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1. 发明申请

WO1991007651A1 TWO-PHOTON LASER SCANNING MICROSCOPY 审中-公开
标题翻译：双光子激光扫描显微镜
公开(公告)号：WO1991007651A1
公开(公告)日：1991-05-30
申请号：PCT/US1990006482
申请日：1990-11-13
申请人： CORNELL RESEARCH FOUNDATION, INC.
发明人： CORNELL RESEARCH FOUNDATION, INC. , DENK, Winfried , STRICKLER, James, P. , WEBB, Watt, W.
IPC分类号： G01N21/64
CPC分类号： G01N21/6402 , G01N21/631 , G01N21/6428 , G01N21/6456 , G01N21/6458 , G01N2021/6415 , G02B21/0076 , G11B7/004 , G11B7/12 , G11B7/1362
摘要： A laser scanning microscope (10) produces molecular excitation in a target material by simultaneous absorption of two photons to thereby provide intrinsic three-dimensional resolution. Fluorophores having single photon absorption in the short (ultraviolet or visible) wavelength range are excited by a stream of strongly focused subpicosecond pulses of laser light (14) of relatively long (red or infrared) wavelength range. The fluorophores absorb at about one half the laser wavelength to produce fluorescent images of living cells and other microscopic objects. The fluorescent emission from the fluorophores increases quadratically with the excitation intensity so that by strongly focusing the laser light (14), fluorescence as well as photobleaching are confined to the vicinity of the focal plane (18). This feature provides depth of field resolution comparable to that produced by confocal laser scanning microscopes, and in addition reduces photobleaching. Scanning of the laser beam (14), by a laser scanning microscope (10), allows construction of images by collecting two-photon excited fluorescence from each point in the scanned object while still satisfying the requirement for very high excitation intensity obtained by focusing the laser beam (14) and by pulse time compressing the beam. The focused pulses also provide three-dimensional spatially resolved photochemistry which is particularly useful in photolytic release of caged effector molecules.

2. 发明公开

EP0500717A1 TWO-PHOTON LASER SCANNING MICROSCOPY 失效
标题翻译：双光子激光扫描显微镜
公开(公告)号：EP0500717A1
公开(公告)日：1992-09-02
申请号：EP90917225.0
申请日：1990-11-13
申请人： CORNELL RESEARCH FOUNDATION, INC.
发明人： DENK, Winfried , STRICKLER, James, P. , WEBB, Watt, W.
IPC分类号： G01N21 , G02B21 , G11B7
CPC分类号： G01N21/6402 , G01N21/631 , G01N21/6428 , G01N21/6456 , G01N21/6458 , G01N2021/6415 , G02B21/0076 , G11B7/004 , G11B7/12 , G11B7/1362
摘要： Un microscope à balayage laser (10) provoque l'excitation moléculaire d'un matériau cible par absorption simultanée de deux photons entraînant ainsi une résolution tridimensionnelle intrinsèque. Des fluorogènes présentant une absorption de photons unique dans les longueurs d'ondes courtes (ultraviolet ou visible) sont excités par un flux d'impulsions (14), inférieures à la picoseconde et fortement focalisées, de lumière laser d'étendue de longueur d'onde relativement longue (rouge ou infrarouge). Les fluorogènes absorbent à au moins une demie longueur d'onde laser de manière à produire des images fluorescentes de cellules vivantes et d'autres objets microscopiques. L'émission fluorescente provenant des fluorogènes augmente de façon quadratique avec l'intensité d'excitation de telle sorte qu'en focalisant fortement la lumière laser (14), la fluorescence aussi bien que le photoblanchissement sont limités au niveau du plan focal (18). Cette caractéristique fournit une profondeur de résolution de champ comparable à celle produite par des microscopes à balayage laser à foyer commun, et de plus réduit le photoblanchissement. Le balayage du faisceau laser (14), par un microscope à balayage laser (10), permet une construction d'images par réception de fluorescence causée par deux photons à partir de chaque point dans l'objet balayé tout en satisfaisant l'exigence d'une intensité d'excitation très élevée obtenue par la focalisation du faisceau laser (14) et par la compression d'impulsions du faisceau. Les impulsions focalisées assurent également une photochimie à résolution spatiale tridimensionnelle qui est particulièrement utile dans la libération photolytique de molécules effectrices en cage.
摘要翻译：扫描激光显微镜（10）通过同时吸收两个光子导致目标材料的分子激发，导致固有的三维分辨率。荧光具有在短波长的单光子吸收（紫外光或可见光）通过脉冲流（14），小于一皮秒和高度集中，激光光扩展的长度激发相对较长的波（红色或红外线）。荧光素吸收至少一半的激光波长以产生活细胞和其他微观物体的荧光图像。从荧光团的荧光发射与激励强度的二次方增加，使得由强烈聚焦的激光（14），荧光以及所述photoblanchissement被限制到焦平面（18）。该特性提供了与普通激光扫描显微镜相媲美的现场分辨率深度，并进一步减少了光漂白。激光扫描显微镜（10）对激光束（14）的扫描允许通过来自扫描物体中每个点的两个光子引起的荧光接收进行图像构建，同时满足通过激光束（14）的聚焦和通过压缩光束的脉冲获得非常高的激发强度。聚焦脉冲还提供三维空间分辨率光化学，其特别用于笼状效应分子的光解释放。

3. 发明授权

EP0500717B1 TWO-PHOTON LASER SCANNING MICROSCOPY 失效
标题翻译： ZWEIWELLENLÄNGENLASERABTASTMIKROSKOP
公开(公告)号：EP0500717B1
公开(公告)日：1998-09-02
申请号：EP90917225.6
申请日：1990-11-13
申请人： CORNELL RESEARCH FOUNDATION, INC.
发明人： DENK, Winfried , STRICKLER, James, P. , WEBB, Watt, W.
IPC分类号： G02B21/00 , G01N21/64 , G11B7/00
CPC分类号： G01N21/6402 , G01N21/631 , G01N21/6428 , G01N21/6456 , G01N21/6458 , G01N2021/6415 , G02B21/0076 , G11B7/004 , G11B7/12 , G11B7/1362

4. 发明授权

EP0500717B2 TWO-PHOTON LASER SCANNING MICROSCOPY 失效
标题翻译：双光子激光扫描显微镜
公开(公告)号：EP0500717B2
公开(公告)日：2003-11-19
申请号：EP90917225.6
申请日：1990-11-13
申请人： CORNELL RESEARCH FOUNDATION, INC.
发明人： DENK, Winfried , STRICKLER, James, P. , WEBB, Watt, W.
IPC分类号： G02B21/00 , G01N21/64 , G11B7/00
CPC分类号： G01N21/6402 , G01N21/631 , G01N21/6428 , G01N21/6456 , G01N21/6458 , G01N2021/6415 , G02B21/0076 , G11B7/004 , G11B7/12 , G11B7/1362

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