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    • 4. 发明申请
    • VEKTORKONSTRUKTE UND VERFAHREN ZUR EXPRESSION UND SEKRETION VON POLYPEPTIDEN IN FILAMENTÖSEN PILZEN UNTER VERWENDUNG EINER SELBSTPROZESSIERENDEN 2A-SPALTSTELLE
    • 载体构建和表达的方法和丝状真菌多肽使用自加工2A-断开点的分泌
    • WO2008012028A1
    • 2008-01-31
    • PCT/EP2007/006448
    • 2007-07-19
    • AB ENZYMES GMBHNGUYEN, Khanh QWINTER, Bruno
    • NGUYEN, Khanh QWINTER, Bruno
    • C12N9/64
    • C12N15/80C07K2319/50C12P21/06
    • Die Erfindung betrifft ein Vektorkonstrukt zur Expression und Sekretion von Polypeptiden in filamentösen Pilzen, umfassend in 5'3'-Richtung in funktioneller Verknüpfung - gegebenenfalls einen Promotor, dem ein Enhancer vorangestellt sein kann, mindestens eine ein erstes Polypeptid codierende DNA-Sequenz, die eine Signalsequenz enthalten kann oder nicht, - gegebenenfalls eine DNA-Sequenz, die eine 2A-Spaltstelle oder eine davon abgeleitete Sequenz codiert, gegebenenfalls zusammen mit einer vorangestellten eine proteolytische Spaltstelle codierenden DNA- Sequenz oder gegebenenfalls eine DNA-Sequenz, die eine proteolytische Spaltstelle codiert, - eine ein zweites Polypeptid mit Signalsequenz codierende DNA- Sequenz, gegebenenfalls eine weitere DNA-Sequenz, die eine 2A-Spaltstelle oder eine davon abgeleitete Sequenz codiert, gegebenenfalls zusammen mit einer vorangestellten eine proteolytische Spaltstelle codierenden DNA-Sequenz oder gegebenenfalls eine DNA-Sequenz, die eine proteolytische Spaltstelle codiert, - gegebenenfalls eine ein drittes Polypeptid mit Signalsequenz codierende DNA-Sequenz, gegebenenfalls eine weitere DNA-Sequenz, die eine 2A-Spaltstelle oder eine davon abgeleitete Sequenz codiert, gegebenenfalls zusammen mit einer vorangestellten eine proteolytische Spaltstelle codierenden DNA-Sequenz oder gegebenenfalls eine DNA-Sequenz, die eine proteolytische Spaltstelle codiert, gegebenenfalls eine ein viertes Polypeptid mit Signalsequenz codierende DNA-Sequenz, einen Terminator, wobei in dem Konstrukt mindestens eine 2A-Spaltstelle oder eine davon abgeleitete Sequenz vorhanden ist.
    • 本发明涉及一种载体构建用于表达和包含可操作连接5'3“方向在丝状真菌多肽的分泌 - 任选地,启动子,增强子可以由编码第一多肽的DNA编码序列中的至少一个之前 可以含有信号序列或没有, - 如果合适的话,其编码2A切割位点或派生的序列,任选地编码,具有前置蛋白水解切割位点的DNA序列或一起的DNA序列,合适的话,编码蛋白水解分裂位点的DNA序列, - 与所述信号序列的DNA编码序列的第二多肽,任选地编码2A切割位点或编码序列与前面的蛋白水解裂解位点编码的DNA序列,或者,如果合适的衍生任选一起进一步的DNA序列的DNA序列, 一个proteolytisc 他切割位点进行编码, - 任选地具有编码DNA序列的信号序列的第三多肽,任选地编码2A切割位点或编码序列与前面的蛋白水解裂解位点编码DNA序列,或者,如果合适的衍生任选一起进一步的DNA序列, 编码蛋白水解切割位点,任选地与第四条多肽的DNA编码序列,终止子的信号序列,其中,在所述构建体的至少一个2A切割位点或由其衍生的序列存在的DNA序列。
    • 9. 发明申请
    • POLYPEPTIDE HAVING PHYTASE ACTIVITY AND INCREASED TEMPERATURE RESISTANCE OF THE ENZYME ACTIVITY, AND NUCLEOTIDE SEQUENCE CODING SAID POLYPEPTIDE
    • 具有植酸酶多肽酶的活性高,温度稳定性和这个编码核苷酸
    • WO2008055625A2
    • 2008-05-15
    • PCT/EP2007009522
    • 2007-11-02
    • AB ENZYMES GMBHNGUYEN KHANH QWINTER BRUNO
    • NGUYEN KHANH QWINTER BRUNO
    • C12N9/16
    • C12N9/16A23K10/14A23L29/06C12Y301/03026
    • The invention relates to a recombinant DNA molecule coding a polypeptide having phytase activity after being expressed in a prokaryotic or eukaryotic host cell. Said recombinant DNA molecule comprises a DNA sequence selected from among a) DNA sequences coding a polypeptide that has phytase activity and is obtained by varying the mature wild-type E. coli phytase sequence, the variation being selected from among i) the mutation lysine ? aspartic acid in position 74 (K74D), and/or ii) a combination of the mutations asparagine ? arginine in position 139 (N139R) and aspartic acid ? glutamic acid in position 142 (D142E), and/or iii) a combination of the mutations leucine ? isoleucine in position 145 (L145I) and leucine ? isoleucine in position 198 (L198I), and/or iv) a mutation valine ? proline in position 200 (V200P), and/or v) an N-terminal or C-terminal or an N-terminal and C-terminal addition of a sequence section of the acidic phosphatase of Aspergillus niger var. awamori or the phytase of Aspergillus niger, b) DNA sequences that are 70 to 100 percent homologous to the sequences listed under a), c) DNA sequences which are related to the sequences listed under a) and b) because of the degeneration of the genetic code. When expressed in a suitable host cell, the recombinant DNA molecule has increased temperature resistance as well as increased protease stability of the enzyme activity of the protein coded in said manner. Variations iii) and iv) are provided only in combination with a variation i), ii), and v). The invention also relates to the proteins coded thereby.
    • 本发明涉及一种重组DNA分子,它编码在表达后在原核或真核宿主细胞编码具有植酸酶活性的多肽,其中所述重组DNA分子包含来自编码多肽具有植酸酶活性的)DNA序列中选择的DNA序列, 成熟的野生型e的变化通过。 共/ I-植酸酶已经获得,变化从i是)突变赖氨酸? 天冬氨酸在位置74(K74D),和/或ii)所述突变的天冬酰胺的组合? 精氨酸在139(N139R)位置和天冬氨酸? 在位置142(D142E)谷氨酸,和/或iii)中的突变的亮氨酸的组合? 异亮氨酸在145(L145I)的位置和亮氨酸? 异亮氨酸在位置198(L198I),和/或iv)中的突变缬氨酸? 脯氨酸在位置200(V200P),和/或v)的N-末端或C-末端或N-和C-末端添加来自黑曲霉变种的酸性磷酸酶的序列部分。泡盛或黑曲霉的肌醇六磷酸酶,b)中 其具有70%至100%的同源性,以a的序列的DNA序列),c)中的DNA序列a)和b)中使用,由于具有根据包括在所述序列遗传密码的简并性,其中,所述 在合适的宿主细胞用如此编码的蛋白的酶活性的升高的温度和蛋白酶稳定性,其中,所述变化iii)和iv)的存在仅与我的变化组合表达时伴随的重组DNA分子),ii)和v)中,并 蛋白质由其编码。