式I的化合物可以具有一个或多个手性中心，因此 它能够以对映体的形式存在。
本发明的组合物包含至少一种式I的化合物以及一种或多种药用可接 受的载体以及任选其它的治疗剂。每种载体、稀释剂、佐剂和/或赋形剂必 须是药用“可接受的”，即与组合物的其它组分相容并且对给药患者是无害 的。组合物包括适合口服、直肠、鼻、局部(包括颊和舌下)、阴道或肠胃外 (包括皮下、肌内、静脉内和真皮内)给药的那些。该组合物可能方便地以单 位剂型存在并且可以通过药学领域公知的方法进行制备。这些方法包括将 活性成分与构成一种或多种助剂的载体混合在一起。通常，通过将活性成 分与液体载体、稀释剂、佐剂和/或赋形剂或精细粉碎的固体载体或两者均 匀和紧密地混合在一起，然后如果需要，对产品进行成形，这样可以制得 所述的组合物。
在此使用的术语“神经病症(neurologyicai condition)”具有广泛的含义 并且是指其中神经系统的各种细胞类型产生变性和/或由于神经变性疾病或 损伤或暴露造成损伤的病症。特别地，式I的化合物可以用于治疗产生的病 症，其中由于外科手术、感染、暴露于毒性剂、肿瘤、营养缺乏或代谢失 调所引起的神经系统细胞受损。此外，式I的化合物可以用于治疗神经变性 疾病的后遗症，例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、多发性硬化症、肌萎 缩性例索硬化症、癫痫症、药物滥用或药物成瘾(酒精、可卡因、海洛因、 苯丙胺等等)、脊髓障碍和/或损伤、营养不良或神经视网膜退化(视网膜病) 和外周神经病，例如糖尿病性神经病和/或由毒素引起的外周神经病。
在此使用的术语“神经变性疾病(neurodegenerative disorder)”是指神经 元完整性受到威胁的异常。当神经元细胞表现出降低的存活率时或当神经 元不再能传播信号时，神经元的完整性可能受到了威胁。
可以用本发明的化合物进行治疗的神经障碍包括急性间歇性血紫质 病；阿霉素引起的心肌病；AIDS痴呆和HIV-1引起的神经毒性；阿尔茨海 默氏病；肌萎缩性侧索硬化；动脉粥样硬化；白内障；脑缺血；脑性麻痹； 大脑瘤；化疗引起的器官损伤；顺铂所引起的肾毒性；冠状动脉旁路术； 克雅氏病及其与“疯牛”病有关的新变体；糖尿病性神经病变；唐氏综合 症；淹溺；癫痫症和外伤后癫痫；家族性遗传性共济失调；额颞性痴呆； 青光眼；肾小球病；血色素沉着症；血液透析；溶血；溶血性尿毒性综合 症(外氏病)；出血性中风；哈-斯氏病；心脏病发作和再灌注损伤；亨廷顿 舞蹈病；卢伊体病；间歇性跛行；缺血性中风；炎性肠病；黄斑变性；疟 疾；甲醇引起的中毒；脑膜炎(无菌的和结节状的)；运动神经元病；多发性 硬化；多系统萎缩症；心肌局部缺血；肿瘤形成；帕金森氏病；围产期窒 息；皮克氏病；进行性核上性麻痹；放射疗法引起的器官损伤；血管成形 术后再狭窄；视网膜病；老年性痴呆；精神分裂症；脓毒症；脓毒性休克； 海绵状脑病；subharrachnoid haemorrage/脑血管痉挛；硬膜下血肿；手术创 伤，包括神经外科；地中海贫血；短暂性缺血发作(TIA)；外伤性脑损伤(TBI)； 外伤性脊椎伤损；移植；血管性痴；病毒性脑膜炎；以及病毒性脑炎。
此外，本发明的化合物还可以用来增强其它治疗的作用，例如增强脑 源性神经生长因子的神经保护作用。
本发明特别是涉及引起中枢神经系统氧化性损伤的病症，包括急性和 慢性神经障碍例如外伤性脑损伤、脊髓损伤、脑缺血、中风(缺血性和出血 性)、subharrachnoid haemorrage/脑血管痉挛、大脑瘤、阿尔茨海默氏病、克 雅氏病及其与“疯牛”病有关的新变体、亨廷顿舞蹈病、帕金森氏病、家 族性遗传性共济失调、白内障、卢伊体形成痴呆、多系统萎缩、哈-斯氏病、 弥漫性卢伊体疾病(diffuse Lewy body disease)、肌萎缩性侧索硬化症、运动 神经元病(motor neuron disease)、多发性硬化(multiple sclerosis)、致命性家族 性失眠症(fatal familial insomnia)、格-斯-斯氏病(Gertsmann Straussler Sheinker disease)和荷兰型伴淀粉样变-遗传性脑出血(hereditary cerebral hacmorrhage with amyloidosis-Dutch type)。
更特别地，本发明涉及神经变性淀粉样变性病的治疗。神经变性淀粉 样变性病可以是其中神经学损伤由淀粉状蛋白沉积引起的任何病症。淀粉 状蛋白可以由各种蛋白质或多肽前体形成，包括，但不局限于Aβ、结瘢、 亨廷顿或朊病毒蛋白。
因此，所述的病症优选选自偶发性或家族性阿尔茨海默氏病(sporadic or familial Alzheimer’s disease)、肌萎缩性侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis)、运动神经元病、白内障(cataract)、帕金森病、克雅氏病 (Creutzfeldt-Jacob)及其与”疯牛”病有关的新变体、亨廷顿舞蹈病 (Huntington’s disease)、伴有卢伊体形成的痴呆(dementia with Lewy body formation)、多系统萎缩(multiple system atrophy)、哈-斯氏病和弥散性卢伊体 病。
更优选地，所述的神经变性淀粉样变性病是与Aβ-有关的病症，例如阿 尔茨海默氏病或与唐综合症有关的痴呆或几种类型的常染色体显性形式的 家族性阿尔茨海默氏病之一(在St George-Hyslop，2000中被评论)。最优选 地，与Aβ有关的病症是阿尔茨海默氏病。
在本发明所有方面的特别优选的实施方案中，在治疗前，患者患有中 等或严重受损的认知功能，其由阿尔茨海默氏病评分(ADAS)-cog测定法进 行评估，例如ADAS-cog值为25或更大。
除了减缓或阻止患者认知下降外，本发明的方法和化合物还可以适于 在治疗或预防神经变性病症中使用，或者可以适于在减缓神经变性病症症 状中使用。所述化合物能够对患有认知下降的患者提供至少部分逆转。如 果对已经确认具有趋向于患神经变性病症不断增加风险的患者给药，或者 对在临床表现前表现出认知下降的患者给药，例如轻度认知损伤或最小进 行性认知损伤，除减缓或降低认知下降速度的作用外，这些方法和化合物 能够阻止或推迟临床症状的发病。
目前，阿尔茨海默氏病以及其它痴呆通常不能被诊断，直到出现一种 或多种警告症状为止。这些症状构成被称为轻度认知缺损(MCI)的综合症， 其最近由美国神经学会(the American Academy of Neurology)定义，并且是指 患有记忆缺陷的个体的临床陈述，但是功能良好以及不满足痴呆临床标准 的那些人除外(Petersen等人，2001)。MCI的症状包括：
(1)影响职业技能的记忆丧失
(2)执行熟悉任务时有困难
(3)语言有问题
(4)对时间和地点迷惑(迷失)
(5)糟糕的或降低的判断力
(6)抽象思维有问题
(7)错放东西
(8)情绪或行为的改变
(9)个性改变
(10)不主动
MCI可以使用常规认知筛选试验法进行测定，例如小型精神状态测验 法、记忆缺陷筛选法和神经心理学筛选试验法。
在此使用的术语“患者(受试者)”是指具有需要用药物活性剂进行治疗 的疾病或病症的任何动物。所述的患者可以是哺乳动物，优选是人，或者 可以是家畜或伙伴动物。虽然本发明的化合物特别考虑用于人的治疗，但 是也适于兽医治疗，包括对伙伴动物例如狗和猫，家畜例如马、矮马、驴、 骡、骆驼、羊驼、猪、牛和羊，或动物园动物例如灵长类、猫科、犬科、 牛族和有蹄动物进行治疗。
合适的哺乳动物包括灵长目、啮齿目、兔形目、鲸目、食肉目、奇蹄 目和偶蹄目。由于奇蹄目和偶蹄目具有相似的生物学和重要的经济价值， 因此奇蹄目和偶蹄目是特别优选的。
例如，偶蹄目包括约150种分布在九个科的活物种：猪(猪科)、野猪 (Tayassuidae)、河马(河马科)、骆驼(骆驼科)、麝香鹿(Tragulidae)、长颈鹿和 okapi(长颈鹿科)、鹿(鹿科)、叉角羚(叉角羚科)和牛、羊、山羊和羚羊(牛科)。 这些动物中的许多在各个国家被用于喂养。更重要地，许多具有重要经济 价值的动物例如山羊、绵羊、牛和猪具有非常相似的生物学并且享有高度 的基因组同源性。
奇蹄目包括马和驴，这两种动物都具有重要的经济价值并且是密切相 关的。的确，马和驴进行杂种繁殖是公知的。
如在此使用的，术语“治疗有效量”是指为了有效地获得所需的治疗 反应例如为了治疗、改善或预防神经病症，所需的本发明化合物的数量。
显然，具体的“治疗有效量”将随这些因素而改变，例如待治疗的具 体病症、患者的身体状况、待治疗患者的类型、治疗的持续时间、联合治 疗的性质(如果有的话)以及所使用的具体制剂和化合物或其衍生物的结构。
此外，本发明的化合物可以与其他的药物一起提供有效的组合。可以 包括药物活性剂的任何化学上相容的组合，只要该组合没有消除式I或II 化合物的活性就可以。应当意识到，本发明的化合物和其他的药物可以分 开给药、依次给药或同时给药。
其他的药物可以包括，例如，其中所述病症是与β-淀粉状蛋白有关的 病症，特别是阿尔茨海默氏病，乙酰胆碱酯酶活性部位的抑制剂，例如 phenserine、加兰他敏(galantamine)或他克林(tacrine)；抗氧化剂，例如维生 素E或维生素C；消炎药例如氟比洛芬或布洛芬，任选改性以释放氧化一 氮(例如NCX-2216，由NicOx生产)，或雌激素药例如17-β-雌二醇。
用于制备药物组合物的方法和药物载体在本领域中是公知的，如在教 科书例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，20th Edition，Williams & Wilkins，Pennsylvania，USA中所述的。
如在此使用的，“药物载体”是药用可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂， 用于将式I的化合物给予所述的患者。所述的载体可以是液体或固体并且根 据所考虑的给药方式进行选择。每种载体必须是药用“可接受的”，即与组 合物的其它组分相容并且对患者是无害的。
式I的化合物可以口服、局部或胃肠外以含常规的无毒药用可接受的载 体、佐剂和赋形剂的剂量单位制剂形式给药。如在此使用的，术语肠胃外 包括皮下注射、给予肺或鼻腔的气溶胶、静脉、肌内、鞘内、颅内、注射 或输液方法。
本发明还提供合适的局部、口服和肠胃外药物制剂，供本发明新的治 疗方法中使用。本发明的化合物可以以片剂、含水或含油悬浮液、糖锭、 锭剂、粉剂、粒剂、乳剂、胶囊、糖浆剂或酏剂的形式口服给药。口服组 合物可以含有一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂， 以便制备药用精致的和可口的制剂。合适的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄 糖、阿司帕坦或糖精。合适的崩解剂包括玉米淀粉、甲基纤维素、聚乙烯 吡咯烷酮、黄原胶、膨润土、褐藻酸或琼脂。合适的调味剂包括薄荷油、 冬青油、樱桃、甜橙或覆盆子调味剂。合适的防腐剂包括苯甲酸钠、维生 素E、α生育酚、抗坏血酸、羟苯甲酸甲醋、对羟苯甲酸丙酯或亚硫酸氢钠。 合适的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石粉。合适的 延时剂包括单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。所述的片剂含有与无毒药 用可接受的适合于制备片剂的赋形剂混合的活性成分。
这些赋形剂例如可以是，(1)惰性稀释剂，例如碳酸钙、乳糖、磷酸钙 或磷酸钠；(2)造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或褐藻酸；(3)粘合剂，例如 淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及(4)润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。 这些片剂可以是未包衣的或者用已知技术进行包衣以延迟在胃肠道中的崩 解和吸收，并因此在较长时间内提供持续作用。例如，可以使用延时材料 例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。还可以使用在美国专利4,256,108； 4,160,452和4,265,874中所述的技术进行包衣，以形成用于控制释放的渗透 性治疗片剂。
对于体内应用来说，式I的化合物以及在本发明中使用的药学活性剂可 以通过胃肠外注射给药或通过随时间独立地或一起逐渐灌注给药。给药可 以是静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、腔内、经皮或例如通过渗透 泵输注。对于体外研究来说，可以将药剂加入或溶于一种合适的生物学上 可接受的缓冲液中，然后将其加入到细胞或组织中。
肠胃外给药制剂包括无菌水或非水溶液、悬浮液以及乳浊液。非水溶 剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油、以及可注射有机酯例 如油酸乙酯。含水载体包括水，醇/水溶液、乳浊液或悬浮液，包括盐水和 缓冲培养基。肠胃外赋形剂包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯 化钠，乳酸林格氏静脉内赋形剂包括液体和营养素补充剂、电解质补充剂(例 如基于林格氏葡萄糖的那些)等等。还可能存在防腐剂以及其它添加剂，例 如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、生长因子和惰性气体等等。
一般地，在此使用的术语“治疗”是指作用于患者、组织或细胞，以 获得一种所需的药理学和/或生理学作用。该作用可以是预防性的，用来完 全或部分预防一种疾病或其病征或症状，和/或可以是治疗性的，用来部分 或完成治疗一种疾病。如在此所使用的“治疗”包括对脊椎动物、哺乳动 物特别是人的疾病进行任何治疗或预防，并且包括：(a)预防易感染疾病但 还没有被诊断患有该疾病的患者发生该疾病；(b)抑制该疾病，即阻止它的 发展；或(c)减轻或改善该疾病的影响，即引起该疾病影响的衰退。
本发明包括各种用于改善疾病的药物组合物。根据本发明一种实施方 案的药物组合物通过使用载体、赋形剂和添加剂或助剂，将式I的化合物或 其类似物、衍生物或盐，或者将式I化合物与一种或多种药学活性剂的混合 物制备成适合患者给药的形式。通常使用的载体或助剂包括碳酸镁、二氧 化钛、乳糖、甘露糖醇以及其它糖、滑石粉、乳蛋白、明胶、淀粉、维生 素、纤维素及其衍生物、动植物油、聚乙二醇及溶剂例如无菌水、醇、甘 油和多元醇。静脉内赋形剂包括液体和营养素补充剂。防腐剂包括抗菌剂、 抗氧化剂、螯合剂和惰性气体。其它药用可接受的载体包括如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第2版Williams和Wilkins(2000)和The British National Formulary第43版(British Medical Association and Royal Pharmaceutical Society of Great Britain，2002；http://bnf.rhn.net)中所述的水 溶液，无毒赋形剂，包括盐，防腐剂，缓冲液等等，其内容在此整个引入 作为参考。药物组合物的pH值和各组分的准确浓度根据本领域熟练技术人 员已知的常规方法进行调节。参见Goodman和Gilman的The Phamacological Basis for Therapeutics(第7版，1985)。
优选以剂量单位的形式制备和给予所述的药物组合物。固体剂量单位 可以是片剂、胶囊和栓剂。对于患者的治疗，根据化合物的活性、给药方 式、疾病的性质和严重程度以及患者的年龄和体重，可以使用不同的日剂 量。但是，在某些情况下，更高或更低的日剂量也许是合适的。日剂量的 给药可以通过两种方式进行：以单个剂量单位的形式单一给药，或者在特 定时间间隔给予若干较小剂量单位和多次给予分剂量。
可以以治疗有效剂量局部或全身给予本发明的药物组合物。当然，有 效剂量将取决于疾病的严重程度和患者的体重和一般情况。典型地，体外 用剂量可以给药物组合物的原位给药用量提供有用的指导，并且可以使用 动物模型来确定治疗细胞毒性副作用的有效剂量。各种考虑事项例如描述 在Langer，Science，249：1527，(1990)中。口服制剂可以以硬胶囊的形式 使用，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合 在一起。它们还可以以软胶囊的形式使用，其中活性成分与水或油介质例 如花生油、液体石蜡或橄榄油混合在一起。
水混悬液通常含有与适于制备水混悬液的赋形剂混合在一起的活性物 质。这些赋形剂可以是(1)悬浮剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙 基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；(2)分散 剂或润湿剂其可以是(a)天然存在的磷脂例如卵磷脂；(b)环氧烷与脂肪酸的 缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯；(c)环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物， 例如十七乙烯氧基鲸蜡醇(heptadecaethylenoxycetanol)；(d)环氧乙烷与来源 于脂肪酸和己糖醇的偏酯形成的缩合产物例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸 酯，或(e)环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇酸酐形成的缩合产物，例如聚 氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯。
所述的药物组合物可以以无菌可注射含水悬浮液或含油悬浮液的形式 存在。可以根据已知的方法使用合适的分散剂或润湿剂以及上述悬浮剂配 制这种悬浮液。无菌可注射制剂还可以是在无毒胃肠外可接受的稀释剂或 溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可接 受的赋形剂和溶剂当中，可以使用的是水、林格溶液以及等渗氯化钠溶液。 此外，无菌固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的 固定油包括合成的甘油一酯和甘油二酯。此外，可以在可注射的制剂中使 用脂肪酸例如油酸。
式I化合物还可以以脂质体递药系统(liposome delivey systems)的形式给 予，例如小型单层水泡(vesicles)、大型单层水泡和多层水泡。脂质体可以由 各种磷脂制备，例如胆固醇、硬脂酰胺或卵磷脂。
式I的化合物还可以作为兽用组合物使用，兽用组合物例如可以通过本 领域常规方法进行制备。这些兽用组合物的例子包括：
(a)口服给药，外用，例如灌服(例如水溶液或非水溶液或悬浮液)；片剂 或丸剂；粉剂、粒剂或与饲料掺合在一起的小药丸；用于舌头的糊剂；
(b)肠胃外给药例如以无菌溶液或悬浮液的形式进行皮下、肌内或静脉 内注射；或者(合适时)通过乳房内注射，其中通过乳头将悬浮液或溶液引入 到乳房中。
(c)局部施用，例如以乳剂、膏剂或喷雾剂的形式施加到皮肤上；或者
(d)阴道内，例如以阴道栓剂、乳剂或泡沫的形式施用。
本发明式I化合物的剂量水平为约0.5mg到约20mg每公斤体重的数 量级，优选的剂量范围在约0.5mg到约10mg每公斤体重每天之间(约0.5 gms到约3gms每位患者每天)。可以与赋形剂或载体材料混合制备单一剂 型的活性成分的数量将随所治疗的主体和具体的给药方式而改变。例如， 人口服制剂可以含有约5mg到1g的活性化合物以及合适和方便数量的载 体物质，其中载体物质可以占总组合物的约5-95％。剂量单位形式通常含有 约5mg到500mg的活性成分。
任选地，本发明的化合物以分剂量给药方案给予，这样在整个给药方 案中至少存在两次给药。给药优选至少每两小时多至每四小时或更长时间 给予；例如可以每一小时或每半小时给予化合物。在一种优选实施方案中， 分剂量给药方案包括在第一次给药后足够长的时间间隔后(第一次给药后血 液中活性化合物的浓度降为高峰时的约5-30％)第二次给予本发明的化合 物，这样在血液中保持有效剂的有效含量。任选地，在前次给药的相应时 间间隔后，进行一次或多次给药，优选当血浆浓度降至峰值的约l0-50％时 再次给药。
然而，可以理解，任何特定患者的特定剂量水平将取决于各种因素包 括所使用具体化合物的活性、患者的年龄、体重、一般健康、性别、饮食、 给药时间、给药途径、排泄速度、药物联用以及所治疗具体疾病的严重程 度。
实施例
将只通过参考下面的非限制性实施例，对本发明进行详细的描述。
为了清楚，本发明的化合物将利用数字表示，例如1-4和2-3。所参考 的实施例化合物的结构在表1-10中给出。
在例1-6中，参考下列条目：
1、Dondoni，A.等，Synthesis，1996，641和1987，998。
2、Goldstein，H.和Schaaf，E.，Helv.Chim.Acta，1957，57(23)，132.
3、March，J.在“Advanced Organic Chemistry，reactions，mechanisms and structure”，第三版，John Wiley & Sons，1985，601页和其参考文献； 对于更具体的反应条件，参见实施例：Giencke，A.和Lackner，H.Liebigs Ann. Chem.，1990，569；Brown，L.L.等，J.Med.Chem.，2002，45，2841；Koch， V.和Schnatterer，S.Synthesis，1990，499；
4、Linderberg，M.等，Eur.J.Med.Chem.，1999，34，729。
5、T.W.Greene和P.G.M.Wuts(Eds)在“Protective Groups in Organic  Synthesis”，John Wiley & Sons，U.S.A.(1999)。
6、Follope，M.P.等，Eur.J.Med.Chem.，1992，27，291；Giencke， A.等，Liebigs Ann.Chem.，1990，569。
7、Bavetsias，V.等，J.Med.Chem.，2002，45，3692。
总的实验详述
从Aldrich购买2，4-二氯代苯甲酸(1-1)和2，4-二氯-6-硝基苯酚(2-1B)。 除非另外说明，所有的试剂/反应物都来源于Aldrich。从Lancaster购买4- 氨基-1，3，5-三甲基吡唑、2-氨基-4，6-二羟基嘧啶、4-氯甲基-3，5-二甲基异噁 唑和2-氯-4-甲基噻唑盐酸盐。根据文献1制备(2-氨基甲基)噻唑。溶剂是分 析纯等级并且按照供应的使用。在氩气下从钠和二苯甲酮中蒸馏THF。除 非另外说明，在Varian Inova 400分光计上记录1H NMR光谱(δ，相对于 TMS)；以赫兹给出H-值。在Micromass Quattro II质谱仪上记录质谱数据。
在方案1A中显示了4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸(1-6)的实际的和简 要的合成，其中的4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸(1-6)是用于制备一系列8- 羟基-3H-喹唑啉-4-酮的关键中间体，并且特别地用于合成5，7-二氯-取代的 衍生物。因此，根据Goldstein和Schaaf2，
方案1A

将市售的2，4-二氯代苯甲酸(1-1)硝化来得到2，4-二氯-5-硝基苯甲酸 (1-2)。将化合物1-2经过胺1-3和乙酰胺1-4转化为3-乙酰胺基-4，6-二氯-2- 硝基苯甲酸(1-5)。在用酸处理之后，接着碱水解1-5得到2-硝基苯甲酸1-6。 所有的步骤以高产率(大约90％)进行并且可以被修改来大规模地进行。可以 根据在方案1B中显示的路线制备化合物1-6。于是，通过标准或常规的条 件3重氮化1-3来得到醇1-7。然后根据之前在文献4中所描述的条件硝化化 合物1-7来得到1-6。在制备1-6的方案1A和1B中所显示的合成路线代表 了对文献4方法的改进，其中所显示的全部步骤得到很好的产率。用铁粉在 HOAc中在80℃将1-6还原45-50分钟，在标准处理之后，以94％的产率得 到相应的胺1-8。值得注意的是通过催化氢化4还原1-5来以仅仅14％的产 率得到胺1-8。
方案1B

根据在方案2A中用图所显示的路线合成一些新的本发明的8-羟基-3N- 取代的喹啉-4-酮。
方案2A

在方法A(方案2A)中，可以通过2-1或2-2和2-3将2-硝基苯甲酸1-6 首先转化为邻氨基苯甲酸2-4。
在方案2B中显示了用标准方法6合成2-4的另一种方法。于是根据在 之前所描述的从1-6合成2-2的条件用硫酸二甲酯处理2，4-二氯-6-硝基苯甲 酸(2-1B)得到2-2B。在标准条件下，一般地用氯化锡(II)或铁粉和冰乙酸/盐 酸，还原硝基化合物2-2B来得到邻甲氧基苯胺2-3B。在羟基胺盐酸盐的存 在下用水合氯醛处理邻甲氧基苯胺2-3B，接着通过酸水解得到吲哚满二酮 中间体2-4B。然后在碱性条件下用过氧化氢处理2-4B来得到邻氨基苯甲酸 2-4。
方案2B

在高温下一般地在150℃下用甲酰胺处理2-4来得到3H-喹唑啉-4-酮 2-5。然后将化合物2-5与合适的烷基卤化物在碱如碳酸钾的存在下反应来 得到2-6。可以用在方法C中的烷基卤化物的例子包括但不限于2-(氯甲基) 吡啶、(氯甲基)环丙烷、1-(2-氯乙基)吡咯烷、2-(2-氯乙基)-1-甲基吡咯烷、 4-(2-氯乙基)吗啉、2-氯甲基-4-甲基噻唑盐酸盐、2，6-二(氯甲基)吡啶、2-溴 代丙烷、1-氯代丙烷、1-氯-2-甲基丙烷、2-氯乙基乙基醚、(2-二乙基氨基) 乙基氯盐酸盐、1-氯代丁烷、2-氯代丁烷、巴豆基氯和4-氯甲基-3，5-二甲基 异噁唑。将结果作成表格(表1)。接着合适地用三溴化硼或用溴化氢的水溶 液在升高的温度下从2-6中除脱保护基团来得到相应的3-N-(取代的)-8-羟基 -3H-喹唑啉-4-酮2-7。在乙醚衍生物2-6M的情况时，得到醇2-7M1的氢溴 酸盐(表2)。用溴化氢的水溶液处理烯2-6P使烯双键氢溴化同时除去甲氧基 保护基团来得到化合物2-7P1。
在方法B和C(方案2A)中，可以用乙酸甲酸酐处理邻氨基苯甲酸1-8 来得到甲酰胺基化合物2-8或苯并[d][1，3]恶嗪-4-酮2-9。然后在缩合剂如三 氯化磷或原甲酸三乙基酯的存在下在升高的温度下将化合物2-8(或2-9)与 合适的胺反应，一般地用甲苯或二甲苯在接近回流的温度来得到8-羟基-3H- 喹唑啉-4-酮2-7。可以用于方法B和C中的胺的例子包括但不限于2-氨基 -5-甲基噻唑、2-(2-氨基乙基)吡啶、3-氨基吡啶、4-氨基吗啉、1-氨基-4-甲 基哌嗪、1-氨基吡咯烷、4-(氨基甲基)哌啶、1-氨基哌嗪、5-氨基-1-乙基吡 唑、5-氨基-2-甲氧基吡啶、4-氨基-1，3，5-三甲基吡唑、2-氨基-1-甲基苯甲酰 胺、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-5-氯吡啶和4-氨基哌啶。将结果作成表(表 3)。在表4中所显示了可以根据这些方法制备的其他8-羟基-3H-喹唑啉-4- 酮。
在方法D(方案2A)中，可以在活化剂如CDI的存在下首先用合适的胺 处理2-硝基苯甲酸1-6来得到合适的N-(取代的)苯甲酰胺2-10。接着还原硝 基基团和偶合得到的胺2-11，一般地用甲酸在缩合剂如CDI或原甲酸三乙 基酯的存在下或用甲酰胺来得到相应的3-N-取代的衍生物2-7。
可以用被合适地O-保护的邻氨基苯甲酸如2-4(方案3)来重复方案B和 C(方案2A)。在这些情况中，除去O-保护的基团之后得到8-羟基-3H-喹唑 啉-4-酮2-7。
方案3

可以根据在方案4中所描述的路线制备2-取代的8-羟基-3H-喹唑啉-4- 酮。因此，根据方法E，用活化剂如亚硫酰氯处理邻氨基苯甲酸1-6并且接 着将中间体酰氯与氨水反应来得到相应的苯甲酰胺4-1。一般地用SnCl2或 铁粉/HOAc还原硝基化合物4-1，来得到相应的胺4-2。可以依次将胺4-2 用氯代乙酰基乙酸或2-氯-1，1，1-三甲氧基乙烷处理来得到5，7-二氯-2-氯甲 基-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(4-3A)。可以通过方法F从甲氧基邻氨基苯甲酸 衍生物2-4制备2-氯甲基化合物。于是，在碱一般地为甲醇钠的存在下用氯 代乙腈处理72-4来得到4-3B。用一些胺对2-氯甲基衍生物4-3A(或4-3B) 进行进一步的制备来得到许多新的2-取代的衍生物4-14A-4-16D，这些胺 如，但不限于，二甲基胺、甲胺和乙胺。
可以根据如在方案4中所显示的方法G通过酸2-1制备许多2，3-二取代 的8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮4-9。因此，可以在活化剂的存在下用合适的胺处 理2-1来得到相应的苯甲酰胺4-5，然后一般地用SnCl2或铁粉/HOAc将这 些苯甲酰胺4-5还原为4-6。然后将化合物4-6转化为2-氯甲基衍生物4-7， 并且依次用类似于之前在方法E和F中所描述的反应条件将其转化为4-8。 在脱保护之后，一般地在接近回流的温度使用HBr的水溶液，4-8提供相应 的2，3-二取代的衍生物4-9。
也可以通过方法H和I(方案4)得到2，3-二取代的8-羟基-3H-喹唑啉-4- 酮4-9。在方法H中，可以用含NP的酰化剂如2-叠氮乙酰氯、邻苯二甲酰 -氨基乙酰氯和[(苯基甲基)氨基]乙酰氯将邻氨基苯甲酸1-8合适地酰化。相 应地，含NP基团的例子是叠氮、邻苯二甲酰亚氨基和苄胺。接着在乙酸酐 的存在下在升高的温度下，一般地在接近回流温度下缩合中间体4-10来提 供苯并[d][1，3]恶嗪-4-酮4-11。在合适的胺(R1NH2)的存在下，4-11得到4-12； 4-12依次通过缩合得到4-13。合适的缩合剂包括PCl3、原甲酸三乙基酯、 CDI和Ac2O。将-NP部分转化为氨基基团的条件将取决于特定的NP基团； 对于上述的基团，它们分别是还原、二乙胺和催化氢解(可以在其他地方发 现后面两种转化的条件的更多例子5)。在方法I中，用合适的胺(NR1R2)缩 合邻氨基苯甲酸1-8来得到胺4-14。随后用氯代乙酰氯和胺依次地处理4-14 来得到4-9。
方法4

根据在方案5中所显示的路线制备3-氨基-5，7-二氯-8-羟基-3H-喹唑啉 -4-酮(5-4)和一些3-(取代的)氨基-3H-喹唑啉-4-酮。N-甲酰化甲酯2-3来得到 5-1，一般地用乙酸甲酸酐。另外地，用原酸酯如原甲酸三乙基酯处理2-3 来得到亚胺酸酯5-2。当用肼处理时，5-1或5-2得到3-氨基-3H-喹唑啉-4- 酮5-3。一般地用HBr的水溶液在120℃除去在5-3中的保护基团来得到5-4。 用合适的酰卤进一步处理3-氨基化合物5-4来得到相应的3-取代的酰化衍 生物5-5A-5-5C。在脱保护之后，可以从5-2通过用合适地被取代的肼如4- 氟代苯基肼、4-甲氧基苯基肼或2，4-二氟代苯基肼替代水合肼来得到衍生物 如5-7A-5-7C。在脱保护之后，在一般地为乙醇的合适的溶剂中，用烷基卤 化物从5-3得到化合物5-7D-5-7G。另外地，也可以通过用合适的烷基化的 肼如乙基肼、丙基肼和(环丙基)甲基肼处理5-2来制备化合物5-7D-5-7G。
方案5

通过用烷基卤化物或酰化剂处理可以将胺2-7F2、2-7Q2、2-7R2、2-7X2 和2-7X2制备成一系列衍生物如6-1-6-6。将6-1-6-6的数据制成表(表9)。
根据在方案6中所显示的方法可以从相应的3H-喹唑啉-4-酮2-6制备许 多3-取代的3H-喹唑啉-4-酮7-2。于是用P4S10或Lawesson试剂处理2-6来 得到硫酮7-1。接着合适地用BBr3除脱保护基团来得到所需要的3-取代的 3H-喹唑啉-4-硫酮7-2。
方案6

将氯化锡(II)水合物(50克，0.29摩尔)加入到2，4-二氯-5硝基苯甲酸 (1-2)2(10.0克，0.45摩尔)的EtOH(200毫升)的溶液中。在70℃搅拌混合物 0.5小时，冷却并且倾倒入冰中。将混合物的pH调至8(饱和的碳酸氢钠)。 在室温下将悬浮液搅拌5小时并且再酸化至pH5(冰醋酸)。用乙酸乙酯依次 地地萃取得到的白色悬浮液，合并萃取物，用盐水洗涤，干燥并且浓缩来 得到所需要的乳白色固体的胺(1-3)(8.8克，96％)。
5-氨基-2，4-二氯苯甲酸(1-3)：1H NMR(CD3OD)：δ7.30(s，1H)，7.27(s， 1H)。
将乙酸酐(27毫升)加入到在冰醋酸(150毫升)中的5-氨基-2，4-二氯苯 甲酸(1-3)中(8.0克，0.041毫升)。在室温下保持搅拌溶液0.5小时并且浓缩 来得到所需要的白色固体的乙酰胺(1-4)(9.6克，96％)。
5-乙酰氨基-2，4-二氯苯甲酸(1-4)：1H NMR(CD3OD)：δ8.32(s，1H)，7.62 (s，1H)，2.19(s，3H)。
将5-乙酰氨基-2，4-二氯苯甲酸(1-4)(9.6克，0.039毫升)以少量在30分 钟内加入到搅拌的冰冷的发烟硝酸(1.8毫升，0.043摩尔)和浓硫酸(120毫升) 的溶液中。在加入完成之后，在30分钟和60分钟间隔时，加入更多的发 烟硝酸(17毫升)和浓硫酸(80毫升)。然后将反应混合物在0℃再保持搅拌2.5 小时，使其加热到12-16℃并且在这个温度下保持搅拌直到耗尽所有的原料 (大约3小时)。将溶液倾倒入冰中并且用乙酸乙酯萃取(3x)。合并有机萃取 物，用盐水洗涤，干燥并且浓缩来得到橙色固体的3-乙酰氨基-4，6-二氯-2- 硝基苯甲酸(1-5)(9.8克，86％)。
3-乙酰氨基-4，6-二氯-2-硝基苯甲酸(1-5)：1HNMR(CD3OD)：δ8.01(s，1 H)，2.13(s，3H)。
将3-乙酰氨基-4，6-二氯-2-硝基苯甲酸(1-5)(9.7克，0.033摩尔)加入到 KOH(18.7克，0.034摩尔)的水溶液中(85毫升)。将溶液在回流下加热18小 时并且冷却至室温。加入浓HCl将pH调节至0。用乙酸乙酯和水稀释混合 物并且在室温下保持搅拌30分钟。分层；用乙酸乙酯萃取水层(3x)，将萃 取物与原有机层合并，用盐水洗涤，干燥并且浓缩来得到暗红色固体的4，6- 二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸(1-6)(7.4克，89％)；m.p.188-189℃(文献4m.p. 186℃(分解))。
4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸(1-6)：1HNMR(CD3OD)：δ7.79(s，1H)； 质谱：m/z250，252，254(M+-1，100％，66％，11％)。
5，7-二氯-8-甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮(2-5)的制备

将硫酸二甲酯(40毫升)加入到正在搅拌的1-6(15.0克，0.059摩尔)、碳 酸钾(66克，0.5摩尔)和DMF(300毫升)的混合物中。将得到的混合物在60 ℃保持搅拌过夜并且然后在120℃搅拌2小时。真空浓缩反应混合物。将得 到的微红棕色的残余物用水洗涤并且干燥。得到橙色固体的2-2(14.6克， 88％)。-1HNMR(CDCl3)：δ7.65(s，1H)，4.01(s，3H)，3.92(s，3H)。
将铁粉(18.2克，0.33摩尔)加入到2-2(13.3克，0.048摩尔)在乙酸(120 毫升)中的溶液中。在55℃搅拌混合物1.5小时并且然后趁热通过硅藻土(乙 酸乙酯)过滤。浓缩滤液，加入乙酸乙酯和饱和的碳酸钠，并且过滤混合物(硅 藻土)。分离有机层，用水洗涤，干燥(K2CO3)并且浓缩来得到乳白色固体的 2-3(11.6克，97％)。-1HNMR(CDCl3)：δ6.71(s，1H)，3.89(s，3H)，3.79(s，3 H)。
向正在搅拌的2-3(11.5克，0.046摩尔)在甲醇(250毫升)和水(70毫升) 中的溶液中加入2M NaOH(25毫升)。将反应混合物在回流下加热1小时， 再加入2M NaOH(25毫升)，并且将反应混合物在回流下再加热1小时。冷 却溶液并且浓缩来除去甲醇。将浓缩物溶解在水中，用乙酸乙酯萃取，并 且将pH调节至1-2(浓HCl)。用乙酸乙酯萃取乳白色的悬浮液(3x)。将合并 的萃取物用盐水清洗、干燥并且浓缩来得到浅棕色固体的2-4(10.4克，95％)。 -1H NMR(CD3OD)：δ6.70(s，1H)，3.80(s，3H)。
在150℃加热正在搅拌的2-4(16.9克，0.072摩尔)和甲酰胺(150毫升) 的悬浮液8小时并且然后将其冷却至室温。加入水，通过过滤分离得到的 沉淀，用水清洗并且真空干燥来得到浅棕色固体的2-5(13.0克，73％)。-1H NMR(CD3OD)：δ8.08(s，1H)，7.60(s，1H)，3.98(s，3H)。
实施例1-通过将5，7-二氯-8-甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮(2-5)烷基化并且然 后脱保护来制备化合物2-7A2-2-7R2

将正在搅拌的2-5(1.5克，6.1毫摩尔)和氯化物(7.3毫摩尔)在无水 DMF(30毫升)中的溶液中加入K2CO3(9.3毫摩尔)并且将得到的混合物在95 ℃加热16小时，冷却并且浓缩。用乙酸乙酯或二氯甲烷(3x)萃取残余物， 合并萃取物并且用水和盐水依次地地清洗，并且干燥。接着通过用合适的 溶剂研磨、重结晶或SiO2-硅胶色谱纯化来得到相应的3-取代-8-甲氧基-3H- 喹唑啉-4-酮(2-6)。
所用的氯化物的例子：1-(2-氯乙基)吡咯烷得到2-6A、2-(氯甲基)环丙 烷得到2-6B、2-(2-氯乙基)-1-甲基吡咯烷得到2-6C、2-(氯甲基)吡啶得到 2-6D、4-(2-氯乙基)吗啉得到2-6E、2-氯甲基-4-甲基噻唑盐酸盐得到2-6F、 4-氯甲基-3，5-二甲基异噁唑得到2-6G、2-溴代丙烷得到2-6H、1-氯代丙烷 得到2-6I、1-氯-2-甲基丙烷得到2-6J、1-氯代丁烷得到2-6K、2-氯代丁烷得 到2-6L、2-氯乙基乙基醚得到2-6M、(2-二乙基氨基)乙基氯盐酸盐得到2-6N、 2-氯甲基-3-甲基吡啶盐酸盐得到2-6O、巴豆基氯得到2-6P、2，6-二(氯甲基) 吡啶得到2-6Q和1-氯代乙烷得到2-6R。在1-(2-氯乙基)吡咯烷盐酸盐、2- 氯甲基-3-甲基吡啶盐酸盐和2-氯甲基-4-甲基噻唑的盐酸盐的情况中，使用 2.2当量的K2CO3。
2-(氯甲基)-3-甲基吡啶盐酸盐的制备
在0℃向正在搅拌的2，3-二甲基吡啶(5.00克，46.7毫摩尔)在氯仿(100 毫升)中的溶液中在5分钟内分部分地加入m-氯过苯甲酸(12.0克至多77％ 的试剂)。将反应混合物在0℃再搅拌30分钟并且然后将其加热到室温。在 16小时之后，将反应混合物浓缩至干，加入水(20毫升)并且将混合物的pH 调节至8(饱和的NaHCO3)。浓缩混合物并且用二氯甲烷/甲醇(4∶1)萃取残 余物。将萃取物浓缩为白色固体。然后柱纯化(SiO2；二氯甲烷/甲醇，9∶ 1)来得到白色固体的2，3-二甲基吡啶-N-氧化物(4.80克，83％)。
将搅拌的2，3-二甲基吡啶-N-氧化物(4.80克，39.0毫摩尔)在乙酸酐(50 毫升)中的溶液在回流下加热过夜，冷却并且浓缩至干来得到棕色油状的(2- 乙酸基甲基)-3-甲基吡啶(6.34克)。在室温下搅拌粗品的(2-乙酸基甲基)-3- 甲基吡啶和K2CO3(10.0克，72.4毫摩尔)、甲醇(60毫升)和水(30毫升)的混 合物过夜。将固体过滤掉并且将滤液浓缩至干。在柱色谱(SiO2；二氯甲烷/ 甲醇，9∶1)纯化之后，得到浅棕色油状的(2-羟基甲基)-3-甲基吡啶(2.86克， 2步总为59％)。
(2-羟基甲基)-3-甲基吡啶：1H NMR(CDCl3)：δ8.41(d，J＝4.9，1H)，7.48 (d，J＝7.5，1H)，7.16(dd，J＝4.9和7.5，1H)，4.69(s，2H)，4.00(br，1H)，2.22 (s，3H)。
在10分钟内向冰冷的(2-羟基甲基)-3-甲基吡啶(1.00克，8.1毫摩尔)在 二氯甲烷(30毫升)中的溶液中逐滴地加入亚硫酰氯(2.5毫升)在二氯甲烷(6 毫升)中的溶液。除去冰浴，在室温下搅拌反应混合物2小时，浓缩，并且 然后用乙醚清洗。得到浅黄色固体的(2-氯甲基)-3-甲基吡啶盐酸盐(1.44克， 99％)。
(2-氯甲基)-3-甲基吡啶盐酸盐：1H NMR(CD3OD)：δ8.72(d，J＝5.9，1H)， 8.54(d，J＝8.1，1H)，8.00(dd，J＝5.9和8.1，1H)，5.05(s，2H)，2.64(s，3H)。
所制备的化合物2-6A-2-6R的产率和色谱数据列在表1中。
脱保护
方珐A：向正在搅拌的8-甲氧基衍生物2-6(1.9克，5.6毫摩尔)在二氯 甲烷(15毫升)中的冰冷的溶液中加入BBr3(12毫升1M的二氯甲烷溶液，12 毫摩尔)。然后在45℃搅拌溶液18小时，冷却，并且加入甲醇(20毫升)。 浓缩混合物。通过重复地加入甲醇和蒸发来除去过量的硼化物。用乙醚清 洗(3x)粗产品氢溴酸盐。分离一些作为游离碱的化合物：于是加入饱和的 Na2CO3(20毫升)并且用二氯甲烷萃取混合物(5x)。用水清洗合并的萃取物， 干燥并且浓缩。通过用合适的溶剂简单地清洗、重结晶或SiO2-柱色谱纯化 残余物来得到相应的8-羟基衍生物2-7。
方珐B：在氩气氛下将3-取代-8-甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮(2-6)(5.0毫摩尔) 在48％的氢溴酸(25毫升)中的溶液在回流下加热16-18小时，并且使其冷却 至室温。将反应混合物浓缩至干或通过过滤分离其形成的沉淀。然后用乙 醚、二氯甲烷和乙腈依次地地清洗粗产品固体来得到相应的作为氢溴酸盐 的8-羟基化合物(2-7)。分离一些作为游离碱的化合物(条件参见上面的方法 A)。
方法C：将8-甲氧基化合物2-6(4.46毫摩尔)和48％的氢溴酸(23毫升) 的溶液在120℃加热2-10小时并且使其冷却至室温。加入水(30毫升)并且 将pH调节至5(NaOH粒)。通过过滤分离得到的沉淀，用水清洗并且真空干 燥。
当乙醚衍生物2-6M的情况中，得到醇2-7M1的氢溴酸盐(表2)。根据 方法A用BBr3处理烯2-6P来得到2-7S1。根据方法B通过用HBr水溶液处 理2-6P来得到2-7P1。
化合物2-7A1-2-7S1的产率和色谱数据列在表2中。
表1根据实施例1制备的化合物2-6A-2-6R



表2根据实施例1从2～6制备的化合物2-7A1-2-7R1




#8-OH和HBr(其中可使用)的化学位移并没有包括在归属中
制备2-氨基-4，6-二氯-3-羟基苯甲酸(1-8)

在80℃加热4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸(1-6)(700毫克，2.78毫摩尔)、 铁粉(400毫克，7.16毫摩尔)和冰乙酸(13毫升)的混合物50分钟，冷却，并 且过滤掉固体。将滤液浓缩至棕色的固体。接着SiO2-硅胶柱色谱(乙酸乙酯 /HOAc，100∶1-100∶3)得到浅棕色固体的2-氨基-4，6-二氯-3-羟基苯甲酸 (1-8)(582毫克，94％)。-1H NMR(DMSO-d6)：δ6.68(s)；它符合文献4。
4，6-二氯-2-甲酰氨基-3-羟基苯甲酸(2-8)的制备

在50-60℃加热甲酸(1.04毫升90％的溶液)和乙酸酐(2毫升)的溶液2小 时并且冷却。然后在室温下分部分将2-氨基-4，6-二氯-3-羟基苯甲酸(1-8)(425 毫克，1.91毫摩尔)加入到正在搅拌的乙酸甲酸酐中。在2.5小时之后，将 反应混合物倾倒在冰和水的混合物上；通过过滤分离固体。提供了橙色固 体的4，6-二氯-2-甲酰氨基-3-羟基苯甲酸(2-8)(320毫克，67％)。-1H NMR (DMSO-d6)：δ8.76(s，1H)，8.29(s，1H)，8.13(s，1H)；质谱：m/z 248，250，252 (M+-1，100％，66％，11％)。
实施例2-PCl3-介导的用胺缩合4,6-二氯-2-甲酰氨基-3-羟基苯甲酸(2-8)

在2分钟内向正在搅拌的4，6-二氯-2-甲酰氨基-3-羟基苯甲酸(2-8)(200 毫克，0.80毫摩尔)、胺(0.88毫摩尔)和甲苯(5毫升)的混合物中逐滴地加入 PCl3(0.12毫升，1.38毫摩尔)的甲苯(1毫升)溶液。将得到的悬浮液在回流下 加热4-16小时，并且冷却。加入饱和的NaHCO3使pH为9。然后将混合物 的pH再调节到7(5N HCl)并且用二氯甲烷萃取(3x)，并且合并萃取物并且干 燥(Na2SO4)。除去挥发物来得到5，7-二氯-8-羟基-3-(取代的)-3H-喹唑啉-4-酮 (2-7)。在一些情况中，通过用合适的溶剂清洗或SiO2-硅胶柱色谱或重结晶 来纯化粗产品，合适的溶剂一般地为乙醚或5％甲醇的乙醚溶液；化合物 2-7A2和2-7M2的特征数据显示在表3中。根据实施例2从2-8制备的其他 化合物2-7显示在表4中。
在实施例2中所用的胺的例子：(C-噻唑-2-基)甲胺得到2-7A2、2-(2-氨 基乙基)吡啶得到2-7B2、3-氨基吡啶得到2-7C2、4-氨基吗啉得到2-7D2、 1-氨基-4-甲基哌嗪得到2-7E2、4-(氨基甲基)哌啶得到2-7F2、5-氨基-l-乙基 吡唑得到2-7G2、5-氨基-2-甲氧基吡啶得到2-7H2、2-氨基-1-甲基苯并咪唑 得到2-7I2、2-氨基-5-甲基吡啶得到2-7J2、2-氨基-5-氯吡啶得到2-7K2、1- 氨基哌啶得到2-7L2并且1-氨基吡咯烷得到2-7M2。当使用胺盐酸盐时， 将合适当量的碱如三乙胺加入到反应混合物中。根据实施例2制备的其他 化合物是2-7O2-2-7AE2(表4)。
表3根据实施例2从2-8制备的化合物2-7



#8-OH的化学位移并没有包括在归属中
表4根据实施例2从2-8制备的其他2-7N2-2-7AE2



表5根据实施例1和2所制备的其他化合物





实施例3：2，3-二取代的-3H-喹唑啉-4-酮(4-9)的制备

步骤1：在氩气氛下向酸1-8(1.00克，4.50毫摩尔)在无水苯(8.3毫升) 中的溶液中逐滴地加入亚硫酰氯(2.09克，17.6毫摩尔)。将混合物在回流下 加热5小时，之后通过蒸发除去过量的亚硫酰氯和苯。将残余物溶解在无 水的二氯甲烷(8.3毫升)中，冷却至0℃，并且用正-丙胺(798毫克，13.5毫 摩尔)处理。在0℃搅拌混合物15分钟，然后加热至室温并且再搅拌16小 时。蒸发并且用柱色谱(乙酸乙酯/石油醚，3∶7-1∶1)纯化粗残余物来得到 橙色固体的苯甲酰胺，2-氨基-4，6-二氯-3-羟基-N-(正丙基)苯甲酰胺(4-14， R1＝正丙基)(550毫克，46％)。
2-氨基-4，6-二氯-3-羟基-N-丙基苯甲酰胺：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.39 (t，J＝5.6，1H)，6.67(s，1H，)，4.94(br，1H)，3.16(m，2H)，2.44(m，2H)，1.50 (m，2H)，0.88(m，3H)。
步骤2：在氩气氛下向2-氨基-4，6-二氯-3-羟基-N-丙基苯甲酰胺(1.00克， 4.50毫摩尔)在冰乙酸(5.5毫升)中的溶液中逐滴地加入氯代乙酰氯(718毫 克，6.36毫摩尔)。将混合物在回流下加热2小时并且然后在室温下搅拌1 小时。真空蒸发反应混合物并且用2M的NaOH中和残余物。通过过滤分 离沉淀，用水洗涤并且真空干燥。
向得到的残余物中加入二氯甲烷(10毫升)并且过滤掉不溶解的物质。浓 缩滤液来得到橙色固体的氯化物，2-氯甲基-5，7-二氯-8-羟基-3-正丙基-3H- 喹唑啉-4-酮(4-15，R1＝正丙基)(600毫克，89％)。
2-氯甲基-5，7-二氯-8-羟基-3-正丙基-3H-喹唑啉-4-酮：1H NMR (DMSO-d6)：δ7.86(s，1H，)，5.15(s，2H)，4.27(s，2H)，1.52(m，2H)，0.93(m， 3H)；质谱：m/z 323，325，327(M++1，100％，66％，11％)。
步骤3：在氩气氛下向2-氯甲基-5，7-二氯-8-羟基-3-正丙基-3H-喹唑啉-4- 酮(285毫克，0.886毫摩尔)在无水的THF(1.3毫升)中的溶液中逐滴地加入 甲胺的乙醇溶液(7.5毫升的8.0M的溶液，60毫摩尔)。在室温下搅拌混合 物18小时，然后浓缩，并且向得到的残余物中加入2M的HCl(5毫毫升)。 蒸发混合物并且再加入2M的HCl(5毫升)。蒸发残余物并且再重复该步骤 两次。用二氯甲烷研磨混合物并且真空干燥来得到黄色固体的5，7-二氯-8- 羟基-2-甲基氨基甲基-3-正丙基-3H-喹唑啉-4-酮盐酸盐(4-9A)(157毫克， 50％)(表6)。
在表6中给出了通过用合适的胺取代在实施例3中的正丙基胺(步骤1) 和甲胺(步骤3)制备的其他2，3-二取代的-3H-喹唑啉-4-酮(4-9B-4-9E)。
表6根据实施例3制备的化合物4-9A-4-9E

实施例4-2-取代的-3H-喹唑啉-4-酮(4-16A-4-16D)的制备

在氩气氛下向甲醇钠在甲醇(2.8毫升的0.32M的溶液，0.89毫摩尔)的 冰冷的溶液中逐滴地加入氯代乙腈(0.25毫升，3.90毫摩尔)7。在室温下搅 拌反应混合物30分钟并且然后冷却至0℃，之后加入2-4(0.80克，3.39毫 摩尔)的无水甲醇溶液(14毫升)。在室温下将溶液保持搅拌20小时并且再加 热回流20小时。蒸发并且用柱色谱(乙酸乙酯/石油醚，3∶7)纯化得到的残 余物来得到白色固体的氯化物4-3B(225毫克，23％)。
接着用合适的胺根据如实施例3的步骤3中的条件处理4-3B来得到2- 取代的-8-甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮：乙胺得到4-4A，1-丙基胺得到4-4B，二 乙胺得到4-4C并且二甲胺得到4-4D。接着根据一般的脱保护方法(实施例1， 方法A)各自除去8-甲氧基保护基团来得到4-16A-4-16D(表7)。
表7根据实施例4制备的化合物4-4A-4-4D和4-16A-4-16D


3-氨基-5，7-二氯-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮氢溴酸盐(5-4或PB 1099)的制 备

将2-氨基-4，6-二氯-3-甲氧基苯甲酸甲酯(2-3)(6.35克，25.4毫摩尔)和原 甲酸三乙基酯(60毫升，361毫摩尔)加热回流5天。将溶液冷却至室温并且 在减压下蒸发来得到棕色油状的亚胺酸酯，4，6-二氯-2-乙氧基亚甲基氨基-3- 甲氧基苯甲酸甲酯(5-2)，和起始原料(7.80克)；5-2∶2-3～9∶1。
4，6-二氯-2-乙氧基亚甲基氨基-3-甲氧基苯甲酸甲酯(5-2)：1H NMR (DMSO-d6)：δ7.99(s，1H)，7.48(s，1H)，4.22(q，2H)，3.79(s，3H)，3.62(s，3 H)，1.28(t，J＝7.2，3H)。
在氩气氛下向亚胺酸酯5-2(400毫克，1.31毫摩尔)在乙醇(12毫升)的冰 冷的溶液中加入水合肼(1.8毫升，57.8毫摩尔)。在15分钟之后，将溶液加 热至室温并且再搅拌2小时。用乙醇稀释浓稠的悬浮液并且过滤。用冷的 乙醇洗涤固体并真空干燥来得到白色绒毛似的固体的3-氨基-5，7-二氯-8-甲 氧基-3H-喹唑啉-4-酮(5-3)(289毫克，85％)。
3-氨基-5，7-二氯-8-甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮(5-3)：1H NMR(DMSO-d6)：δ 8.48(s，1H)，7.74(s，1H)，5.85(s，2H)，3.94(s，3H)；质谱：m/z 260，262，264 (M++1，100％，66％，11％)。
将5-3(60毫克，0.231毫摩尔)和48％的氢溴酸的水溶液(2毫升)的溶液 在120℃加热2小时。将溶液冷却至室温并且通过过滤分离沉淀，用二氯甲 烷和乙醚依次地地洗涤，并且真空干燥来得到白色固体的3-氨基-5，7-二氯 -8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮氢溴酸盐(5-4)(44毫克，58％)。
3-氨基-5，7-二氯-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮氢溴酸盐(5-4)：1H NMR (DMSO-d6)：δ8.44(s，1H)，7.60(s，1H)；m/z 246，248，250(M++1，100％， 66％，11％)。
实施例5-3-(取代的)氨基-5，7-二氯-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮的制备

在氩气氛下向被取代的苯基肼盐酸盐(1.61毫摩尔)的乙醇(4毫升)的冰 冷的溶液中加入三乙胺(185毫克，1.83毫摩尔)。在0℃搅拌混合物15分钟， 之后加入亚胺酸酯5-2(180毫克，059毫摩尔)的乙醇(3毫升)溶液中。在0℃ 搅拌得到的混合物40分钟，然后在室温下搅拌4天。过滤悬浮液并且用冷 的乙醇洗涤白色的固体并且真空干燥来得到8-甲氧基-3-(取代的)氨基化合 物5-6。
所用的肼的例子：2，4-二氟代苯基肼盐酸盐得到5-6A，4-甲氧基苯基肼 盐酸盐得到5-6B并且4-氟代苯基肼盐酸盐得到5-6C。
将8-甲氧基化合物(5-6A、5-6B或5-6C)(0.133毫摩尔)和48％的氢溴酸 的水溶液(3毫升)的溶液在120℃加热6小时，并且将其冷却至室温。通过 过滤分离固体，用二氯甲烷和乙醚洗涤，并且真空干燥来得到3-(取代的) 氨基化合物(5-7A、5-7B或5-7C)(表8)。
表8根据实施例5制备的化合物

#8-OH和HBr(其中可使用)的化学位移并没有包括在归属中
表9根据在方案5中的方法制备的化合物

表10通过烷基化或酰化表1和2中的一些化合物所制备的化合物

实施例6-3-取代-3H-喹唑啉-4-酮(7-2)的制备

将3-取代-3H-喹唑啉-4-酮(0.70毫摩尔)、P4S10(0.93毫摩尔)和吡啶(5毫 升)的混合物加热回流。当TLC分析显示反应完成之后，将混合物浓缩至干 并且对得到的残余物进行柱色谱(SiO2；用乙酸乙酯/甲醇，100∶1洗脱)来 得到相应的3H-喹唑啉-4-酮7-1。
根据在以上的实施例1中所描述的条件用BBr3处理3H-喹唑啉-4-硫酮 7-1的混合物。用甲醇按照普通的处理方式来得到相应的3H-喹唑啉-4-硫酮 7-1(表11)。
表11根据实施例6制备的化合物

实施例7-评价式I的化合物
以下测定用于评价式I的化合物在本发明的方法中使用的适用性。
测定1.荧光H2O2分析
荧光测定用来分析测试化合物在基于二氯荧光素二乙酸酯(DCF； Molecular Probes，Eugene OR)在铜存在下抑制通过Aβ生成过氧化氢的能力。 该DCF(5mM)在100％二甲基亚砜中的溶液(预先用氩气在20℃下吹扫1小 时)在0.025M NaOH存在下脱乙酰30分钟，接着在pH7.4下中和至1mM 的最终浓度。制备pH7.4的1μM的辣根过氧化物酶(HRP)储备液。反应在 PBS、pH7.4、96孔板中进行(总体积＝250μL/孔)。所述的反应溶液含有浓 度在50nM至1μM之间的Aβ1-42，铜-甘氨酸螯合物(Cu-Gly)，如下制备： 以1∶6的比例将CuCl2加入到甘氨酸中，接着以比例2Cu-Gly∶1Aβ加入 到Aβ中，还原剂包括多巴胺(5M)或抗坏血酸、脱乙酰的DCF 100μM以及 HRP 0.1μM。1-10μM EDTA或另外的螯合剂也可以作为游离铜的参照物存 在，但是不需要对测定起作用。反应混合物在37℃培育60分钟。在PBS 中的pH7.4的H2O2(1-2.5μM)标准物和过氧化氢酶(4000单位/ml)可以作为 阳性对照包括在内。使用波长分别在485nm和530nm的激发和发射滤光 器的板读数器记录荧光。通过比较荧光与H2O2标准物，可以确定H2O2的 浓度。通过在测试孔中包含给定浓度的测试化合物，分析AβH2O2产生的 抑制。
测定2.神经毒性测定
原代皮层神经元培养
如先前描述的(White等人，1998)制备皮层培养物。除去胚胎期第14 天BL6Jxl29sv小鼠的皮层，切除脑膜(meninges)，并离解在0.025％(wt/vol) 胰蛋白酶中。将离解细胞以2×106细胞/mL的密度铺在48孔培养平板中， 该平板中预先放有含25％(vol/vol)Fcs和5％(vol/vol)Hs的MEM，接着在 37℃培育2小时。然后，用Neurobasal培养基(Invitrogen Life Technologies) 和B27补充剂(Invitrogen Life Technologies)替换培养基。培养物在37℃下保 持在5％的CO2中。实验前，用Neurobasal培养基和B27-无抗氧化剂 (Invitrogen Life Technologies)替换该培养基。
原代小脑颗粒神经元培养
除去出生5-6天后(P5-6)的小鼠的小脑，切除脑膜，并将其离解在0.025％ 的胰蛋白酶中。将小脑颗粒神经元(CGN)以350000细胞/cm2的密度铺在24 孔培养平板中，该平板中预先装有补充有10％胎牛血清(FCS)、2mM谷氨 酰胺和25mM KCl的BME(Invitrogen Life Technologies)。将硫酸庆大霉素 (100μg/mL)加入到所有平板培养基中，培养物在37℃下保持在5％的CO2 中。
测定3.细胞成活力测定
(a)用于细胞成活力(cell via bility)的MTS测定
使用MTS测定确定细胞的成活力。用新鲜的Neurobasal培养基加B27 补充剂-抗氧化剂替换培养基。1/10体积的MTS溶液(Cell Titre 96 Aqueous one，Promega Corporation)并在37℃下培育2小时。用分光光度计在560nm 测定200微升等分试样。
(b)用于细胞成活力的LDH测定
使用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒(Boehringer Ingelheim)根据 厂家的说明，从不含血清和细胞碎片的培养上清液中确定细胞死亡。
(c)Aβ神经毒性和Aβ神经保护测定
神经元皮层细胞按照测定2培养5天。第6天，用Neurobasal(NB)培养 基和B27补充剂(没有抗氧化剂)替换NB培养基(Invitrogen Life Technologies) 和B27补充剂(Invitrogen Life Technologies)。第6天，将测试化合物分别加 入到神经元细胞培养物中：
将测试化合物溶于100％DMSO中，至2.5mM的浓度(10mM如果每管 瓶称出过量的化合物-那么稀释至2.5mM)。将2.5mM储备液以1∶10比例 依次地稀释，得到250uM、25uM、2.5uM的使用溶液。
Aβ制备：
首先，将Aβ溶于20mM NaOH中，至1mM的浓度，接着超声波处理5 分钟。然后，将该肽在H2O和10X PBS中稀释至在1X PBS中200uM Aβ 的最终浓度。所述肽再次用超声波处理5分钟，然后以14000rpm旋转5分 钟，并将其移入到清洁管中。
将测试化合物溶于100％DMSO中，至2.5mM的浓度(10mM如果每管 瓶称出过量的化合物，那么稀释至2.5mM)。将2.5mM储备液以1∶10比 例[在NB介质和B27(没有抗氧化剂)中]依次地稀释，得到250uM、25uM、 2.5uM的使用溶液。测试化合物不是直接加入到细胞中，相反，将它们加 入到含如下物质的48孔“药物板”中：
“药物板”的制备：
向48孔板中加入：
孔1：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)*+24ul 25uM测试化合物+60ul Aβ 稀释剂**
孔2：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 250uM测试化合物+60ul Aβ 稀释剂
孔3：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul测试化合物稀释剂***+60ul Aβ-42
孔4：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 2.5uM测试化合物+60ul Aβ-42
孔5：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 25uM测试化合物+60ul Aβ-42
孔6：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 250uM测试化合物+60ul Aβ-42稀释剂
孔7：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul测试化合物稀释剂+60ul Aβ-42稀释剂
孔8：600ul NB+B27(没有抗氧化剂)
N.B.60ul Aβ1-42等于20ul Aβ1-42每孔等于20uM Aβ1-42
将所述的药物板在37℃培育15分钟。一式三份以200ul每孔加入到相 应的细胞板中。所述细胞板在37℃下培育4天。
*NB培养基+B27(没有抗氧化剂)，
**Aβ稀释剂2mM NaOH，1X PBS
***PBT稀释剂10％DMSO在NB+B27(没有抗氧化剂)中
完成测定：
处理细胞后第4天，通过向所述细胞中加入MTS完成测定。
(d)测试化合物细胞毒性的分析
按照测定2，将神经元皮层细胞在NB介质和B27补充剂中培养5天。
第6天，将测试化合物加入到在NB培养基和B27补充剂减抗氧化剂 中的神经元细胞培养物中。
将测试化合物溶于100％DMSO中，至2.5mM的浓度(10mM如果每管 瓶称出过量的化合物-那么稀释至2.5mM)。将2.5mM储备液以1∶10比例 依次地稀释，得到250uM、25uM、2.5uM的使用溶液。测试化合物不是直 接加入到细胞中，相反，将它们加入到含如下物质的48孔‘药物板’中：
“药物板”的制备：
向48孔板中加入：
孔1：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)*+24ul 2.5uM测试化合物
孔2：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 25uM测试化合物
孔3：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 250uM测试化合物
孔4：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 2.5uM测试化合物
孔5：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 25uM测试化合物
孔6：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul 250uM测试化合物
孔7：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul测试化合物稀释剂**
孔8：600ul NB+B27(没有抗氧化剂)
将所述的药物板在37℃培育15分钟。一式三份以200ul每孔加入到相 应的细胞板中。所述的细胞板在37℃下培育4天，(在细胞的每个板上测试 两个化合物)。
*NB培养基和B27(没有抗氧化剂)，
**PBT稀释剂10％DMSO在NB+B27(没有抗氧化剂)中
在完成测定时，将1/10体积的MTS加入到板的每个孔中(即 25ul/250ul)。所述板在37℃培育2小时，然后在560nm下读取吸光度。
测定4.胱冬蛋白酶(caspase)测定
为了测定神经元培养物中胱冬蛋白酶的活性，除去生长培养基，用对 照盐溶液(pH7.4)洗涤细胞两次，接着将冰冷的细胞萃取缓冲液直接加入到 该培养物中。萃取缓冲液由20mM Tris(pH7.4)、1mM蔗糖、0.25mM EDTA、 1mM二硫苏糖醇(DTT)、0.5mM PMSF、1％Triton X-100(Tx-100)和1μg/mL胃 酶抑素和抑肽酶组成。在冰上培育15分钟后，除去萃取缓冲液，在4℃在 微量离心机中离心5分钟，接着向96孔板的每个孔中加入100μL上清液。 将100μL 200μM的底物(对于胱冬蛋白酶3、6和8，分别是DEVD-pNA、 VEID-pNA或IETD-pNA)加入到每个孔中，得到100μM的底物最终浓度。 板在37℃下培育2、4、6或24小时，在415nm的波长处测定吸光度(Abs415)。 该吸光度读数与已知标准的单独pNA进行比较。
测定5.膜联蛋白(annexin)V测定
为了测定与细胞结合的膜联蛋白V的含量，用对照盐溶液(pH7.4)洗涤 培养物两次，接着加入在对照盐溶液(pH7.4)中的浓度约0.5μg/mL的膜联蛋 白V-FITC。同时还向培养物中加入碘化丙锭(propidium iodide)(10μg/mL)。 细胞在黑暗中在环境温度下培育30分钟，随后用新鲜的对照盐溶液洗涤三 次。使用莱卡(Leica)DMIRB显微镜分析确定FITC荧光(激发488nm，发射 510nm)。用莱卡MPS60照像附加使用ASA400彩色胶片进行拍照，底片用 Adobe Photoshop v2.0.1软件扫描。
测定6.脂蛋白氧化测定
可以使用两种不同的方法测定金属介导的脂质过氧化作用。第一种测 定法涉及测定金属化蛋白质的氧化作用。这种测定法如下进行：将透析金 属化蛋白质或天然蛋白质(在指定浓度下)与0.5mg/mL的LDL混合24小时 (37℃)。使用脂质过氧化作用分析试剂盒(LPO486，Oxis International Inc. Portland，OR)按照试剂盒教导测定脂质过氧化作用(LPO)。通过吸光度 (486nm)与单独LDL(100％LPO)进行比较，确定LPO的水平。第二种测定 法用来测定天然蛋白质在游离的、非蛋白质结合的Cu存在下的LPO活性。 这涉及到将非金属化的肽(140μM)加入到0.5mg/mL的LDL和20μM Cu-gly 中，接着对金属化蛋白质进行LPO测定。通过吸光度(486nm)与LDL+Cu-gly (100％LPO)进行比较，确定LPO的水平。作为阴性对照，LDL还暴露于透 析的Cu-gly溶液中，以与Cu-金属化蛋白质所使用的那些进行比较。
测定7.由Cu-金属化蛋白质诱导的细胞毒性
在与蛋白质为等摩尔浓度或两倍摩尔浓度下，将蛋白质或合成肽与金 属-甘氨酸溶液混合。金属-蛋白质混合物在37℃培育过夜，然后使用3,500 千道尔顿阻流(cut-off)的微型渗析杯(mini-dialysisc cups)(Pierce，Rockford， IL)进行充分透析(24小时，在室温下对dH2O(3L/变化)的两次变化)。蛋白质 对PBS pH7.4的透析产生与dH2O透析具有相同活性的金属化蛋白质。
为了测定它们的神经毒害作用，将金属化蛋白、天然蛋白或肽加入到 两天龄的原代皮层神经元培养物中。培养物同时还暴露于Cu-gly(5或10μM) 或LDL中。阳性对照培养物用Cu-gly+LDL或LPO产物，4-羟基-壬烯醇 (HNE，Sigma Chemicals)处理。用乳酸脱氢酶(LDH)分析试剂盒(Roche Molecular Biochemicals，Nunawading，Australia)根据厂商的说明，测定培养 物中的细胞死亡。
测定8.对溶酶体酸化的Aβ-介导损失进行吖啶橙分析
经培养的小鼠皮层神经元用Aβ1-42(20μM)处理16h，然后用5mg/ml 吖啶橙(AO)在37℃下染色5分钟。在37℃下15分钟。用荧光显微镜上的 红色滤光器测定AO-诱导的荧光。AO是溶酶体向性弱碱，累积在胞内体/ 溶酶体室中，并在培养期间显示出橙色荧光。只要溶酶体膜内存在大量的 质子梯度，AO就在溶酶体内被螯合。用Aβ1-42处理细胞破坏了溶酶体膜 的质子梯度，并且将AO重新定位到胞质溶胶中，根据16-24小时内橙色荧 光的损失表示。
测定9.人脑淀粉状蛋白增溶作用测定
这种测定法是评价测试化合物在死后人AD脑的组织萃取物中将Aβ从 不溶相转化为可溶相的能力。
高达0.5g的没有脑膜的带斑块的皮层在高达2ml的冰冷磷酸缓冲盐溶 液pH7.4中使用DIAX900均化器(Heudolph and Co，Kelheim，Germany)或 其它合适的装置全速均化三个30-秒周期。为了获得磷酸缓冲盐溶液-可提取 部分，将均浆在100,000xg下离心30分钟，接着除去上清液。或者，将所 述组织冷冻干燥，然后磨碎形成粉末，接着将所述粉末称成等分试样，进 行如上所述的提取。离心后移去10μl上清液的等分试样，将其与等体积的 2×Tris-Ticene SDS样品缓冲液(pH8.3，含8％SDS，10％2-巯基乙醇)混合。 然后，样品在90℃下加热10分钟，接着通过凝胶电泳分离。将初始粒状样 品再悬浮在1ml磷酸缓冲盐溶液中，获得皮层样品的不溶部分。然后，将 这种悬浮液的50-μL等分试样在200ml上述样品缓冲液中煮沸。
将合适稀释的样品装载到10％-20％梯度凝胶(Novex，San Diego，CA) 上，进行Tris-Tricine聚丙烯酰胺凝胶电泳，接着转移到0.2-μm硝化纤维素 膜(Bio-Rad，Hercules，CA)上。使用单克隆抗体W02检测Aβ，其检测与辣 根过氧化物酶-偶联的免抗-小鼠IgG(Dako，Denmark)结合的残基5-8、17(或 其它合适的抗体)，并通过使用增强化学发光(例如ECL；Amersham Life Science，Buckinghamshire，UK)进行观察。每种凝胶包括三条含0.5、1和 2ng合成Aβ40的道(Keck Laboratory，Yale University，New Haven，CT)作为 参考标准。
使用合适的软件，例如Multigauge并且使用合适的成像系统例如Fuji LAS3000和密度测定法对斑点膜进行读取。用于单一和二聚Aβ带光密度分 析的信号强度的线性范围利用已知的Aβ标准建立。在表13中计算的百分 比表示从治疗小鼠组中获得的相对于溶媒处理小鼠组的平均读数。
所有的样品分析数次，并且调节胶负载以及稀释以使其落在标准曲线 的可定量范围之内。不溶性Aβ含有来源于上述皮层样品中的不溶性淀粉状 蛋白斑块的可粒化部分，以及包含单体的和/或寡聚的可溶性Aβ的可溶部 分。
每一测试化合物与包括在每种胶凝上的PBS对照一起，进行几个凝胶 运行。每种胶凝含有不同浓度的测试化合物。使用stuendent’s“t”检验， 通过由测试化合物对于每种胶凝在任何浓度下获得的最高值的平均值与由 多种胶凝中获得的PBS值的平均值进行比较。因此，可以进行判定，由任 何测试化合物获得的溶解度的平均增加值是否与单独PBS获得的溶解度平 均增加值具有可比性。获得(+)评分的测试化合物是这样的化合物，其相对 于单独PBS，在斑块溶解方面获得统计学上显著增加。获得(-)评分的测试 化合物是这样的化合物，其相对于单独PBS，在斑块溶解度方面没有获得 统计学上显著增加。
测定10.金属分配
为了测定各种金属包括锌和铜的分配作用，在测试化合物存在下提取 脑组织后，如用于淀粉状蛋白溶解度测定的方法，从人脑组织的提取物中 制得可溶性和不溶性部分。由感应耦合等离子体质谱分析两部分中的金属， 如果必要的话，用硝酸和/或过氧化氢进行适当的预处理。
测定11.在转基因动物中给予测试化合物对Aβ沉积的影响
转基因小鼠模型对许多神经障碍是可以得到的，包括阿尔茨海默氏病 (Games等人，1995；Hsiao等人，1996)；帕金森病(Masliah等人，2000)； 家族性肌萎缩性侧索硬化(ALs)(Gumey等人，1994)；亨廷顿舞蹈病(Reddy 等人，1998)和克-雅二氏病(CJD)(Telling等人，1994)。我们已经发现，阿尔 茨海默氏病的转基因模型之一，APP2576转基因小鼠(Hsiao等人，1996)还 具有白内障的高发病率。这些动物模型适合于测试的本发明的方法。
使用APP2576品系的转基因小鼠(Hsiao等人1996)。选择8-9个月大的 雌性小鼠，并将其分成治疗组。
每隔一段时间杀死小鼠，检查它们的脑，以确定测试化合物的治疗是 否降低了脑淀粉状蛋白的生成，并确定出最有效的给药方案。使用校准的 Wcstern印迹法，按照测定9所述的方法，测定脑和血清中可溶性和不溶性 Aβ的水平。脑淀粉状蛋白增溶作用测定。
使用Morris水迷宫，根据标准方法，在长达8个月的时间内，对每组 中其它小鼠的认知性能进行测定。同时，由不知情的操作员每天测定动物 的总体健康和福利，使用5分整数在主观上对综合特征进行评价，包括运 动活动、警觉性和总体健康体征。
测定12.物理化学性质
极表面积计算(PSA)
使用基于万维网，通过“Molinspiration”(一种计算分子性质的程序包)， 计算极表面积值。
比浊法溶解度测定
在pH2.0和pH6.5时测定溶解度估计值。这在沿人近侧胃肠道可预测 的pH范围范围内。
将化合物溶于DMSO中至合适的浓度，然后加入到0.01M HCl(约 pH＝2.0)或pH6.5等渗磷酸盐缓冲液中，最终DMSO浓度是1％。然后，通 过比浊法分析样品，确定溶解度范围。[根据D.Bevan和R.S.Lloyd，Anal. Chem.2000，72，1781-1787]。
cLog P值
理论Log P值使用ACD Log P软件进行确定。所标出的值由未经训练 的数据库计算，并且是指未离子化的物质。
测定13.血脑屏障渗透
将测试化合物溶于DMSO中，接着加入磷酸盐缓冲盐水(PBS)，获得浓 度为50μM的在含1.25-2.5％DMSO的PBS中的溶液。为了评价每一灌注期 间血脑屏障(BBB)的完整性，以及为了评价脑组织样品中剩余血管空间(RVS) 的体积(即：每一灌注结束时血管腔内剩余液体的体积)，将痕量14C-蔗糖加 入到每种储备输液溶液(约0.01μCi/mL)中起BBB不可渗透标志物。
以1.0mL/100g体重的剂量腹膜内注射乌拉坦(Urethane)(25％wv)，将成 年雄性Spague Dawley大鼠(180-190g)麻醉。通过手术割开右颈总动脉，插 管进行大脑循环灌注。然后，在与右颈总动脉分叉的末端处结扎右颈外动 脉(其供应颅骨外的组织)，这样所有的输液溶液将通过剩余的右侧内颈动脉 进入脑内。然后，暴露心脏，横切，立即开始输液。输液的速度由泵组控 制，以3.2mL/分钟的量给予(对于这种大小的大鼠，约为85％的正常脑部血 液供应)。该输液套管最初含有0.5mL预先洗涤的肝素化PBS(10IU/ml)，用 于冲洗血管和预防血液凝结和阻塞小血管。
1.5分钟后，自动停止输液泵，将套管从颈动脉中取出，然后从输液套 管的端头处收集输液溶液的样品(1-1.5mL)。然后，将脑解剖，分成3部分； 右半球和右中脑、左半球和左中脑、以及后脑(小脑、脑桥和脑干)。仅仅使 用脑的右部进行随后的测定，因为通过右侧内颈动脉的灌注优先供应右脑 半球和右中脑(左脑半球和后脑接受可变的并行灌注)。将每只动物的脑组织 样品在-30℃下冷冻，均化，称重后的等分试样通过LC-MS分析确定总脑浓 度。使用Micromass Triple Quad仪进行分析。流动相由乙腈/水梯度(含0.05％ 甲酸)组成，柱子是Phenomenex Luna CN。
由液体闪烁计数确定14C-蔗糖的含量以分析每个脑组织样品的小等分 试样和相应的输液溶液。通过脑组织中蔗糖的实测浓度(dpm/mg)除以相应 输液溶液中蔗糖的浓度(dpm/μL)，计算每个脑组织样品中剩余的血管空间 (RVS)。这是每次灌注结束时留在血管内的液体的体积。RVS乘以输液溶液 中测试化合物的浓度，得到每个脑组织样品中存在于血管内的测试化合物 的总剩余量(即：没有越过BBB的那些)。总脑浓度减去每个脑组织样品中 存在于血管内的测试化合物的总剩余量，得到每个脑组织样品中存在于血 管外的药物的数量(即：越过BBB的那些)。除以RVS校正的脑浓度，得到 脑摄取率(方程式1)。
方程式1.

每一种测试化合物进行5-6次脑灌流实验，计算平均脑摄取率。
比值大于50％表示化合物非常迅速地进入脑内；比值在10至50％之间 表示化合物较好的进入脑内，比值小于10％(没有观察到)表示化合物非常慢 地进入脑内并且不适合于治疗给药；比值小于1％(没有观察到)表示化合物 有效地从脑中排出。
测定14.转基因小鼠脑免疫组织化学
在本测定中使用如测定11中所指的APP 2576转基因小鼠(Hsiao等人， 1996)。对侧的福尔马林-固定的小鼠脑组织被沿头颅切割。从相应的部位取 得切片(10μm)并用80％甲酸处理以回收抗原。所使用的第一抗体是单克隆 抗体1E8，其识别Aβ残基18和22之间的表位(SmithKline Beecham，UK)。 免疫反应性利用辣根过氧化物酶偶联的第二抗体(使用3，39-二氨基联苯胺 发色团)(Dako)和碱性磷酸酯酶(使用5-溴-4-氯3-吲哚基磷酸酯和氮蓝四唑 氯化物发色团)(Dako)而显色。每个切片的斑块丰度(Plaque abundance)由两 个操作员根据下列等级盲目进行评价：
0＝没有看见斑块
1＝斑块存在但是非常稀少
2＝存在几个斑块
3＝在限制范围内出现许多可见的斑块
4＝斑块很丰富并且不限于任何特定的区域。
如果合适的话，给予中间值例如2.5。
Stendent’s t检验被用于各组之间的比较。
测定15.药物动力学特性(pharmacokinetic profile)
·静脉内输注测试化合物；2mg/Kg在合适的赋形剂中，给予2只大鼠， 对动脉血进行取样直到24小时。
·口服给药测试化合物；30mg/Kg在合适的赋形剂中，通过口服管饲 法给予2只大鼠，对动脉血进行取样直到24小时。
·通过合适的分析方法确定测试化合物的血浆浓度。
计算：
${\mathrm{CL}}_{\mathrm{total}}=\frac{{\mathrm{Dose}}_{\mathrm{IV}}}{{\mathrm{AUC}}_{\mathrm{IV}}}$ $V_{\mathrm{d\beta }}=\frac{{\mathrm{CL}}_{\mathrm{total}}}{\beta }$ $\mathrm{BA}(\%)=\frac{{\mathrm{AUC}}_{\mathrm{oral}}*{\mathrm{Dose}}_{\mathrm{IV}}}{{\mathrm{AUC}}_{\mathrm{IV}}*{\mathrm{Dose}}_{\mathrm{oral}}}$
CLtotal＝IV给药后的总血浆清除率
Vdβ＝IV给药后消除相期间的分布体积
BA＝口服生物利用度
AUCIV＝IV给药后从零时到无穷，血浆浓度对时间分布下的面积
AUCoral＝口服给药后，从零时到无穷，血浆浓度对时间分布下的面积
β＝IV给药后最终消除速度常数
测定16.测试化合物的小鼠血浆水平的确定
PB1075
以30毫克/千克的剂量口服给予PB1075，在Na-羧甲基纤维素(CMC) 中以悬浮液的形式通过口服管饲法给予四只小鼠。给药后30分钟，处死两 只小鼠，给药后60分钟处死另两只小鼠。通过心脏穿刺获得血液，然后通 过离心分离血浆。
由LC/MS使用triple quadrupole仪测定PBT1075的浓度。流动相由乙 腈(ACN)/水梯度(含0.05％的甲酸)组成，柱子是Phenomenex Lunea 5μm C8(50×2mm)柱。
用ACN进行蛋白质沉淀后，将提供的急性毒性小鼠血浆样品直接注入。 血浆中的分析方法在10-10,000ng/ml范围内是线性的(R2＝0.9994)。从血浆 中回收的PB1075是～100％。
小鼠血浆中的PB1075浓度在表12中给出。
表12.以30毫克/千克口服给药后，小鼠血浆中PB1075的浓度
  实验例号     时间     (分钟)     浓度.     (ng/ml)   2459     30     431.26   2470     30     298.46   2495     60     424.81   2781     60     519.56
PB 1076
以30毫克/千克的剂量口服给予PB 1076，在Na-羧甲基纤维素(CMC) 中以悬浮液的形式通过口服管饲法给予四只小鼠，给药30分钟之后，处死 两只小鼠，给药60分钟之后处死两只小鼠，通过心脏穿刺获得血液，然后 通过离心分离血浆。
由LC/MS使用triple quadrupole仪测定PB 1076的浓度。流动相由乙腈 (ACN)/水梯度(含0.05％的甲酸)组成，柱子是Phenomenex Lunea 5μm C8(50 ×2mm)柱。
用ACN进行蛋白质沉淀之后，将小鼠的血浆样品直接注入。血浆中的 分析方法在500-10,000ng/ml的范围为线性(R2＝0.994)。从血浆中回收的PB 1076是～85％。
以30毫克/千克的剂量口服给药之后，小鼠血浆中的PB 1076的浓度在 表13中给出。
表13.以30毫克/千克的剂量口服给药之后， 小鼠血浆中的PB 1076的浓度
    小鼠ID     时间(分钟)     浓度(ng/ml)     3036     30     2325.77     3041     30     1593.61     3014     60     2697.62     3015     60     1167.52
PB 1077
以30毫克/千克的剂量口服给予PB 1077，在Na-羧甲基纤维素(CMC) 中以悬浮液的形式通过口服管伺法给予四只小鼠，给药30分钟之后，处死 两只小鼠，给药60分钟之后处死两只小鼠，通过心脏穿刺获得血液，然后 通过离心分离血浆。
由LC/MS使用triple quadrupole仪测定PB 1077的浓度。流动相由乙腈 (ACN)/水梯度(含0.05％的甲酸)组成，柱子是Phenomenex Lunea 5μm C8(50 ×2mm)柱。
用ACN进行蛋白质沉淀之后，将小鼠的血浆样品直接注入。血浆中的 分析方法在5-5,000ng/ml的范围内为线性(R2＝0.999)。从血浆中回收的PB 1077是～92％。
以30毫克/千克的剂量口服给药之后，小鼠血浆中的PB 1077的浓度在 表14中给出。
表14.以30毫克/千克的剂量口服给药之后， 小鼠血浆中的PB 1077的浓度
    小鼠ID     时间(分钟)     浓度(ng/ml)     3062     30     731.2     3060     30     984.7     3093     60     752.8     3095     60     495.1
测定17.测试合成淀粉斑的分解作用
本测试测量了试验化合物溶解合成的阿尔茨海默氏A-β42残余蛋白的 凝集物的能力，该凝集物是用锌沉淀形成的。
该合成的斑凝集物的测试是基于硫黄素T(thioflavin T)荧光的测试，该 测试测量了试验化合物分解合成的凝集物的能力，该凝集物是通过在锌存 在下培育阿尔茨海默氏淀粉A-β蛋白(Aβ)形成的。
通过加入锌盐可以使在阿尔茨海默氏淀粉斑中最普遍形成的41残余蛋 白沉淀以形成β层状构造的凝集物，该凝集物在物理化学上适合于晶体的 淀粉斑的核。硫黄素T是一种嵌插在β层状结构中时会显示出特别的荧光 的试剂，在凝集过程中将硫黄素T结合在Aβ/Zn凝集物中。试验化合物所 结合的金属连接的凝集物的溶解会由于失去层状构造产生荧光的减低。在 本测试中的化合物的活性结合了其金属螯合特性、溶解性、疏水性和结构 元素，它们影响了与淀粉团的相互作用。
本测试作为一种斑分解的体外模型，模拟了如下的过程，试验化合物 或者通过与Aβ竞争结合的金属或通过在金属结合位点上竞争地结合来替 换金属，从而使锌造成的Aβ沉淀溶解。
测试试剂
为了方便，制备合成的Aβ蛋白的等分试样。将Aβ溶解在蒸馏水中并 且通过在214nm处的吸收对照有效的标准曲线来确定蛋白的浓度。只有溶 剂(DMSO)和参照载体(PBS)存在下的Aβ/Zn凝集物作为阴性对照也包括在 每个测试中。
将试验化合物溶解在DMSO中达到浓度为5mM。在DMSO中稀释到 的100倍来合适地得到所需要的最终的浓度并且将其立刻加入到Aβ凝集物 中。
方法
在转轮中在37度，在PBS pH6.6下以摩尔比(1∶2∶2)将Aβ1-42与二 氯化锌和硫黄素T(ThT)培育24小时。培育之后，在旋转下在37度用试验 的药物再培育凝集物2小时。每个试验中包括PBS空白、未处理的凝集物 和DMSO参照物。在培育2小时之后，在试管中用LS55(Perkin Elmer)荧光 计测量试样的ThT荧光。
用FL Winlab软件(Perkin Elmer)得到数据并且用GraphPad Prism v4.0软 件分析。数据为多次读数的平均值。
结果
以表格的形式表示结果，其中得到分解50％处的浓度(IC50)和在5μM的 分解的百分数(以5/％减少表示)。这两个值一起提供测量分解的效率。
如果化合物不能在试验的浓度范围内得到50％的分解，则将结果记录 为＞20μM，相应于被试验的化合物的最大浓度。这个结果表示该试验化合 物在分解Aβ1-42凝集物上能力比较低。能够得到小于20μM的IC50并且在 5μM得到超过20％的分解的试验化合物被认为“良好”。能够得到小于 20μM的IC50并且在5μM得到超过40％的分解的试验化合物被认为“非常 良好”。
    测定 测定1 过氧化物IC50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12 ClogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数     1075 0.73 99，87 2.58 58.4 小鼠中高达 520ng/mL +9％(不溶)， -19％(可溶)， -22％(斑块)     1076 0.45 116，105 2.74 55.1 小鼠中高达 2698ng/mL -21％(不溶) -24％(可溶) -29％(斑块)
测定 测定1 过氧化物IC50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12 ClogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数 1077 0.48 101，86 2.03 68.0 小鼠中高达 984ng/mL 对不溶级分的作 用可以忽略 -17％(可溶)， -30％(斑块) 1078 0.73 94，94 2.87 58.4 小鼠中高达 262ng/mL 1080 0.44 105，70 15 1.84 1081 0.55 7 2.41 高达207ng/mL
测定 测定1 过氧化物IC50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12  ClogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数 1082 4.5 94，70 1.76 1083 2.3 105，97 2.67 1084 0.36 100，93 2 2.37 高达2439ng/mL -17％(不溶)， -29％(可溶) -21％(斑块) 1085 0.37 99，72 7 1.95 高达3644ng/mL
测定 测定1 过氧化物IC50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12  ClogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数 1086 0.39 98，51 2.94 1087 1.52 94.58 11 2.53 1088 0.84 102，94 3 1.94 小鼠中高达 3896ng/mL 1089 0.78 96，83 13 2.31 1091 0.46 100，92 -8 2.36
测定 测定1 过氧化物IC50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12 ClogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数 1092 0.86 95，81 1.81 1093 0.39 122.13 2.58 1094 97，96 1 1.99 1097 0.28 99，78 2.19 小鼠中高达 261ng/mL -22％(可溶) +1％(不溶) -3％(斑块)
测定 测定1 过氧化物IC50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12 ClogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数 1098 0.44 99，88 2.48 小鼠中高达 439ng/mL 1099 0.69 103，101 2.50 1100 0.42 100，92 3.13 17uM，45 5％ 1101 ＜4.1 89，17 3.42 11.7uM，45 5％ 1107 0.4 92，59 3.22 小鼠中高达 1802ng/mL 1108 0.25 100，53 2.6 小鼠中高达 383ng/mL
测定 测定1 过氧化物IC50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12 ClogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数 1110 0.46 107，77 3.24 1111 0.32 93，67 3.35 1112 0.33 89，46 3.13 小鼠中高达 2949ng/mL 1114 0.58 101，73 1115 0.73 101，73
测定 测定1 过氧化物1C50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12 ClogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数 1126 0.37 3.07 1128 0.34 2.55 13.2uM，41 5％ 1130 0.88 1.89 1131 0.5 2.42 1132 0.47 2.34 15.2uM，16 5％
测定 测定1 过氧化物IC50 (μM) 测定3(d) 细胞毒性 (在1和10uM时 的存活％) 测定3(c) 神经保护(Aβ毒 性的抑制％) 测定12 CiogP 测定12 极性表 面积(PSA) 测定16 小鼠血浆浓度 测定11和测定14 Tg小鼠 -可溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -不溶级分：与单 用载体的对照小 鼠比较的变化％ -斑评分代表每个 处理组的平均计 数评分相对于载 体(sham)处理组 的平均统计数评 分 测定17 分解EC50(μM) 和在5uM的分解 百分数 1133 0.79 1.63 1147 0.26 1.50 1161 0.14 1.13
在说明书和实施例中所引用参考文献列在下面的页中，并且这里引入 作为参考。
对本领域的技术人员来说很明显，尽管出于清楚和理解的目的，详细描 述了本发明的某些细节，但是可以对在此所述的技术方案和方法作出多种 修改和变化，而不偏离本说明书所公开的发明概念的范围。
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