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    • 6. 发明专利
    • VARIANTES DE LA CHAPERONINA 10.
    • MX2012004067A
    • 2012-08-03
    • MX2012004067
    • 2010-10-08
    • CBIO LTD
    • NAYLOR DEAN JASONHOWARD CHRISTOPHER BRUCEWARD LINDA ALLISONBROWN RICHARD JAMESBAKKER CHRISTOPHER JOHN DESTOK JEANETTE ELIZABETHJAMES ANDREW LEIGHLAMBERT DANIEL SCOTTRALSTON KYLIE JANEHEUMEN WALTER RENE ANTONIUS VAN
    • A61K38/16A61P37/02C07K14/47C12N15/12
    • Como se demuestra en la presente, se encontró que determinados cambios en el dominio N-terminal del polipéptido Cpn10 mejoran la unión a los PAMP y DAMP. Se cree que esto mejora la capacidad inmunosupresora de las variantes de la Cpn10 y en particular, su efecto sobre la producción y liberación de mediadores inflamatorios inducidos por la señalización PRR. En un primer aspecto, la invención proporciona un polipéptido aislado que es una variante de la chaperonina 10 (Cp110) que posee por lo menos 70% de identidad de secuencia con la Cpn10 natural y que comprende un extremo N extendido como mínimo con dos residuos de aminoácidos adicionales en comparación con dicho polipéptido en estado natural. En una realización del primer aspecto, la identidad de secuencia entre el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) y el polipéptido Cpn10 natural es como mínimo, 80%. En otra realización del primer aspecto, la identidad de secuencia entre el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) y el polipéptido Cpn10 natural es como mínimo, 90%. En otra realización del primer aspecto, la identidad de secuencia entre el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) y el polipéptido Cpn10 natural es como mínimo, 95%. En una realización del primer aspecto, el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) tiene mayor función inmunomoduladora que el polipéptido Cpn10 natural. En una de las realizaciones del primer aspecto, el polipéptido variante posee mayor afinidad de unión por un patrón molecular asociado a patógenos (PAMP) que la Cpn10 natural. En una de las realizaciones del primer aspecto, el polipéptido variante posee mayor afinidad de unión por un patrón molecular asociado a daño (DAMP) que la Cpn10 natural. En otra realización del primer aspecto, el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) tiene mayor función inmunomoduladora que la Ala-Cpn10 (SEQ ID NO: 3). En una de las realizaciones del primer aspecto, el polipéptido variante tiene mayor afinidad de unión por un patrón molecular asociado a patógenos (PAMP) que la Ala-Cpn10 (SEQ ID NO: 3). En una de las realizaciones del primer aspecto, el polipéptido variante tiene mayor afinidad de unión por un patrón molecular asociado a daño (DAMP) que la Ala-Cpn10 (SEQ ID NO: 3). En una realización del primer aspecto, el PAMP comprende motivos CpG. En una realización del primer aspecto, el PAMP es ADN bacteriano. En una realización del primer aspecto, el ADN bacteriano comprende motivos CpG. En una realización del primer aspecto, el PAMP es un oligonucleótido que comprende un motivo oligodesoxinucleótido CpG (CpG ODN). En una realización del primer aspecto, el motivo CpG ODN es uno o más cualquiera entre CpGA, CpGB y/o CpGC. En una realización del primer aspecto, el polipéptido Cpn10 natural es un polipéptido Cpn10 natural humano que incluye la secuencia de aminoácidos que se describe en SEQ ID NO: 1. En una realización del primer aspecto, el extremo N del polipéptido aislado comienza con un residuo de metionina. El residuo de metionina puede preceder a un residuo de aminoácido seleccionado del grupo formado por arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, histidiria, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptófano, tirosina y valina. En una realización del primer aspecto, el polipéptido aislado comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID NO: 9, 12, 15, 18, 24, 26, 29, 32, 38, 41, 44, 47, 49, 78, 90 o 93. En otra realización del primer aspecto, el polipéptido aislado comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID NO: 52, 55, 58, 60, 81, 84, 87 o 96. En una realización del primer aspecto, el polipéptido variante no es GSM-Cpn10 (SEQ ID NO: 57). En un segundo aspecto, la invención proporciona un ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido aislado del primer aspecto. En una realización del segundo aspecto, el ácido nucleico aislado comprende una secuencia nucleotídica como se describe en cualquiera de las SEQ ID NO: 10, 13, 14, 16, 17, 19, 20, 25, 27, 28, 30, 31, 33, 34, 39, 40, 42, 43, 45, 46, 48, 50, 51, 91, 92, 94 o 95. En una realización del segundo aspecto, el ácido nucleico aislado comprende una secuencia nucleotídica como se describe en cualquiera de las SEQ ID NO: 53, 54, 56, 57, 59, 61, 62, 82, 83, 85, 86, 88, 89, 97 o 98. En un tercer aspecto, la invención proporciona un polipéptido aislado que es una variante de la chaperonina 10 (Cpn10) que posee una identidad de secuencia mínima del 70% con la Cpn10 natural y que comprende un extremo N extendido por lo menos con un residuo de aminoácido adicional en comparación con dicho polipéptido en estado natural. En una realización del tercer aspecto, la identidad de secuencia entre el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) y el polipéptido Cpn10 natural es como mínimo, 80%. En una realización del tercer aspecto, la identidad de secuencia entre el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) y el polipéptido Cpn10 natural es como mínimo, 90%. En una realización del tercer aspecto, la identidad de secuencia entre el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) y el polipéptido Cpn10 natural es como mínimo, 95%. En una realización del tercer aspecto, el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) tiene mayor función inmunomoduladora que el polipéptido Cpn10 natural. En una de las realizaciones del tercer aspecto, el polipéptido variante posee mayor afinidad de unión por un patrón molecular asociado a patógenos (PAMP) que la Cpn10 natural. En una de las realizaciones del tercer aspecto, el polipéptido variante posee mayor afinidad de unión por un patrón molecular asociado a daño (DAMP) que la Cpn10 natural. En otra realización del tercer aspecto, el polipéptido aislado variante de la chaperonina 10 (Cpn10) tiene mayor función inmunomoduladora que la Ala-Cpn10 (SEQ ID NO: 3). En una de las realizaciones del tercer aspecto, el polipéptido variante tiene mayor afinidad de unión por un patrón molecular asociado a patógenos (PAMP) que la Ala-Cpn10 (SEQ ID NO: 3). En una de las realizaciones del tercer aspecto, el polipéptido variante tiene mayor afinidad de unión por un patrón molecular asociado a daño (DAMP) que la Ala-Cpn10 (SEQ ID NO: 3). En una realización del tercer aspecto, el PAMP comprende motivos CpG. En una realización del tercer aspecto, el PAMP es ADN bacteriano. En una realización del tercer aspecto, el ADN bacteriano comprende motivos CpG. En una realización del tercer aspecto, el PAMP es un oligonucleótido que comprende un motivo oligodesoxinucleótido CpG (CpG ODN). En una realización del tercer aspecto, el motivo CpG ODN es uno o más cualquiera entre CpGA, CpGB y/o CpGC. En una realización del tercer aspecto, el polipéptido Cpn10 natural es un polipéptido Cpn10 natural humano que comprende la secuencia de aminoácidos que se describe en la SEQ ID NO: 1. En una realización del tercer aspecto, el residuo de aminoácido adicional es un residuo glicina, serina o prolina. En otra realización del tercer aspecto, el residuo de aminoácido adicional es un residuo valina, leucina, isoleucina, histidina, fenilalanina, tirosina, triptófano, cisteína, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutámico o glutamina. En una realización del tercer aspecto, el polipéptido aislado comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID NO: 21 o 35. En otra realización del tercer aspecto, el polipéptido aislado comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID NO: 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74 o 75. En un cuarto aspecto, la invención proporciona un ácido nucleico aislado que codifica el polipéptido aislado del tercer aspecto. En un cuarto aspecto, la invención proporciona un ácido nucleico aislado que codifica el polipéptido aislado del tercer aspecto. En una realización del cuarto aspecto, el ácido nucleico aislado comprende una secuencia nucleotídica como se describe en cualquiera de las SEQ ID NO: 7, 8, 22, 23, 36 o 37. En un quinto aspecto, la invención proporciona un vector que comprende el ácido nucleico aislado del segundo o cuarto aspecto. En un sexto aspecto, la invención proporciona una célula huésped que comprende el vector del quinto aspecto. En un séptimo aspecto, la invención proporciona una composición que comprende uno o más cualquiera de: (a) un polipéptido aislado del primer o tercer aspecto, (b) un ácido nucleico aislado del segundo o cuarto aspecto, (c) el vector del quinto aspecto. En una realización del séptimo aspecto, la composición comprende además un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. En un octavo aspecto, la invención proporciona un método para suprimir la activación inmunitaria en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de: (a) un polipéptido aislado del primer o tercer aspecto, (b) un ácido nucleico aislado del segundo o cuarto aspecto, (c) el vector del quinto aspecto. (d) la composición del séptimo aspecto. En un noveno aspecto, la invención proporciona un método para prevenir o tratar una enfermedad inflamatoria en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de: (a) un polipéptido aislado del primer o tercer aspecto, (b) un ácido nucleico aislado del segundo o cuarto aspecto, (c) el vector del quinto aspecto. (d) la composición del séptimo aspecto. En una realización del noveno aspecto, la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo formado por artritis reumatoide, enteropatía inflamatoria (enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa), diabetes de tipo I (diabetes mellitus dependiente de la insulina, diabetes juvenil), síndrome de cansancio crónico, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Graves, osteoartritis, artritis inducida por colágeno tipo II, esclerosis múltiple, lupus eritematoso