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1. 发明公开

KR1020160072423A 돼지유행성 설사병 바이러스의 외피 단백질을 이용한 백신 제조 및 항체 측정 방법 无效
标题翻译：疫苗生产和抗体测定方法，使用PEDV包膜蛋白
公开(公告)号：KR1020160072423A
公开(公告)日：2016-06-23
申请号：KR1020140179998
申请日：2014-12-15
申请人： 주식회사 한수양돈연구소
发明人： 주한수 , 정현규
IPC分类号： C07K1/14 , C07K14/165 , A61K39/215 , G01N33/53
CPC分类号： C07K1/14 , A61K39/215 , C07K1/18 , C07K14/165 , G01N33/53 , Y10S530/809
摘要： 본발명은돼지유행성설사병바이러스의외피단백질을이용한백신제조및 상기바이러스에대한항체측정방법에관한것으로서, 보다상세하게는 PEDV의야외분리주를 Vero 세포에감염시키고, 이로부터 PED 바이러스의외피단백질을분리하고추출하는방법, 상기분리된 PED 바이러스의외피단백질과광물성기름과유화제또는현탁촉진제를포함하는면역증강제를균일하게혼합하여제조되는 PED 바이러스의백신제조방법, 상기분리된 PED 바이러스의외피단백질(항원)을기판에흡착시키고이를돼지혈청과반응시켜 ELISA와방사성면역확산의원리가결합된 RIDEA법으로항체의농도를측정하는 PED 바이러스에대한혈중항체의측정방법, 및상기분리된 PED 바이러스의외피단백질을시험돼지에피내접종하고이를 DTH(Delayed type hypersensitivity reaction) 방법으로측정하는 PED 바이러스에대한세포내항체의측정방법을제공한다. 본발명에의한돼지유행성설사병바이러스의외피단백질을이용한백신제조방법과항체측정방법은신생자돈의폐사를예방할수 있으며, PED 바이러스의감염이의심되는돼지의바이러스감염여부를경제적이며간편하게진단할수 있다.
摘要翻译：本发明涉及一种使用猪流行性腹泻病毒的外皮蛋白制备疫苗和测定相对于病毒的抗体的方法，更具体地说，涉及用室外分离物感染Vero细胞的方法 PEDV，并从其中分离和提取PED病毒的外皮蛋白; 通过将分离的PED病毒的外皮蛋白与包含矿物油和乳化剂或悬浮促进剂的免疫增强剂均匀混合而制备的PED病毒疫苗的制备方法; 用于通过RIDEA方法测量抗体浓度的血液抗体的方法，其中ELISA和放射免疫测定扩散原理通过吸收分离的PED病毒的外皮蛋白（抗原）相结合，与猪血清反应的底物; 以及通过将分离的PED病毒的外皮蛋白皮内接种到测试猪中，以延迟型超敏反应（DTH）方法测量的相对于PED病毒的细胞的抗体的测定方法。根据本发明，使用猪流行性腹泻病毒的外皮蛋白，疫苗的制造方法和测定抗体的方法能够预防新生仔猪的死亡，能够经济且容易地诊断是否感染病毒一只感染PED病毒的猪是可疑的。

2. 发明授权

KR101618577B1 돼지유행성 설사병 바이러스 분리와 배양법, 저온 순화주와 혈청 내성주 제조법, 상기 바이러스의 외피 단백질의 추출방법 및 상기 바이러스에 감염된 동물의 혈청 진단 방법 有权
标题翻译：用于分离和繁殖低温适应和耐血清PEDV的PEDV制剂的方法提取PEDV包膜蛋白和用于猪血清中PEDV的抗体测试方法
公开(公告)号：KR101618577B1
公开(公告)日：2016-05-18
申请号：KR1020140099008
申请日：2014-08-01
申请人： 주식회사 한수양돈연구소
发明人： 주한수 , 정현규
IPC分类号： C12N7/01 , C07K14/165 , G01N33/53
摘要： 본발명은돼지유행성설사병바이러스분리와배양법, 저온순화주와혈청내성주제조법, 상기바이러스의외피단백질의추출방법및 본바이러스의혈청진단방법에관한것으로서, 보다상세하게는본 발명은 1) PEDV(돼지유행성설사병바이러스) RNA가검출확인된시료들을어린돼지에경구접종후설사발현초기에장 융모(intestinal villi)를함유하는소장내벽의장 유제액을수확하는단계; 2) 상기장 유제액의 PEDV를조직배양액으로 Vero 세포에감염시키는단계; 3) 상기 Vero 세포를트립신이함유된배양배지에서세포단분자막(monolayers)으로계대배양하는단계; 및 4) 상기 Vero 세포의계대배양에서 PEDV 특이성세포변성효과 (Cytopathic effects; CPE)를나타내는균주를확인하는단계;를포함하는 PEDV의분리및 배양방법, 상기방법으로분리된 PEDV 분리주를연속적으로저온에서계대배양하여저온순화된(low temperature adapted) PEDV 균주의제조방법, 1) 상기방법으로분리된 PEDV 분리주를 FCS(fetal calf serum)가함유된배지에서 Vero 세포에감염시키는단계; 2) 상기 Vero 세포를 FCS가결여되고저량의트립신이함유된배지에서바이러스를증식계대시키고, 최종적으로트립신이결여된배지에서 PEDV가증식할수 있도록상기 Vero 세포를연속적으로배양하는단계; 및 3) 상기 Vero 세포를점차 FCS 농도가증가하는혈청이함유된배지에서배양함으로써 PEDV를증식시키는단계;를포함하는 PED 바이러스혈청내성주 (PEDV rSerum)의제조방법, 1) 상기방법으로제조된 PED 바이러스혈청내성주 (PEDV rSerum)를 Vero 세포에감염시키고초기세포변성(cytopathic effects; CPE)시키는단계; 및 2) 상기세포변성된 Vero 세포로부터 PED rSerum 바이러스의외피단백질을추출하는단계;를포함하는 PED rSerum 바이러스의외피단백질의추출방법, 및 1) 상기방법으로제조된 PED 바이러스혈청내성주 (PEDV rSerum)를 Vero 세포에감염시키고, 상기감염된 Vero 세포를고정하는단계; 2) 상기고정된 Vero 세포를시험하고자하는돼지혈청으로희석시키는단계; 및 3) 상기희석된 Vero 세포를복제된바이러스역적정(back-titration), 형광색소또는효소가결합된항-돼지(anti-swine) IgG를반응시켜 Vero 세포가발색되도록유도및 ELISA와방사성면역확산의원리가결합된방사성면역확산효소분석법(RIDEA = radial immunodiffusion enzyme assay) 중에서선택된어느한 방법에의한 PED 바이러스혈청내성주를이용한 PED 바이러스감염된돼지의항체측정방법을제공한다. 본발명에의한돼지유행성설사병바이러스의항체측정방법은돼지전염성설사질병의원인체인돼지유행성설사병바이러스항체와면역학적으로결합성이있는시료내의돼지유행성설사병바이러스항원의존재를경제적이며간편하게진단할수 있다.

3. 发明公开

KR1020160015963A 돼지유행성 설사병 바이러스 분리와 배양법, 저온 순화주와 혈청 내성주 제조법, 상기 바이러스의 외피 단백질의 추출방법 및 상기 바이러스에 감염된 동물의 혈청 진단 방법 有权
标题翻译：用于分离和传播PEDV的方法，低温适应性和耐药性PEDV菌株的制备，PEDV包膜蛋白的提取，以及用于在猪血清中对PEDV进行抗体测试的方法
公开(公告)号：KR1020160015963A
公开(公告)日：2016-02-15
申请号：KR1020140099008
申请日：2014-08-01
申请人： 주식회사 한수양돈연구소
发明人： 주한수 , 정현규
IPC分类号： C12N7/01 , C07K14/165 , G01N33/53
CPC分类号： C12N7/02
摘要： 본발명은돼지유행성설사병바이러스분리와배양법, 저온순화주와혈청내성주제조법, 상기바이러스의외피단백질의추출방법및 본바이러스의혈청진단방법에관한것으로서, 보다상세하게는본 발명은 1) PEDV(돼지유행성설사병바이러스) RNA가검출확인된시료들을어린돼지에경구접종후설사발현초기에장 융모(intestinal villi)를함유하는소장내벽의장 유제액을수확하는단계; 2) 상기장 유제액의 PEDV를조직배양액으로 Vero 세포에감염시키는단계; 3) 상기 Vero 세포를트립신이함유된배양배지에서세포단분자막(monolayers)으로계대배양하는단계; 및 4) 상기 Vero 세포의계대배양에서 PEDV 특이성세포변성효과 (Cytopathic effects; CPE)를나타내는균주를확인하는단계;를포함하는 PEDV의분리및 배양방법, 상기방법으로분리된 PEDV 분리주를연속적으로저온에서계대배양하여저온순화된(low temperature adapted) PEDV 균주의제조방법, 1) 상기방법으로분리된 PEDV 분리주를 FCS(fetal calf serum)가함유된배지에서 Vero 세포에감염시키는단계; 2) 상기 Vero 세포를 FCS가결여되고저량의트립신이함유된배지에서바이러스를증식계대시키고, 최종적으로트립신이결여된배지에서 PEDV가증식할수 있도록상기 Vero 세포를연속적으로배양하는단계; 및 3) 상기 Vero 세포를점차 FCS 농도가증가하는혈청이함유된배지에서배양함으로써 PEDV를증식시키는단계;를포함하는 PED 바이러스혈청내성주 (PEDV rSerum)의제조방법, 1) 상기방법으로제조된 PED 바이러스혈청내성주 (PEDV rSerum)를 Vero 세포에감염시키고초기세포변성(cytopathic effects; CPE)시키는단계; 및 2) 상기세포변성된 Vero 세포로부터 PED rSerum 바이러스의외피단백질을추출하는단계;를포함하는 PED rSerum 바이러스의외피단백질의추출방법, 및 1) 상기방법으로제조된 PED 바이러스혈청내성주 (PEDV rSerum)를 Vero 세포에감염시키고, 상기감염된 Vero 세포를고정하는단계; 2) 상기고정된 Vero 세포를시험하고자하는돼지혈청으로희석시키는단계; 및 3) 상기희석된 Vero 세포를복제된바이러스역적정(back-titration), 형광색소또는효소가결합된항-돼지(anti-swine) IgG를반응시켜 Vero 세포가발색되도록유도및 ELISA와방사성면역확산의원리가결합된방사성면역확산효소분석법(RIDEA = radial immunodiffusion enzyme assay) 중에서선택된어느한 방법에의한 PED 바이러스혈청내성주를이용한 PED 바이러스감염된돼지의항체측정방법을제공한다. 본발명에의한돼지유행성설사병바이러스의항체측정방법은돼지전염성설사질병의원인체인돼지유행성설사병바이러스항체와면역학적으로결합성이있는시료내의돼지유행성설사병바이러스항원의존재를경제적이며간편하게진단할수 있다.
摘要翻译：本发明涉及一种分离培养猪流行性腹泻病毒（PEDV）的方法，低温适应型和耐血清型菌株的制备方法，提取PEDV衣壳蛋白的方法以及PEDV血清诊断方法。更具体地说，分离和培养PEDV的方法包括以下步骤：（1）口服接种到年轻猪中，检测出PEDV RNA的样品，然后从具有肠绒毛的小肠内壁收集肠溶液 ; （2）通过组织培养液在肠溶液中用PEDV感染Vero细胞; （3）使用细胞单层在含有胰蛋白酶的培养基中连续培养Vero细胞; 和（4）在Vero细胞的连续培养中检测表现出PEDV特异性细胞病变效应（CPE）的菌株。

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