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    • 4. 发明申请
      WO2004027378A3 LUMINESCENCE-BASED METHODS AND PROBES FOR MEASURING CYTOCHROME P450 ACTIVITY 审中-公开
    • LUMINESCENCE-BASED METHODS AND PROBES FOR MEASURING CYTOCHROME P450 ACTIVITY
    • 用于测量细胞色素P450活性的基于荧光的方法和探针
    • WO2004027378A3
    • 2004-11-25
    • PCT/US0329078
    • 2003-09-16
    • PROMEGA CORP , CALI JAMES J , KLAUBERT DIETER , DAILY WILLIAM , HO SAMUEL KIN SANG , FRACKMAN SUSAN , HAWKINS ERIKA , WOOD KEITH V
    • CALI JAMES J , KLAUBERT DIETER , DAILY WILLIAM , HO SAMUEL KIN SANG , FRACKMAN SUSAN , HAWKINS ERIKA , WOOD KEITH V
    • C07D403/04 , C07D413/04 , C07D417/04 , C07D417/14 , C07F9/06 , C12N9/02 , C12Q1/00 , C12Q1/26 , C12Q1/66 , G01N20060101 , G01N33/53 , G01N33/58
    • G01N33/502 , A61K49/0008 , C07D417/04 , C12Q1/66 , G01N33/5088 , G01N33/582 , G01N2333/90245 , G01N2333/90251 , G01N2500/10
    • The present invention provides methods, compositions, substrates, and kits useful for analyzing the metabolic activity in cells, tissue, and animals and for screening test compounds for their effect on cytochrome P450 activity. In particular, a one-step and two-step methods using luminogenic molecules, e.g. luciferin or coelenterazines, that are cytochrome P450 substrates and that are also bioluminescent enzyme, e.g., luciferase, pro-substrates are provided. Upon addition of the luciferin derivative or other luminogenic molecule into a P450 reaction, the P450 enzyme metabolizes the molecule into a bioluminescent enzyme substrate, e.g., luciferin and/or luciferin derivative metabolite, in a P450 reaction. The resulting metabolite(s) serves as a substrate of the bioluminescent enzyme, e.g., luciferase, in a second light­generating reaction. Luminescent cytochrome P450 assays with low background signals and high sensitivity are disclosed and isoform selectivity is demonstrated. The present invention also provides an improved method for performing luciferase reactions which employs added pyrophosphatase to remove inorganic pyrophosphate, a luciferase inhibitor which may be present in the reaction mixture as a contaminant or may be generated during the reaction. The present method further provides a method for stabilizing and prolonging the luminescent signal in a luciferase-based assay using luciferase stabilizing agents such as reversible luciferase inhibitors.
    • 本发明提供了可用于分析细胞，组织和动物中的代谢活性以及筛选测试化合物对细胞色素P450活性的影响的方法，组合物，底物和试剂盒。 特别地，使用发光分子的一步和两步法。 荧光素或coelenterazines，其是细胞色素P450底物并且也是生物发光酶，例如萤光素酶，原底物。 在P450反应中加入荧光素衍生物或其他发光分子时，P450酶在P450反应中将分子代谢为生物发光酶底物，例如荧光素和/或荧光素衍生物代谢产物。 在第二次发光反应中，所得的代谢物用作生物发光酶，例如荧光素酶的底物。 公开了具有低背景信号和高灵敏度的发光细胞色素P450测定，证明了同工型选择性。 本发明还提供一种用于进行荧光素酶反应的改进方法，其使用添加的焦磷酸酶来除去无机焦磷酸盐，荧光素酶抑制剂，其可作为污染物存在于反应混合物中，或可能在反应期间产生。 本发明的方法还提供使用荧光素酶稳定剂如可逆荧光素酶抑制剂在基于荧光素酶的测定中稳定和延长发光信号的方法。
    • 基本信息 添加关注 加入工作空间 PDF全文 PDF下载 全文下载 相似专利 双屏查看 权利要求书 说明书全文 Global Dossier Espacenet 法律信息 同族专利 专利引用
    • 6. 发明申请
      WO2004027378A2 LUMINESCENCE-BASED METHODS AND PROBES FOR MEASURING CYTOCHROME P450 ACTIVITY 审中-公开
    • LUMINESCENCE-BASED METHODS AND PROBES FOR MEASURING CYTOCHROME P450 ACTIVITY
    • 用于测量细胞色素P450活性的基于发光的方法和探针
    • WO2004027378A2
    • 2004-04-01
    • PCT/US2003/029078
    • 2003-09-16
    • PROMEGA CORPORATION , CALI, James, J. , KLAUBERT, Dieter , DAILY, William , HO, Samuel, Kin, Sang , FRACKMAN, Susan , HAWKINS, Erika , WOOD, Keith, V.
    • CALI, James, J. , KLAUBERT, Dieter , DAILY, William , HO, Samuel, Kin, Sang , FRACKMAN, Susan , HAWKINS, Erika , WOOD, Keith, V.
    • G01N
    • G01N33/502 , A61K49/0008 , C07D417/04 , C12Q1/66 , G01N33/5088 , G01N33/582 , G01N2333/90245 , G01N2333/90251 , G01N2500/10
    • The present invention provides methods, compositions, substrates, and kits useful for analyzing the metabolic activity in cells, tissue, and animals and for screening test compounds for their effect on cytochrome P450 activity. In particular, a one-step and two-step methods using luminogenic molecules, e.g. luciferin or coelenterazines, that are cytochrome P450 substrates and that are also bioluminescent enzyme, e.g., luciferase, pro-substrates are provided. Upon addition of the luciferin derivative or other luminogenic molecule into a P450 reaction, the P450 enzyme metabolizes the molecule into a bioluminescent enzyme substrate, e.g., luciferin and/or luciferin derivative metabolite, in a P450 reaction. The resulting metabolite(s) serves as a substrate of the bioluminescent enzyme, e.g., luciferase, in a second light­generating reaction. Luminescent cytochrome P450 assays with low background signals and high sensitivity are disclosed and isoform selectivity is demonstrated. The present invention also provides an improved method for performing luciferase reactions which employs added pyrophosphatase to remove inorganic pyrophosphate, a luciferase inhibitor which may be present in the reaction mixture as a contaminant or may be generated during the reaction. The present method further provides a method for stabilizing and prolonging the luminescent signal in a luciferase-based assay using luciferase stabilizing agents such as reversible luciferase inhibitors.
    • 本发明提供了用于分析细胞，组织和动物中的代谢活性并筛选测试化合物对细胞色素P450活性的影响的方法，组合物，底物和试剂盒。 特别地，使用发光分子的一步法和两步法，例如， 荧光素或腔肠素，它们是细胞色素P450底物，也是生物发光酶，例如萤光素酶，原底物。 在将荧光素衍生物或其他发光分子加入到P450反应中后，P450酶在P450反应中将该分子代谢成生物发光酶底物，例如荧光素和/或荧光素衍生物代谢物。 产生的代谢物在第二次光照和害羞中作为生物发光酶的底物，例如萤光素酶，产生反应。 公开了具有低背景信号和高灵敏度的发光细胞色素P450测定并证明了同种型选择性。 本发明还提供了用于进行萤光素酶反应的改进方法，其使用添加的焦磷酸酶去除无机焦磷酸盐，荧光素酶抑制剂，其可以作为污染物存在于反应混合物中或可以在反应过程中产生。 本发明方法进一步提供了使用荧光素酶稳定剂如可逆荧光素酶抑制剂在基于萤光素酶的测定中稳定和延长发光信号的方法。
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    • 8. 发明申请
      WO1997003939A1 NOVEL AMIDE-BASED CATIONIC LIPIDS 审中-公开
    • NOVEL AMIDE-BASED CATIONIC LIPIDS
    • 新型基于阳离子的阳离子脂肪
    • WO1997003939A1
    • 1997-02-06
    • PCT/US1996012087
    • 1996-07-22
    • GENTA INCORPORATED , SCHWARTZ, David, Aaron , DAILY, William, S. , DWYER, Brian, Patrick , SRINIVASAN, Kumar , BROWN, Bob, Dale
    • GENTA INCORPORATED
    • C07C49/105
    • B82Y5/00 , A61K9/1272 , C07C237/06 , C07C237/10 , C07C237/22 , C07K5/06086 , C07K5/0815
    • The present invention provides novel amide-based cationic lipids of general structure (I) or a salt, or solvate, or enantiomers thereof wherein: (a) Y is a direct link or an alkylene of 1 to about 20 carbon atoms; (b) R1 is H or a lipophilic moiety; (c) R2, R3, and R4 are positively charged moieties, or at least one but not all of R2, R3, or R4 is a positive moiety and the remaining are independently selected from H, an alkyl moiety of 1 to about 6 carbon atoms, or a heterocyclic moiety of about 5 to about 10 carbon atoms; (d) n and p are independently selected integers from 0 to 8, such that the sum of n and p is from 1 to 16; (e) X is an anion or polyanion and (f) m is an integer from 0 to a number equivalent to the positive charge(s) present on the lipid; provided that if Y is a direct link and the sum of n and p is 1 then one of either R3 or R4 must have an alkyl moiety of at least 10 carbon atoms. The present invention further provides compositions of these lipids with polyanionic macromolecules, methods for interfering with protein expression in a cell utilizing these compositions and a kit for preparing the same.
    • 本发明提供了通式（I）的新型酰胺类阳离子脂质或其盐或溶剂合物或其对映异构体，其中：（a）Y为1至约20个碳原子的直链或亚烷基; （b）R 1为H或亲油部分; （c）R 2，R 3和R 4为带正电荷的部分，或至少一个但不全部为R 2，R 3或R 4为正部分，其余独立地选自H，1至约6个碳原子的烷基部分 原子或约5至约10个碳原子的杂环部分; （d）n和p独立地选自0至8的整数，使得n和p之和为1至16; （e）X 1是阴离子或聚阴离子，（f）m是0至等于脂质上存在的正电荷数的整数; 条件是如果Y是直链，并且n和p之和为1，则R3或R4之一必须具有至少10个碳原子的烷基部分。 本发明还提供了这些脂质与聚阴离子大分子的组合物，利用这些组合物干扰细胞中的蛋白质表达的方法和用于制备该组合物的试剂盒。
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