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    • 2. 发明申请
    • PROCÉDÉ D'INTÉGRATION CIBLÉE DE MULTICOPIES D'UN GÈNE D'INTÉRÊT DANS UNE SOUCHE DE YARROWIA
    • 一种有意义的集合在一个
    • WO2009098263A1
    • 2009-08-13
    • PCT/EP2009/051332
    • 2009-02-05
    • INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUENICAUD, Jean-MarcFUDALEJ, FranckNEUVEGLISE, CécileBECKERICH, Jean-Marie
    • NICAUD, Jean-MarcFUDALEJ, FranckNEUVEGLISE, CécileBECKERICH, Jean-Marie
    • C12N15/81
    • C12N15/815
    • La présente invention concerne un procédé d'intégration ciblée d'au moins trois copies d'un gène d'intérêt dans le génomed'une souche de Yarrowia comprenant les étapes de : (a) mise en culture d'une souche de Yarrowia , laquelle souche comprend une délétion parmi au moins trois gènes, le phénotype associé à chacune de ces délétions correspondant à une auxotrophie ou à un caractère dominant pour ladite souche; (b) transformation de ladite souche de Yarrowia ainsi obtenue avec au moins trois vecteurs recombinants qui comprennent des marqueurs de sélection permettant, pour ladite souche de Yarrowia , la complémentation de l'auxotrophie et, le cas échéant, du caractère dominant résultant de chacune desdites délétions; et (c) sélection sur un milieu minimal, des levures ayant intégré lesdits au moins trois vecteurs recombinants. La présente invention comprend également un procédé de production de polypeptide d'intérêt mettant en œuvre un tel procédé ainsi qu'un procédé d'obtention de souche de Yarrowia modifiée comprenant une délétion parmi au moins trois gènes, le phénotype associé à chacune de ces délétions correspondant à une auxotrophie ou à un caractère dominant pour ladite souche.
    • 本发明涉及将目的基因的至少三个拷贝目标整合到耶氏酵母属菌株的基因组中的方法,其包括以下步骤:(a)将耶氏酵母菌株培养至少包含至少 三个基因,与对应于营养缺陷型或所述菌株的主要特征的每个所述缺失相关的表型; (b)使用至少三种重组载体转化如此获得的耶氏酵母属菌株,所述重组载体包括选择标记,其使得所述耶氏酵母属菌株能够促进营养缺陷的互补,并且潜在地由每种所述缺失引起的显性特征; 和(c)在最小培养基上选择已整合所述至少三种重组载体的酵母。 本发明还涉及使用所述方法生产感兴趣多肽的方法,以及用于获得在至少三个基因中包含缺失的修饰的耶氏酵母属菌株的方法,所述表型与对应于营养缺陷型或 所述菌株的主要特征。