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    • 5. 发明公开
    • METHODS AND ARRAYS FOR PRODUCING AND SEQUENCING MONOCLONAL CLUSTERS OF NUCLEIC ACID
    • 产生和测序核酸单克隆聚类的方法和阵列
    • EP3218511A1
    • 2017-09-20
    • EP15793823.4
    • 2015-11-11
    • Illumina Cambridge Limited
    • GUNDERSON, Kevin L.BAI, JingweiKELLINGER, Matthew WilliamBEIERLE, John M.BOUTELL, Jonathan MarkRIGATTI, RobertoROGERT BACIGALUPO, Maria CandelariaBOYANOV, BoyanMAISINGER, Klaus
    • C12Q1/68B01J19/00C40B40/06C40B50/14
    • The present disclosure relates to the field of molecular biology and more specifically to microarrays and methods.
    • 用于在固体表面上,特别是在微阵列中的孔中捕获和扩增靶多核苷酸的方法,其中所述微阵列可以包含a)包含至少一个孔,围绕所述孔的表面和内井表面的基底; b)覆盖内井表面并包含至少一个第一捕获引物对的第一层; 和c)覆盖第一层和围绕井的表面的第二层。 或者,微阵列可以包含a)包含至少一个孔,包围孔的表面和内部孔表面的基底; 和b)覆盖内井表面并包含至少一个第一捕获引物对和至少一个第二捕获引物对的层。 具体地,动力排斥扩增用于在孔中产生核酸的单克隆群体。 本申请还公开了修饰固定化捕获引物的方法,其包括:a)使包含多个固定化捕获引物的底物与多种模板核酸接触以产生一种或多种固定化模板核酸,其中所述多种固定化捕获引物 包含包含3'末端通用捕获区域Y的第一多个引物, 引物P5和包含3'末端通用捕获区域Z的第二多个引物,例如, 引物P7; 并且其中每个模板核酸侧翼为5'-末端和3'-末端通用捕获区Y或Z并且包含一个或多个,例如, SapI,限制性位点和一个或多个限制性位点与3'-末端通用捕获区域之间的目标特异性捕获区域; 和b)延伸一种或多种固定的捕获引物。 最后,本申请公开了用于修饰固定化捕获引物的方法,其包括:a)使包含多种固定化捕获引物的底物与多种不同种子核酸接触以产生多种不同的固定化种子核酸; b)延伸两种或更多种固定的捕获引物以产生与多种不同的固定化种子核酸中的两种或更多种互补的多种不同的固定延伸产物; 和c)活化所述多种不同的固定延伸产物中的一种固定延伸产物,以形成活化的捕获引物。