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    • 7. 发明专利
    • Métodos y soportes sólidos para la preparación de muestras utilizando transposomas
    • ES2699262T3
    • 2019-02-08
    • ES14728620
    • 2014-01-08
    • ILLUMINA CAMBRIDGE LTD
    • GORMLEY NIALLSMITH GEOFFREY
    • C12Q1/6869C12Q1/6834
    • Un método para preparar una biblioteca inmovilizada de fragmentos de ADN marcados que comprende: (a) proporcionar un soporte sólido que tiene una pluralidad de complejos de transposoma inmovilizados en el mismo, en donde cada complejo de transposoma comprende: una transposasa unida de manera no covalente a un primer polinucleótido de un ácido nucleico bicatenario que comprende el primer y un segundo polinucleótido, en donde dicho primer polinucleótido está inmovilizado en dicho soporte sólido, y en donde dicho primer polinucleótido comprende (i) una parte 3' que comprende una secuencia terminal de transposón y (ii) un primer marcador que comprende un primer dominio de marcador; y en donde dicho segundo polinucleótido comprende una región complementaria a dicha secuencia terminal de transposón; y en donde los complejos de transposoma son homodímeros, comprendiendo los homodímeros una primera pluralidad de homodímeros que comprenden un primer marcador de una primera secuencia y una segunda pluralidad de homodímeros que comprenden un primer marcador de una segunda secuencia; (b) aplicar un ADN bicatenario diana al soporte sólido en condiciones en las que el ADN diana es fragmentado por los complejos de transposomas y la secuencia terminal de transposón en 3' del primer polinucleótido se transfiere a un extremo 5' de al menos una cadena de los fragmentos; produciendo de este modo una biblioteca inmovilizada de fragmentos bicatenarios en donde al menos una cadena está marcada en 5' con el primer marcador de la primera secuencia y al menos una cadena está marcada en 5' con el primer marcador de la segunda secuencia.
    • 9. 发明专利
    • Método de preparación de bibliotecas de polinucleótidos plantilla
    • ES2732253T3
    • 2019-11-21
    • ES11004071
    • 2006-10-31
    • ILLUMINA CAMBRIDGE LTD
    • GORMLEY NIALLSMITH GEOFFREYBENTLEY DAVIDRIGATTI ROBERTO
    • C12Q1/68
    • Un método de generación de una biblioteca de moléculas polinucleotídicas plantilla que tienen secuencias comunes en sus extremos 5' y secuencias comunes en sus extremos 3', comprendiendo el método: proporcionar uno o más dúplex de polinucleótido diana con extremos romos, añadir un solo desoxinucleótido "A" a ambos extremos 3' de los dúplex de polinucleótido diana, produciendo así un saliente de una base en 3', ligar polinucleótidos adaptadores con apareamiento erróneo idéntico en los dos extremos de cada uno de uno o más dúplex de polinucleótido diana para formar una o más construcciones adaptador-diana, en el que cada adaptador con apareamiento erróneo se forma a partir de dos cadenas polinucleotídicas hibridadas que forman un complejo bimolecular que comprende al menos una región bicatenaria y una región no apareada, y en el que cada adaptador con apareamiento erróneo comprende un saliente de una sola base en 3' que comprende un nucleótido "T" en el extremo bicatenario, que es complementario al saliente de una sola base en 3' que comprende un nucleótido "A" en los dúplex de polinucleótido diana, realizar una reacción inicial de extensión de cebador en la que un oligonucleótido cebador hibrida con una parte de adaptador de cada una de las construcciones adaptador-diana y se extiende por adición secuencial de nucleótidos para formar productos de extensión complementarios a al menos una cadena de cada una de las construcciones adaptador-diana, en el que los productos de extensión, y opcionalmente los productos de amplificación derivados de los mismos, proporcionan en su conjunto una biblioteca de moléculas polinucleotídicas plantilla que tienen secuencias comunes en sus extremos 5' y secuencias comunes en sus extremos 3'; en el que los dúplex de polinucleótido diana a ligar son una mezcla compleja de fragmentos de ADN genómico que representan un genoma completo o esencialmente completo, y en el que la biblioteca de moléculas polinucleotídicas plantilla generadas es representativa del genoma completo o esencialmente completo.