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    • 4. 发明公开
    • 씨형 간염 바이러스의 아이알이에스 발현 세포에서만 선택적으로 유전자 활성을 유도하는 트랜스-스플라이싱 리보자임
    • 转移分离的RIBOZYME选择性诱导HEPATITIS中的基因活性C病毒内部RIBOSOME进入位点表达细胞
    • KR1020040031405A
    • 2004-04-13
    • KR1020020060839
    • 2002-10-05
    • 제노프라 주식회사
    • 이성욱류경주
    • C12N15/11
    • C12N15/1131C12N2310/12
    • PURPOSE: Trans-splicing ribozyme selectively inducing gene activity in hepatitis C virus(HCV) internal ribosome entry site(IRES)-expressing cells is provided, thereby destroying RNA of HCV or producing anti-viral protein in a HCV infected cell, to effectively treating HCV. CONSTITUTION: Trans-splicing ribozyme selectively inducing gene activity in hepatitis C virus(HCV) internal ribosome entry site(IRES)-expressing cells is the modified trans-splicing group I ribozyme, where a gene expressing in the in HCV IRES-expressing cells to inhibit HCV growth is present in 3' exon of trans-splicing group I ribozyme, and a gene corresponding to 3' region after a region spliced by the ribozyme from HCV IRES is positioned upstream the HCV proliferation inhibition-relating gene, and recognizes a specific site of HCV IRES when the trans-splicing ribozyme is injected to the HCV IRES-expressing cells to inhibit necessary gene expression of HCV or induce the HCV proliferation inhibition-relating gene, wherein the specific site of HCV IRES is 199U present in a loop site of domain IIIb.
    • 目的:提供丙型肝炎病毒(HCV)内部核糖体进入位点(IRES)表达细胞中选择性诱导基因活性的转录核酶,从而在HCV感染细胞中破坏HCV RNA或产生抗病毒蛋白,有效治疗 HCV。 构成:在丙型肝炎病毒(HCV)内部核糖体进入位点(IRES)表达细胞中选择性诱导基因活性的转录核酶是经修饰的转录组I核酶,其中在HCV IRES表达细胞中表达的基因 抑制HCV生长存在于转录组I核酶的3'外显子中,并且在由HCV IRES的核酶剪接的区域之后对应于3'区域的基因位于HCV增殖抑制相关基因的上游,并识别特异性 将转录核酶注射到表达HCV IRES的细胞中以抑制HCV的必需基因表达或诱导HCV增殖抑制相关基因的HCV IRES位点,其中HCV IRES的特异位点为199U存在于环状位点 的域IIIb。
    • 9. 发明公开
    • 생체내에서 생성된 ssDNA를 이용한 유전자 발현의 변화
    • 用体内生成的ssDNA改变基因表达
    • KR1020020059608A
    • 2002-07-13
    • KR1020027004395
    • 2000-10-04
    • 사이토제닉, 인크.
    • 콘라드,찰스,에이.첸,인
    • C12N15/10
    • C12N15/113C12N15/10C12N15/63C12N2310/111C12N2310/12C12N2310/53
    • 본발명은표적세포의생체내에서단일-가닥 cDNA (ss-cDNA)를생성함으로써표적세포에서표적핵산서열의발현을변화시키는방법에관한것이다. 표적세포는목적서열, 역위탠덤반복서열, 및상기역위탠덤반복서열의 3'에위치한프라이머결합부위를포함하는카세트로형질감염된다. 표적세포에의한카세트의전사는 RNA 주형을생성하고, 이 RNA 주형이역전사되어특정서열의 ss-cDNA를생성한다. 역전사효소/RNase H 코딩유전자도표적세포내로형질감염시킬수 있다. ss-cDNA는변형되어 ss-cDNA의 "스템-루프" 구조를이용함으로써모든벡터인접서열을제거하게되는데, 여기서상기스템-루프구조는역위탠덤반복서열로인해 ss-cDNA가스스로폴딩되어이중-가닥 DNA 스템이형성된것이다. 이중-가닥스템은하나이상의제한효소인식부위를함유하며, ssDNA로남아있는루프는임의의원하는뉴클레오티드일수 있는목적서열을포함한다. 이러한디자인으로인해, 스템-루프중간체의이중-가닥스템은바람직한상응제한효소(들)로절단되며, 루프부분 (즉, 목적서열)은그 후에선형화된단일-가닥 DNA 조각으로서방출된다. 이렇게방출된 (또는절단된) ssDNA 조각은, 존재한다면이중가닥스템으로부터의상류 5' 또는하류 3'에최소한의서열정보를함유한다. 결과의 ssDNA는내생성표적핵산서열에결합함으로써, 치료목적으로이중체또는삼중체핵산결합, 부위-지정돌연변이유발, 특정세포단백질에의결합에의한세포기능의손상, 및 RNA 스플라이싱기능의손상등을이용하여유전자를불활성화시켜상기서열의발현을변화시킨다.
    • 用于通过在体内靶细胞中产生单链cDNA(ss-cDNA)来改变靶细胞中靶核酸序列的表达的方法。 用包含感兴趣序列,反向串联重复和反向串联重复的引物结合位点3'的盒转染靶细胞。 由靶细胞转录盒产生RNA模板,其被逆转录以产生指定序列的ss-cDNA。 逆转录酶/ RNAse H编码基因也可以转染到靶细胞中。 通过利用ss-cDNA的“茎 - 环”结构来修饰ss-cDNA以除去所有侧翼载体序列,其由反向串联重复的结果形成,其允许ss-cDNA自身折回 ,形成双链DNA茎。 双链茎含有一个或多个限制性内切核酸酶识别位点,保留为ssDNA的环由感兴趣的序列组成,其可以是任何所需的核苷酸序列。 该设计允许茎 - 环中间体的双链茎被期望的相应的限制性内切核酸酶切割,然后将环部分或所关注的序列作为线性化的单链DNA片段释放。 这种释放(或切割的)ssDNA片段在双链茎上游5'或下游3'处含有最少的(如果有的话)序列信息。 所得的ssDNA结合内源性靶核酸序列以改变该序列的表达,以用于诸如基因失活的治疗目的,使用核酸的双链或三重结合,定点突变,通过结合特异性细胞蛋白中断细胞功能, 并干扰RNA剪接功能。