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1. 发明申请

WO2009066761A1 エステル結合を含む非天然タンパク質の製造方法审中-公开
标题翻译：生产非蛋白质的非天然蛋白质的方法
公开(公告)号：WO2009066761A1
公开(公告)日：2009-05-28
申请号：PCT/JP2008/071221
申请日：2008-11-21
申请人：独立行政法人理化学研究所 , 横山茂之 , 坂本健作 , 柳沢達男 , 向井崇人 , 小林隆嗣
发明人：横山茂之 , 坂本健作 , 柳沢達男 , 向井崇人 , 小林隆嗣
IPC分类号： C12N15/09 , C12N1/21 , C12N5/10 , C12P21/02
CPC分类号： C12N15/67 , C12N9/93 , C12P21/02
摘要：　リボソームにおける生体内翻訳系を用いて、ポリペプチド主鎖に少なくとも１つのエステル結合を含む非天然タンパク質を合成する。（ａ）α－ヒドロキシ酸を活性化しうるアミノアシルｔＲＮＡ合成酵素と、（ｂ）前記アミノアシルｔＲＮＡ合成酵素の存在下において前記α－ヒドロキシ酸と結合可能なサプレッサーｔＲＮＡと、（ｃ）所望の位置にナンセンス変異又はフレームシフト変異を受けた所望のタンパク質をコードする遺伝子と、を前記α－ヒドロキシ酸の存在下に細胞内又は細胞抽出液内で発現させる。
摘要翻译：在其多肽主链中具有至少一个酯键的非天然蛋白质通过使用核糖体中的体内翻译系统来合成。以下组分（a）至（c）在α-羟基酸存在下在细胞或细胞提取溶液中表达：（a）可活化α-羟基酸的氨基酰-tRNA合成酶; （b）在氨基-tRNA合成酶存在下可与α-羟基酸结合的抑制tRNA; 和（c）编码期望蛋白质的基因，所述蛋白质在期望的位点具有无义突变或帧位移突变。

2. 发明申请

WO2009038195A1 変異体ピロリジル－ｔＲＮＡ合成酵素及びこれを用いる非天然アミノ酸組み込みタンパク質の製造方法审中-公开
标题翻译：突变型吡咯烷酮合成酶，以及使用该方法生产具有非天然氨基酸一体化蛋白质的蛋白质的方法
公开(公告)号：WO2009038195A1
公开(公告)日：2009-03-26
申请号：PCT/JP2008/067029
申请日：2008-09-19
申请人：独立行政法人理化学研究所 , 横山茂之 , 坂本健作 , 柳沢達男 , 小林隆嗣
发明人：横山茂之 , 坂本健作 , 柳沢達男 , 小林隆嗣
IPC分类号： C12N15/09 , C12N1/21 , C12N5/10 , C12N9/00 , C12P21/02
CPC分类号： C12N9/93 , C12P21/00 , C12P21/02
摘要：　重原子、セレン、反応性官能基、蛍光基、クロスリンカー等、有用な官能基を有する非天然アミノ酸として好適なリジン誘導体、特にＮ ε －ベンジルオキシカルボニル－リジン（Ｚ－Ｌｙｓ）誘導体を所望のタンパク質に部位特異的に導入する方法を提供する。　配列番号２に示したピロリジル－ｔＲＮＡ合成酵素のアミノ酸配列においてピロリジン結合部位を構成する３０６位のチロシン、３０９位のロイシン、及び３４８位のシステインから選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が置換された変異体酵素であって、当該アミノ酸置換が、　３０６位のチロシンからグリシン又はアラニンへ、　３０９位のロイシンからグリシン又はアラニンへ、及び　３４８位のシステインからバリン、セリン又はアラニンへ、　の置換である変異体ピロリジル－ｔＲＮＡ合成酵素。
摘要翻译：公开了引入具有有效官能团的赖氨酸衍生物（特别是Ne-苄氧羰基赖氨酸（Z-Lys）衍生物）的方法，该有功能基团如重原子，硒，反应性官能团，荧光基团或交联剂，其中适合作为非天然氨基酸，以特定位点的方式转化成所需的蛋白质。还公开了一种突变型吡咯赖氨酰-tRNA拟南芥，其具有至少一个氨基酸残基的取代，所述氨基酸残基选自306位的酪氨酸残基，309位的亮氨酸残基和348位的构成吡咯烷 - SEQ ID NO：2所示的吡咯赖氨酰-tRNA拟南芥氨基酸序列的结合位点，其中氨基酸残基的取代是位于-606处的酪氨酸残基被甘氨酸或丙氨酸残基取代，在309位的亮氨酸残基被甘氨酸或丙氨酸残基取代，或者通过缬氨酸，丝氨酸或丙氨酸残基取代348位的半胱氨酸残基。

3. 发明申请

WO2007015527A1 ｔＲＮＡ合成方法、核酸、アミノアシルｔＲＮＡ合成方法及び非天然型アミノ酸組み込み蛋白質の製造方法审中-公开
标题翻译： tRNA合成方法，核酸，氨基酸tRNA合成方法和生产具有非天然氨基酸合成蛋白质的蛋白质的方法
公开(公告)号：WO2007015527A1
公开(公告)日：2007-02-08
申请号：PCT/JP2006/315327
申请日：2006-08-02
申请人：独立行政法人理化学研究所 , 横山茂之 , 坂本健作 , 柳沢達男 , 小林隆嗣
发明人：横山茂之 , 坂本健作 , 柳沢達男 , 小林隆嗣
IPC分类号： C12N15/00 , C12N15/09 , C12P21/00
CPC分类号： C12N9/93 , C12N15/67 , C12P19/34 , C12P21/02
摘要：　本発明は、アミノアシルｔＲＮＡ合成酵素と、アミノアシルｔＲＮＡ合成酵素の存在下で非天然型アミノ酸と結合可能なｔＲＮＡの核酸配列の５’末端に、真核生物由来ｔＲＮＡ核酸配列を結合させた配列を含む核酸と、非天然型アミノ酸と、所望の位置にナンセンス変異を受けた所望の蛋白質遺伝子と、を真核細胞中で発現させ、前記蛋白質のナンセンス変異の位置に前記非天然型アミノ酸を取り込ませて非天然型アミノ酸組み込み蛋白質を発現させることを特徴とする非天然型アミノ酸組み込み蛋白質の製造方法に関する。
摘要翻译：一种制备其中整合有非天然氨基酸的蛋白质的方法，该方法包括在真核细胞中表达氨酰基tRNA合成酶，该核酸包含具有来源于连接到该核酸的真核细胞的tRNA核苷酸序列的序列在氨基tRNA合成酶，非天然氨基酸存在下能够结合非天然氨基酸的tRNA核苷酸序列的5'末端和在预定位置具有无义突变的所需蛋白质的基因，将非天然氨基酸整合到蛋白质中的非确定突变位置，从而表达其中整合有非天然氨基酸的蛋白质。

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