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1. 发明授权

CN111826285B 一种单细胞克隆培养方法有权
公开(公告)号：CN111826285B
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN201911387697.1
申请日：2019-12-27
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：包骥 , 步宏 , 李顺 , 张芸琳
IPC分类号： C12M3/00 , C12N5/02 , C12N5/10 , C12N15/90 , C12N5/09 , C12N5/20
摘要：本发明公开了一种单细胞克隆培养容器，它是底表面带有纤连蛋白印迹块阵列的细胞培养容器；所述底表面未覆盖纤连蛋白的区域被封闭剂封闭；单个所述印迹块的面积为225～625μm2。本发明还公开了一种单细胞克隆的培养方法，它是将细胞接种于前述培养容器进行培养。本发明的单克隆培养方法，具有很高的通量，可单次培养上千个单细胞克隆团，还能克服传统的极限稀释法带来的单克隆不纯、单克隆无法正常生长的问题。另外，本发明可应用于基因编辑、肿瘤克隆培养、单细胞测序样品制备等等诸多领域，应用前景广阔。

2. 发明公开

CN113980905A 用于猪基因编辑sgRNA筛选的体外细胞平台有权
公开(公告)号：CN113980905A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202010735516.6
申请日：2020-07-27
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：包骥 , 步宏 , 高孟雨
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/55 , C12N15/867 , C12N15/90 , G16B20/30 , G16B25/20 , G16B30/10
摘要：本发明公开了一种用于猪基因编辑sgRNA筛选的体外细胞平台，属于基因编辑领域。本发明的平台适用于CRISPR‑Cas9基因编辑技术中的sgRNA筛选，主要包括特定的猪细胞及其转录组、蛋白质组数据平台，以及基因编辑sgRNA筛选方法。所述细胞是稳定表达Cas9基因的猪髋动脉内皮细胞PIEC、猪肾上皮细胞PK15、猪肾传代细胞IBRS‑2或猪睾丸细胞ST。使用者可根据待编辑的基因在数据平台中的表达水平，选取特定细胞，进行基因编辑sgRNA的筛选。本发明的体外细胞平台提高了sgRNA筛选效率，具有良好的应用前景。

3. 发明授权

CN112381838B 一种数字病理切片图像的自动切图方法有权
公开(公告)号：CN112381838B
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN202011273550.2
申请日：2020-11-14
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：杨一明 , 郑众喜 , 周燕燕 , 袁勇 , 杨永全 , 步宏
IPC分类号： G06T7/11 , G06T7/66 , G06T7/187 , G06T3/40
摘要：本发明公开一种数字病理切片图像的自动切图方法，包括以下步骤：S1、组织区域的轮廓识别提取；S2、轮廓的质心坐标和长轴长度计算；S3、设置需要提取的图像块的参数；S4、智能切图因子R的计算；S5、稀疏矩阵A的设计；S6、A的非零元素的坐标矩阵XY计算；S7、1x图中坐标矩阵XY′计算；S8、遍历XY′中的元素是否在轮廓内部完成判别是否切此图像块T。本发明采样率高，同时保证了切图的准确率，效率较高。

4. 发明授权

CN111826338B 一种快速培养肝芽类器官的方法有权
公开(公告)号：CN111826338B
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN201911389343.0
申请日：2019-12-27
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：包骥 , 步宏 , 何宇婷
IPC分类号： C12N5/071 , C12N5/0775 , C12Q1/02
摘要：本发明公开了一种肝芽类器官的培养容器和培养方法，属于类器官培养领域。本发明的培养容器是内底表面带有肝脏细胞外基质印迹块阵列的细胞培养容器；所述底表面未覆盖纤连蛋白的区域被封闭剂封闭；单个所述印迹块的面积为225～625μm2。本发明的培养方法使用前述培养容器将间充质干细胞和脐静脉内皮细胞培养成细胞球，再收集细胞球与肝细胞共培养。本发明的方法方便快捷，成本低廉，能够得到在基因表达、代谢与肝脏接近的肝芽类器官。

5. 发明公开

CN112381838A 一种数字病理切片图像的自动切图方法有权
公开(公告)号：CN112381838A
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN202011273550.2
申请日：2020-11-14
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：杨一明 , 郑众喜 , 周燕燕 , 袁勇 , 杨永全 , 步宏
IPC分类号： G06T7/11 , G06T7/66 , G06T7/187 , G06T3/40
摘要：本发明公开一种数字病理切片图像的自动切图方法，包括以下步骤：S1、组织区域的轮廓识别提取；S2、轮廓的质心坐标和长轴长度计算；S3、设置需要提取的图像块的参数；S4、智能切图因子R的计算；S5、稀疏矩阵A的设计；S6、A的非零元素的坐标矩阵XY计算；S7、1x图中坐标矩阵XY′计算；S8、遍历XY′中的元素是否在轮廓内部完成判别是否切此图像块T。本发明采样率高，同时保证了切图的准确率，效率较高。

6. 发明公开

CN111826285A 一种单细胞克隆培养方法有权
公开(公告)号：CN111826285A
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN201911387697.1
申请日：2019-12-27
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：包骥 , 步宏 , 李顺 , 张芸琳
IPC分类号： C12M3/00 , C12N5/02 , C12N5/10 , C12N15/90 , C12N5/09 , C12N5/20
摘要：本发明公开了一种单细胞克隆培养容器，它是底表面带有纤连蛋白印迹块阵列的细胞培养容器；所述底表面未覆盖纤连蛋白的区域被封闭剂封闭；单个所述印迹块的面积为225～625μm2。本发明还公开了一种单细胞克隆的培养方法，它是将细胞接种于前述培养容器进行培养。本发明的单克隆培养方法，具有很高的通量，可单次培养上千个单细胞克隆团，还能克服传统的极限稀释法带来的单克隆不纯、单克隆无法正常生长的问题。另外，本发明可应用于基因编辑、肿瘤克隆培养、单细胞测序样品制备等等诸多领域，应用前景广阔。

7. 发明授权

CN114214283B 一种培养肝肿瘤类器官的方法有权
公开(公告)号：CN114214283B
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202111678849.0
申请日：2021-12-31
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：包骥 , 步宏 , 朱星龙 , 吴琼
IPC分类号： C12N5/09 , C12N5/071 , C12M3/04 , C12M1/22 , C12M1/24 , C12Q1/02
摘要：本发明提供了一种培养肝肿瘤类器官的方法，属于类器官培养领域。本发明首先提供了一种肝肿瘤类器官培养容器，它是内部底表面带有肝脏细胞外基质印迹块阵列的细胞培养容器；所述底表面未覆盖肝脏细胞外基质的区域被封闭剂封闭；所述肝脏细胞外基质印迹块阵列由直径为50～300μm的圆形阵点组成，每个圆形阵点间的间距为25‑500μm。本发明还提供了一种肝肿瘤类器官的培养方法，该培养方法缩短了培养时间，简化了培养方式，有效控制了肝肿瘤类器官的粒径大小与排列，提高了药物筛选的重复性与稳定性。使用培养的肝肿瘤类器官进行药物筛(56)对比文件陈晓旭等.脱细胞支架制备及其在组织工程和再生医学中的应用《.中国组织工程研究》.2021,第26卷全文.Shin Woojung等.Robust Formation of anEpithelial Layer of Human IntestinalOrganoids in a Polydimethylsiloxane-BasedGut-on-a-Chip Microdevice《.Frontiers inmedical technology》.2021,第2卷全文.Hosic S等.Rapid Prototyping ofMultilayer Microphysiological Systems.《ACS BIOMATERIALS SCIENCE & ENGINEERING》.2021,第7卷2949-2963.Hyun Jung Kim等.Human gut-on-a-chipinhabited by microbial flora thatexperiences intestinal peristalsis-likemotions and flow《.Lab on a Chip》.2012,(第12期),全文.刘卓健;周博;段芳龄.食管鳞状细胞癌类器官的应用.胃肠病学和肝病学杂志.2020,(第03期),全文.杨焕松;李斌.肿瘤类器官技术研究进展.中国肿瘤临床与康复.2020,(第09期),全文.冯杰,高长有,沈家骢.微接触印刷技术在表面图案化中的应用.高分子材料科学与工程.2004,(第05期),全文.步宏.组织工程肝脏研究现状及应用前景.中国组织工程研究与临床康复.2009,(第50期),全文.

8. 发明授权

CN114214284B 一种培养肾肿瘤类器官的方法有权
公开(公告)号：CN114214284B
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202111678865.X
申请日：2021-12-31
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：包骥 , 步宏 , 王坤杰 , 朱星龙 , 金熙
IPC分类号： C12N5/09 , C12N5/071 , C12M3/04 , C12M1/22 , C12M1/24 , C12Q1/02
摘要：本发明提供了一种培养肾肿瘤类器官的方法，属于类器官培养领域。本发明首先提供了一种肾肿瘤类器官培养容器，它是内部底表面带有肾脏细胞外基质印迹块阵列的细胞培养容器；所述底表面未覆盖肾脏细胞外基质的区域被封闭剂封闭；所述肾脏细胞外基质印迹块阵列由直径为50～200μm的圆形阵点组成，每个圆形阵点间的间距为25～300μm。本发明还提供了一种肾肿瘤类器官的培养方法，该培养方法缩短了培养时间，简化了培养方式，有效控制了肾肿瘤类器官的粒径大小与排列，提高了药物筛选的重复性与稳定性。使用培养的肾肿瘤类器官进行药物筛选，具有更高效与安全性，同时可进行个性化治(56)对比文件许洁.大鼠子宫去细胞支架及其细胞外基质凝胶的制备.生物医学工程学杂志.2018,第35卷(第2期),第238页左栏第1段.Yi Li等.Decellularization of porcinewhole lung to obtaina clinical-scalebioengineered scaffold.J Biomed Mater ResA.第109卷(第9期),第1624段左栏第3段.刘春晓等.灌注法制备大鼠全肾脏脱细胞基质的研究.南方医科大学学报.2021,第29卷(第5期),979-982.Adam D. McInnes等.Preparation and Useof Decellularized Extracellular Matrixfor Tissue Engineering.Journal ofFunctional Biomaterials.2022,第13卷(第4期),1-54.

9. 发明公开

CN114214283A 一种培养肝肿瘤类器官的方法有权
公开(公告)号：CN114214283A
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202111678849.0
申请日：2021-12-31
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：包骥 , 步宏 , 朱星龙 , 吴琼
IPC分类号： C12N5/09 , C12N5/071 , C12M3/04 , C12M1/22 , C12M1/24 , C12Q1/02
摘要：本发明提供了一种培养肝肿瘤类器官的方法，属于类器官培养领域。本发明首先提供了一种肝肿瘤类器官培养容器，它是内部底表面带有肝脏细胞外基质印迹块阵列的细胞培养容器；所述底表面未覆盖肝脏细胞外基质的区域被封闭剂封闭；所述肝脏细胞外基质印迹块阵列由直径为50～300μm的圆形阵点组成，每个圆形阵点间的间距为25‑500μm。本发明还提供了一种肝肿瘤类器官的培养方法，该培养方法缩短了培养时间，简化了培养方式，有效控制了肝肿瘤类器官的粒径大小与排列，提高了药物筛选的重复性与稳定性。使用培养的肝肿瘤类器官进行药物筛选，具有更高效与安全性，同时可进行个性化治疗，指导临床用药。

10. 发明公开

CN114214282A 一种培养肺肿瘤类器官的方法有权
公开(公告)号：CN114214282A
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202111678848.6
申请日：2021-12-31
申请人：四川大学华西医院 , 成都华西精准医学产业技术研究院有限公司
发明人：包骥 , 步宏 , 朱星龙 , 李奕
IPC分类号： C12N5/09 , C12N5/071 , C12M3/04 , C12M1/22 , C12M1/24 , C12Q1/02
摘要：本发明提供了一种培养肺肿瘤类器官的方法，属于类器官培养领域。本发明首先提供了一种肺肿瘤类器官培养容器，它是内部底表面带有肺细胞外基质印迹块阵列的细胞培养容器；所述底表面未覆盖肺细胞外基质的区域被封闭剂封闭；所述肺细胞外基质印迹块阵列由直径为50～200μm的圆形阵点组成，每个圆形阵点间的间距为25～300μm。本发明还提供了一种肺肿瘤类器官的培养方法，该培养方法缩短了培养时间，简化了培养方式，有效控制了肺肿瘤类器官的粒径大小与排列，提高了药物筛选的重复性与稳定性。使用培养的肺肿瘤类器官进行药物筛选，具有更高效与安全性，同时可进行个性化治疗，指导临床用药。

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