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    • 4. 发明申请
    • 동물세포용 재조합 발현벡터
    • 动物细胞重组表达载体
    • WO2010005227A2
    • 2010-01-14
    • PCT/KR2009/003714
    • 2009-07-07
    • 제넥셀세인 주식회사김근수주혜경전춘주김재섭
    • 김근수주혜경전춘주김재섭
    • C12N15/64
    • C12N15/85C12N9/003C12N15/8509C12N2800/107
    • 본 발명은 다이하이드로폴레이트 환원효소(Dihydrofolate reductase:DHFR) 프로모터에 작동적으로 연결된(operatively linked) DHFR-코딩 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 동물세포용 재조합 발현벡터 및 상기 벡터에 의해 형질전환된 동물세포주, 그리고 그를 이용한 목적단백질의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 벡터는 기존 동물세포 발현벡터와 비교하여 훨씬 적은 메토트렉세이트 농도 하에서도 효과적으로 DHFR 유전자와 함께 외래 유전자가 증폭된 세포주 클론을 선별할 수 있도록 한다. 또한 본 발명에 따르면, 단백질 생산 세포주 확립과정에서 감소된 농도의 메토드렉세이트의 사용을 통해서 높은 생산성의 세포주를 단기간에 확보하게 되므로 세포주 제작 측면에서 우수한 효과를 나타낸다.
    • 本发明涉及用于动物细胞的重组表达载体,其含有编码与DHFR启动子有效连接的二氢叶酸还原酶(DHFR)的核苷酸序列,与载体转化的动物细胞系,以及使用 一样。 与现有的动物细胞表达载体相比,本发明的载体能够有效筛选外源基因与DHFR基因一起扩增的细胞系克隆,即使在低得多的甲氨蝶呤浓度下也是如此。 本发明在蛋白质生产细胞系建立过程中通过使用较低浓度的甲氨蝶呤可以在短时间内确保高生产率细胞系,从而在细胞系制备中表现出优异的效果。