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    • 9. 发明专利
    • METODOS Y COMPOSICIONES PARA EL TRATAMIENTO DE TRANSTORNOS.
    • ES2366617T3
    • 2011-10-21
    • ES04760083
    • 2004-04-21
    • EPEIUS BIOTECHNOLOGIES CORP
    • GORDON ERLINDA MHALL FREDERICK L
    • A01N63/00A61K20060101A61K48/00C07H21/04C07K14/47C12N15/63C12N15/85C12N15/867
    • Método para producir un vector de administración dirigida que comprende partículas retrovirales para inhibir la metástasis tumoral, comprendiendo dicho método las siguientes etapas: A) transfección transitoria de una célula productora con: i) un primer plásmido que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína anfotrópica de envoltura 4070A modificada para contener un dominio de enlace de colágeno, en el que la secuencia de ácido nucleico está enlazada operativamente a un promotor, y en el que el dominio de enlace de colágeno comprende la secuencia de aminoácido Gly-His-Val-Gly-Trp-Arg-Glu-Pro-Ser-Phe Met-Ala-Leu-Ser-Ala-Ala obtenida a partir del dominio D2 del factor de von Willebrand; ii) un segundo plásmido, que comprende: (a) una secuencia de ácido nucleico enlazada operativamente a un promotor, y en el que la secuencia codifica un polipéptido retroviral gag-pol, (b) una secuencia de ácido nucleico enlazada operativamente a un promotor, y en el que la secuencia codifica un polipéptido que confiere resistencia a medicamentos a la célula productora, (c) un origen de SV40 de replicación; iii) un tercer plásmido, que comprende: (a) una secuencia heteróloga de ácido nucleico enlazada operativamente a un promotor, y en el que la secuencia codifica un polipéptido de diagnóstico o terapéutico, (b) secuencias de repetición terminal larga 5'y 3'(LTRs), (c) una secuencia de empaquetado retroviral Ψ (d) un promotor CMV antepuesto a la LTR 5' (e) una secuencia de ácido nucleico enlazada operativamente a un promotor, y en el que la secuencia codifica un polipéptido que confiere resistencia a medicamentos a la célula productora, (f) un origen de SV40 de replicación, en el que la célula productora es una célula humana que expresa un antígeno grande T de SV40; B) cultivar las células productoras según A) en condiciones que permitan la producción de vectores de administración dirigida y su liberación en los sobrenadantes del cultivo; (C) aislar e introducir los sobrenadantes en un sistema de colector de bucle cerrado que comprende una bolsa tipo flexboy® y un sistema de colector, en el que la bolsa tipo flexboy está formada por una película coextrusionada de tres capas que consta de una capa de contacto con el fluido fabricada con etil vinil acetato, una barrera al gas de Etilen vinil alcohol y una capa exterior de etil vinil acetato para la recolección de las partículas virales; (D) recogida y concentración de los vectores de administración dirigidos, y (E) tratamiento de dichos vectores de administración dirigidos con un agente de degradación del ADN que no provoque una pérdida de la potencia del vector.