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    • 9. 发明专利
      ES2739808T3 Producción de proteínas heterodiméricas 未知
    • Producción de proteínas heterodiméricas
    • ES2739808T3
    • 2020-02-04
    • ES12783931
    • 2012-10-26
    • GENMAB AS
    • GRAMER MICHAEL , KUNDU AMITAVA , VAN DEN BREMER EWALD T J , VAN KAMPEN MURIEL , PRIEM PATRICK , LABRIJN ARAN FRANK , MEESTERS JOYCE , NEIJSSEN JOOST J , SCHUURMAN JANINE , PARREN PAUL , VAN BERKEL PATRICK , VOS WERNER L , GERRITSEN ARNOUT
    • C07K16/28 , C07K16/46
    • Un método in vitro para la producción de un anticuerpo biespecífico de longitud completa que comprende las etapas siguientes: a) incubar un primer anticuerpo de longitud completa con un segundo anticuerpo de longitud completa en condiciones reductoras suficientes para permitir la reducción de los enlaces disulfuro intracatenarios en la región bisagra, y en el que la región CH3 de dicho primer anticuerpo de longitud completa es la primera región CH3 y tiene un Arg en la posición 409, y la región CH3 de dicho segundo anticuerpo de longitud completa es una segunda región CH3 y tiene: (i) un Asp, Glu, Gly, Asn, Arg, Ser, Thr, Val o Trp en la posición 368; (ii) una Phe, His, Lys, Arg o Tyr en la posición 399; (iii) una Gly, Leu, Met o Trp en la posición 407 y una Lys en la posición 409, y en el que la primera CH3 tiene además un Tyr en la posición 407; o (iv) un aminoácido distinto de Phe, Arg o Gly en la posición 405 y tiene una Lys en la posición 409, y en el que la primera CH3 tiene además una Phe en la posición 405, de tal manera que las secuencias de dichas primera y segunda regiones CH3 son diferentes y tales que la interacción heterodimérica entre dichas primera y segunda regiones CH3 es más fuerte que cada una de las interacciones homodiméricas de dichas primera y segunda regiones CH3, en el que las posiciones de los aminoácidos están numeradas de acuerdo con el índice de la UE como se describe en Kabat, en el que dichos primer y segundo anticuerpos de longitud completa se unen a diferentes epítopos, en el que dichos primeros y segundos anticuerpos de longitud completa: 1) cada uno tiene una región Fc con una secuencia de aminoácidos que es de un isotipo IgG1; 2) cada uno tiene una región Fc con una secuencia de aminoácidos que es de un isotipo IgG2; 3) cada uno tiene una región Fc con una secuencia de aminoácidos que es de un isotipo IgG3; o 4) cada uno tiene una región Fc con una secuencia de aminoácidos que es de un isotipo IgG4; y en el que dicho primer y segundo anticuerpos son anticuerpos humanizados o en el que dicho primer y segundo anticuerpos comprenden cada uno una cadena pesada de longitud completa de un anticuerpo humano; y además en el que la etapa a) comprende la incubación durante al menos 90 minutos a una temperatura de al menos 20 ºC en presencia de 2-mercaptoetilamina a una concentración de al menos 25 mM; b) someter al menos 10 ml de la composición obtenida de la etapa a) en condiciones oxidantes suficientes para permitir la oxidación de las cisteínas en el anticuerpo biespecífico de longitud completa a enlaces disulfuro intracatenarios y c) obtener el anticuerpo biespecífico de longitud completa.
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