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    • 6. 发明公开
    • 用于增强细胞对肉毒神经毒素的特异性摄取的方法
    • CN108064310A
    • 2018-05-22
    • CN201680013526.0
    • 2016-03-03
    • 莫茨药物股份两合公司
    • 克劳迪娅·姚茨科卡尔-海因茨·艾泽勒格尔德·曼德克劳斯·芬克
    • C12Q1/02
    • G01N33/5058A47L9/00C09J7/40G01N1/30G01N2333/33G02B5/30G02F1/1335
    • 本发明提供了一种增强细胞对神经毒素多肽的特异性摄取的方法,所述方法包括:在允许神经毒素多肽发挥其生物活性的条件下,将对神经毒素中毒敏感的细胞与所述神经毒素多肽一起孵育一段时间,所述孵育包括以下步骤中的至少一个:(i)K+介导的细胞去极化,(ii)减少神经毒素多肽的暴露时间和/或(iii)在神经毒素多肽暴露期间搅动所述细胞,从而增强所述细胞对所述神经毒素多肽的特异性摄取。此外,本发明涉及一种直接测定细胞中神经毒素多肽的生物活性的方法,所述方法包括:a)在允许神经毒素多肽发挥其生物活性的条件下,将对神经毒素中毒敏感的细胞与所述神经毒素多肽一起孵育一段时间,所述孵育包括以下步骤中的至少一个:(i)K+介导的细胞去极化,(ii)减少神经毒素多肽的暴露时间和/或(iii)在神经毒素多肽暴露期间搅动所述细胞;b)固定所述细胞,并且任选地用洗涤剂透化所述细胞;c)使所述细胞与至少一种特异性结合未裂解底物和神经毒素裂解底物的第一捕获抗体和至少一种特异性结合神经毒素裂解底物的裂解位点的第二捕获抗体在允许所述捕获抗体与所述底物结合的条件下接触;d)使所述细胞与至少一种特异性结合所述第一捕获抗体的第一检测抗体在允许所述第一检测抗体与所述第一捕获抗体结合的条件下接触,从而形成第一检测复合物,并且使所述细胞与至少一种特异性结合所述第二捕获抗体的第二检测抗体在允许所述第二检测抗体与所述第二捕获抗体结合的条件下接触,从而形成第二检测复合物;e)测定步骤d)中的第一检测复合物和第二检测复合物的量;以及f)利用所述第二检测复合物,计算在所述细胞中被所述神经毒素多肽裂解的底物的量,从而测定所述细胞中所述神经毒素多肽的生物活性。