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    • 7. 发明公开
    • 一种单分子dsDNA微阵列芯片制备方法
    • CN1590559A
    • 2005-03-09
    • CN03152881.3
    • 2003-09-01
    • 王进科李同祥陆祖宏
    • 王进科李同祥陆祖宏
    • C12Q1/68
    • 本发明提出一种新的在固相支持物表面制备单分子(unimolecular)双链脱氧核糖核酸(double-stranded DNA,dsDNA)微阵列(microarray)的方法。该方法首先用固相化学合成两条寡核苷酸,一条为靶寡核苷酸(target oligonucleotide),另一条为通用寡核苷酸(universaloligonucleotide);其中靶寡核苷酸从5′端到3′端含有如下构件:反向互补序列、蛋白质结合位点和通用寡核苷酸互补序列;通用寡核苷酸的5′端修饰特定化学基团,以便将DNA连接固定到固相支持物表面,3′端为羟基。芯片制备时,首先将靶寡核苷酸和通用寡核苷酸复性,将复性产物点印连接到固相支持物表面,制成寡核凸酸微阵列;对寡核苷酸微阵列进行在片(on-chip)DNA聚合酶延伸反应,使寡核苷酸微阵列成为双分子(bimolecular)dsDNA微阵列;将微阵列变性处理,使其成为单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)微阵列;将ssDNA微阵列进行DNA复性处理,使单链DNA自由3′端形成发卡(hairpin)结构;最后对复性的ssDNA微阵列再进行在片DNA聚合酶延伸反应,使ssDNA微阵列成为单分子(unimolecular)dsDNA微阵列。本发明制备的单分子dsDNA微阵列芯片,在基础分子生物学研究,特别是基因表达调控研究及生物医学研究,如DNA结合蛋白相关疾病诊断、药物作用机理和药物性分子筛选研究中有广泛的应用价值。
    • 10. 发明公开
    • 一种从复杂组分物质如中药和化学混合物中高通量筛选、捕获和分离目标分子的方法
    • CN1590560A
    • 2005-03-09
    • CN03152882.1
    • 2003-09-01
    • 王进科李同祥陆祖宏
    • 王进科陆祖宏李同祥
    • C12Q1/68
    • 本发明提出一种从复杂组分物质如中药和组合化学分子及其混合物中高通量筛选、捕获和分离目标分子的新方法。该方法首先针对特定目标的双链核酸结合蛋白特别是序列特异性DNA结合蛋白,如转录因子如NF-κB、核受体等,在固相支持物表面制备一种双链核酸微阵列芯片,使其双链核酸探针上嵌合双链核酸结合蛋白的结合位点,用以高通量测定量核酸结合蛋白与双链核酸微阵列芯片上各结合位点的亲合性,建立序列核酸结合蛋白与其芯片上各核酸靶点的结合亲合性标准参数体系;再用双链核酸微阵列芯片与复杂组分物质如中药和组合化学分子及其混合物反应,反应后通过检测核酸结合蛋白与其芯片上各核酸靶点的结合亲合性变化,筛选出那些与标准参数体系比较结合亲合性发生改变的核酸靶点;将其作为核酸亲合介质连接到层析柱表面,制备特异性核酸探针层析柱;再将复杂组分物质如中药和组合化学分子及其混合物灌柱,用核酸探针捕获复杂组分物质中与核酸探针特异结合的有效分子;最后经洗脱收获与核酸探针结合的有效分子,进行其化学性质、分子生物学基础及药理学研究,开发成为核酸结合蛋白的核酸靶点特异性候选药物。该发明的技术及思想体系,在基础分子生物学研究,特别是序列特异性DNA结合蛋白(转录因子)基因表达调控,以及生物医学研究,如序列特异性DNA结合蛋白(转录因子)相关疾病药物作用机理研究和药物性分子筛选中有广泛而重要的应用价值。