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热词
    • 1. 发明申请
    • 고발현 재조합 세포주의 선별 방법
    • 选择高表达重组细胞系的方法
    • WO2010114270A2
    • 2010-10-07
    • PCT/KR2010/001912
    • 2010-03-30
    • (주)셀트리온조명삼장민석김종묵이현주송유철김만수
    • 조명삼장민석김종묵이현주송유철김만수
    • C12N15/65C12N15/64C12N15/52
    • C12N15/65C12N15/1086C12N15/69C12N15/85C12N2800/24C12N2830/46C12N2830/50C12P21/02
    • 본 발명은 (i) polyA가 작동 불가능하도록 연결된 선별 마커 유전자를 포함하는 유전자 발현 카세트; 및 (ii) polyA가 작동 가능하도록 연결된 목적 재조합 단백질을 암호화하는 유전자 발현 카세트를 포함하는 발현 벡터를 이용한 고발현 재조합 세포주의 선별 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 기존의 세포주 선별 방법보다 10 배 이상 적은 수의 세포군을 대상으로 고생산성 세포 클론의 선별이 가능하고, 특히 MTX의 양을 증가시키면서 수회 증폭 단계를 포함하는 통상적인 단계적 유전자 증폭 전략과 비교하여 저농도의 MTX를 사용하여 고생산성 세포 클론을 선별할 수 있으므로 세포주 개발 기간을 단축시킬 수 있고, MTX가 아닌 일반 선별 마커 유전자를 사용할 때에도 보다 효율적인 단백질의 생산이 가능하다.
    • 本发明涉及使用表达载体选择高表达重组细胞系的方法,所述表达载体包括:(i)含有聚A失活连接的选择标记基因的基因表达盒; 和(ii)用于编码polyA主动连接的靶重组蛋白的基因表达盒。 根据本发明的方法能够从常规细胞系选择方法的细胞群体中选出10倍以上细胞群体的高生产力细胞克隆。 特别地,与传统的分阶段基因扩增策略相比,本发明的方法使用低密度MTX选择高生产率细胞克隆来缩短开发细胞系所花费的时间,这增加了MTX的量并且包括几个扩增阶段。 在使用MTX以外的一般选择标记基因的情况下,本发明的方法实现了提高蛋白质生产效率。