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    • 10. 发明申请
    • RNAi-BASIERTE VERFAHREN ZUR SELEKTION VON TRANSFIZIERTEN EUKARYONTISCHEN ZELLEN
    • RNAi的基于流程来选择转染的真核细胞
    • WO2005123925A1
    • 2005-12-29
    • PCT/EP2005/006488
    • 2005-06-16
    • GBF - GESELLSCHAFT FÜR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBHHAFNER, MartinNAWRATH, KarinaMÜLLER, Werner
    • HAFNER, MartinNAWRATH, KarinaMÜLLER, Werner
    • C12N15/82
    • C12N15/8218C12N15/63C12N15/8209C12N15/821
    • Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer durch Inaktivierung oder Reduzierung einer endogenen Genfunktion selektionierbaren eukaryontischen Zelle, umfassend die Schritte (a) der Einführung einer oder mehrerer Vektoren in die Zelle und (b) der Expression einer von dem einen oder den mehreren Vektoren kodierten siRNA und vorzugsweise shRNA, die gegen ein endogenes selektionierbares Gen gerichtet ist und dieses inaktiviert, wobei die siRNA oder shRNA das Transkriptionsprodukt einer RNAi-Selektionskassette ist, wobei die Selektionskassette einen zumindest 19 Nukleotide langen Abschnitt der transkribierten Region des Gens umfasst, der funktionell mit einem Promoter und einem Transkriptionsterminationssignal verbunden ist. Darüber hinaus betrifft die Erfindung eine eukaryontische Zelle, umfassend eine RNAi-Selektionskassette die gegen ein endogenes selektionierbares Gen gerichtet ist, und dessen Funktion inaktiviert; wobei die RNAi-Selektionskassette einen zumindest 19 Nukleotide langen Abschnitt des Gens umfasst, der funktionell mit einem Promotor und einem Transkriptionsterminationssignal verbunden ist. Weiterhin betrifft die Erfindung Verfahren zur Herstellung eines transgenen Säugers, umfassend die Schritte: (a) Injektion der erfindungsgemäßen embryonalen Stammzelle oder einer nach dem erfindungsgemäßen Verfahren selektionierten embryonalen Stammzelle in Blastocysten eines Säugers, (b) Übertragen der Blastocysten in die Gebärmutter eines Säugers, und (c) Austragen des transgenen Säugers. Schliesslich betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung einer transgenen Pflanze.
    • 本发明涉及一种通过失活或减少内源基因的功能的真核细胞的制备选择的,包括(a)将一种或多种载体导入细胞中,和(b)由所述一个或多个载体siRNA的编码的蛋白质的表达的步骤 和优选的shRNA,被引导至内源选择基因和灭活,其中所述siRNA或shRNA是RNAi选择盒的转录产物,其中所述选择盒包括基因的转录区的至少19个核苷酸长的部分可操作地连接于启动子 并且被连接到转录终止信号。 此外,本发明涉及包含一种RNAi选择盒的真核细胞是针对内源选择基因,和失活的功能; 其中所述RNAi选择盒包括可操作地连接到启动子和转录终止信号的基因的至少19个核苷酸长的部分。 此外,本发明提供了制备转基因哺乳动物的方法而言,其包括以下步骤:(a)注入的本发明或通过本发明方法的胚胎干细胞selektionierten到哺乳动物的胚泡,(b)该胚泡转移到哺乳动物的子宫的胚胎干细胞,和 (c)中排出的转基因哺乳动物。 最后,本发明涉及用于产生转基因植物的方法。