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    • 5. 发明专利
    • Métodos de despliegue de proteínas que contienen dominios Fc no covalentes sobre la superficie de células y métodos de selección de las mismas
    • ES2749716T3
    • 2020-03-23
    • ES15788326
    • 2015-10-27
    • MERCK PATENT GMBH
    • RHIEL LAURABECKER STEFANGUENTHER RALFHOCK BJOERNHELMAN DANIELTOISTER-ACHITUV MIRAKRAH SIMON
    • C12N15/10C07K14/315C07K14/36C12N1/19C12N5/10C12N15/31C12N15/62
    • Método para el despliegue de proteínas sobre la superficie de una célula huésped, comprendiendo el método: (a) introducir en una célula huésped al menos uno o más polinucleótidos que codifican una proteína de interés que se desea desplegar sobre la superficie de dicha célula huésped, en el que la proteína de interés comprende al menos un dominio Fc; (b) poner en contacto la superficie de dicha célula huésped con una cebadora etiqueta, donde dicha cebadora etiqueta es biotina, un derivado de biotina o un análogo de biotina o se une covalentemente a la superficie de dicha célula huésped; (c) poner en contacto la superficie de dicha célula huésped de (b) con una segunda etiqueta, donde la segunda etiqueta se une específicamente y no de forma covalente a dicha cebadora etiqueta y a dicha proteína de interés codificada por dichos al menos uno o más polinucleótidos, donde la segunda etiqueta es una proteína multimérica, que es o comprende una de entre proteína A, proteína L, proteína G, fusión de proteínas A-G, dominios E, D, A, B de la proteína A, fusionada con avidina, estreptavidina, neutravidina; (d) expresar dicho al menos uno o más polinucleótidos en dicha célula huésped en condiciones suficientes para la secreción de dicha proteína de interés codificada por el al menos uno o más polinucleótidos; (e) poner en contacto dichas células huésped de la etapa (d) con medios para detectar específicamente dicha proteína de interés unida no covalentemente mediante dicha segunda etiqueta y detectar las células huésped que despliegan la proteína de interés sobre su superficie, donde el medio para detectar específicamente dicha proteína de interés es uno de entre un anticuerpo policlonal, anticuerpo monoclonal, scFv-Fc, scFv, (Fab')2, Fab, minianticuerpo, dianticuerpo o anticuerpo VHH; opcionalmente acoplado a una etiqueta adicional y donde la etiqueta adicional es una etiqueta fluorescente o radioisótopo.