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    • 3. 发明专利
    • Algoritmo y un método in vitro basado en la edición de ARN para seleccionar un efecto particular inducido porcompuestos activos
    • ES2848949T3
    • 2021-08-13
    • ES17724104
    • 2017-03-13
    • ALCEDIAGCENTRE NAT RECH SCIENT
    • WEISSMANN DINAHVAN DER LAAN SIEMSALVETAT NICOLASMOLINA FRANCKPUJOL JEAN-FRANÇOIS
    • C12Q1/6883G16B15/00
    • Un metodo implementado por ordenador para predecir la probabilidad o el riesgo de un farmaco, un compuesto o una molecula, de inducir efectos particulares en un paciente, preferentemente efectos secundarios, con mayor preferencia efectos secundarios adversos o deseados, dicho metodo usa como una diana que exhibe una edicion A a I de ARN, cuyo pre-ARNm es el sustrato de enzimas ADAR, la accion de dichas ADAR conduce a la produccion de diferentes isoformas o sitios, en donde dicho metodo comprende las etapas de: A) Analizar el perfil de edicion de ARN de la diana en una muestra que se ha tratado con dicho farmaco o compuesto o molecula, con el fin de obtener la proporcion de nivel de edicion de ARN de dicha diana para cada una de sus isoformas de edicion, y, en donde dicho perfil de edicion de ARN de la diana se obtiene segun se obtiene para una molecula de la coleccion de moleculas en el algoritmo obtenido para dichos efectos particulares, y en donde dicho algoritmo es un algoritmo para predecir in vitro la probabilidad de que un compuesto induzca un efecto particular en un paciente, en donde dicho algoritmo o modelo se obtiene por un metodo que comprende las etapas de: a) - seleccionar al menos una diana que exhibe una edicion A a I de ARN, cuyo pre-ARNm es el sustrato de las enzimas ADAR (adenosina desaminasas que actuan sobre el ARN), la accion de dichas ADAR en al menos un sitio de edicion conduce a la produccion de diferentes isoformas o sitios, - seleccionar al menos una linea celular que exprese endogenamente dicha al menos una diana y al menos las enzimas ADAR, - seleccionar un compuesto de control positivo que pueda alterar de manera dependiente de la dosis la proporcion relativa de dichas isoformas de la diana o sitios de edicion cuando las celulas de dicha linea celular se tratan con dicho control positivo, - seleccionar una coleccion de moleculas compuesta por una proporcion de compuestos anotados con una puntuacion de riesgo para inducir dichos efectos particulares, b) tratar las celulas de dicha linea celular con cada molecula individual de dicha coleccion de moleculas, junto con un control negativo y dicho control positivo, c) analizar dicho al menos un perfil de edicion de ARN de la diana en cada muestra que se ha tratado con una molecula de la coleccion, con el fin de obtener la proporcion del nivel de edicion de ARN de dicha diana para cada una de sus isoformas y/o sitios de edicion para cada una de las moleculas de dicha coleccion, d) -i) mediante un metodo estadistico de analisis univariado, evaluar para cada isoforma/o sitio de edicion su precision y su poder para discriminar el riesgo de que una molecula induzca dichos efectos particulares; y/o -ii) mediante un metodo estadistico de analisis multivariado, evaluar para cada combinacion de isoformas/o sitios de edicion, su precision y su poder para discriminar el riesgo de que una molecula induzca dichos efectos particulares, y -iii) seleccionar la combinacion que exhiba el mejor desempeno discriminativo, e) construir un algoritmo con el uso de dicha combinacion seleccionada de isoformas/o sitios de edicion, y usar dicho algoritmo asi obtenido para predecir la probabilidad de que dicho compuesto induzca dichos efectos particulares en un paciente, y: en donde la etapa d)-i) comprende una etapa de calcular para cada isoforma o una combinacion de estas: - el umbral optimo de sensibilidad (Se %) de al menos 60 y especificidad (Sp %) de al menos 60 % para dichos efectos particulares; - los valores predictivos positivos (PPV, %) y negativos (NPV, %) para evaluar la proporcion de verdadera presencia [verdadero positivo / (verdadero positivo+ falso positivo] y verdadera ausencia [verdadero negativo / (verdadero negativo+ falso negativo)]; y en donde en la etapa c), el perfil de edicion de ARN se lleva a cabo mediante un metodo que incluye: - metodo NGS (secuenciacion de proxima generacion) que comprende la preparacion de una genoteca de NGS; y - la secuenciacion de todas las genotecas de NGS obtenidas, para obtener el perfil de edicion de la diana; y en donde en la etapa d)-i) y d)-ii), dicho metodo estadistico que permite la obtencion de dicho algoritmo o modelo se lleva a cabo mediante un metodo que incluye un metodo o una combinacion de metodos seleccionados del grupo que consiste en: - programa mROC, en particular para identificar la combinacion lineal, que maximiza la ROC AUC (Area bajo la curva) y en donde se proporciona la ecuacion para la combinacion respectiva y se puede usar como un nuevo marcador virtual Z, de la siguiente manera: Z = a1. (Isoforma 1) + a2. (Isoforma 2) + ...ai. (Isoforma i) + ⋯an. (Isoforma n) donde a1 son los coeficientes calculados e (Isoforma i) es la proporcion relativa del nivel de edicion de ARN individual de la diana de la isoforma; y/o - un modelo de regresion logistica aplicado para analisis univariado y multivariado para estimar el riesgo relativo de moleculas a diferentes valores de las isoformas; y/o - un enfoque CART (arboles de clasificacion y regresion) aplicado para evaluar combinaciones de isoformas; y/o - un enfoque de bosque aleatorio (RF) aplicado para evaluar las combinaciones de isoformas, en particular para clasificar la importancia de la isoforma de edicion y combinar las mejores isoformas para clasificar el "riesgo relativo" de la molecula, y/o - un analisis multivariado aplicado para evaluar la combinacion de isoformas para el "riesgo relativo" de las moleculas, que se selecciona del grupo que consiste en como - enfoque de maquina de vectores de soporte (SVM); - enfoque de red neuronal artificial (ANN); - Enfoque de red bayesiana; - enfoque wKNN (k vecinos mas cercanos ponderados); - minimo cuadrado parcial - analisis discriminante (PLS-DA); - analisis discriminante lineal y cuadratico (LDA / QDA);
    • 5. 发明申请
    • EARLY PREDICTION MARKERS OF DIABETIC NEPHROPATHY
    • 糖尿病肾病早期预测标志物
    • WO2016001215A3
    • 2016-02-18
    • PCT/EP2015064831
    • 2015-06-30
    • BIO RAD INNOVATIONSCENTRE NAT RECH SCIENT
    • GRANIER CLAUDEMOLINA FRANCKSALVETAT NICOLASMOLINA LAURENCESIALA RANDARENARD ERIC
    • G01N33/68
    • G01N33/6893G01N27/44778G01N33/6848G01N2800/042G01N2800/347G01N2800/50
    • The present invention concerns a method for the in vitro detection of an increased risk of diabetic nephropathy in a subject suffering from diabetes and being normoalbuminuric. Another aspect of the invention pertains to a method for the in vitro identification of a marker for prediction of diabetic nephropathy. Finally, the invention concerns a kit comprising means for detecting at least two proteins selected from the group consisting of heparan sulfate proteoglycan core protein or fragments thereof, carbonic anhydrase 1, prothrombin or fragments thereof, tetranectin, CD59 glycoprotein, plasma serine protease inhibitor, mannan-binding lectin serine protease 2 or isoforms thereof, antithrombin-III, alpha-1-antitrypsin, collagen alpha-1(I) chain, alpha-enolase, histone H2B type 1-O, glutaminyl-peptide cyclotransferase, protein AMBP and zinc-alpha-2-glycoprotein.
    • 本发明涉及用于体外检测糖尿病患者中糖尿病肾病风险增加且为正常白蛋白尿的方法。 本发明的另一方面涉及体外鉴定用于预测糖尿病肾病的标志物的方法。 最后,本发明涉及一种试剂盒,其包括用于检测选自硫酸乙酰肝素蛋白多糖核心蛋白或其片段,碳酸酐酶1,凝血酶原或其片段,四连蛋白,CD59糖蛋白,血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂,甘露聚糖 结合凝集素丝氨酸蛋白酶2或其同工型,抗凝血酶-III,α-1-抗胰蛋白酶,胶原蛋白α-1(I)链,α-烯醇化酶,组蛋白H2B1-O型,谷氨酰胺酰肽 - 环转移酶,蛋白质AMBP和锌 - α-2-糖蛋白。