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    • 5. 发明申请
    • PROCEDE DE PURIFICATION DE LA PROTEINE ADHESINE-LIKE A (ALPA) D'HELICOBACTER
    • 纯化嗜酸性粒细胞蛋白A(ALPA)的方法
    • WO2002064622A1
    • 2002-08-22
    • PCT/FR2002/000355
    • 2002-01-30
    • MERIEUX ORAVAXFOURRICHON, LaurenceLISSOLO, LingPITIOT, Olivier
    • FOURRICHON, LaurenceLISSOLO, LingPITIOT, Olivier
    • C07K1/16
    • C07K14/205A61K39/00
    • L'invention a pour objet un procédé de purification de la protéine adhésine-like A (AlpA) d' Hélicobacter selon lequel: (i) on met en contact une préparation AlpA et 2,5 à 3,5 M de guanidine avec un matériel de chromatographie d'interactions hydrophobes (CIH), de telle sorte qu'AlpA s'adsorbe sur le matériel; et (ii) on élue AlpA avec une solution contenant 3,5 à 4,5 M de guanidine. La préparation d'AlpA destinée à être purifiée peut être notamment issue d'une culture d' E. coli , capable d'exprimer AlpA sous forme recombinante à un niveau élevé. rAlpA se présentant sous forme de corps d'inclusion, ces derniers sont récupérés et solubilisés en présence de guanidine, et éventuellement précipités au sulfate d'ammonium à des fins de purification préliminaire. La purification par CIH peut être poursuivie notamment par une chromatographie échangeuse d'anions en présence d'urée 8 M.
    • 本发明涉及一种纯化幽门螺杆菌粘附素样蛋白A(AlpA)的方法,该方法包括:(i)用疏水相互作用层析材料使AlpA制剂和2.5-3.5M的胍接触,使得AlpA吸附在 材料; 和(ii)用含有3.5至4.5M的胍的溶液洗脱AlpA。 待纯化的AlpA制剂可以特别衍生自能够以高水平重组形式表达AlpA的大肠杆菌培养物,rAlpA为包涵体的形式,后者被回收并溶解于 胍的存在和任选的硫酸铵沉淀用于初步纯化的目的。 在8M尿素存在下,可以通过阴离子交换层析来进行疏水相互作用层析。