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    • 71. 发明申请
    • 形質転換体およびその製造方法、ならびに乳酸の製造方法
    • 其生产方法及其生产方法,以及生产酸乳酸的方法
    • WO2016056566A1
    • 2016-04-14
    • PCT/JP2015/078394
    • 2015-10-06
    • 旭硝子株式会社
    • 原 太志鹿島 絢子木村 修一郎
    • C12N15/09C12N1/19C12P7/56C12R1/645
    • C12P7/56C12N9/0006C12N9/88C12N15/52C12R1/645C12Y101/01027C12Y401/01001
    •  アルカリによる中和を必要とせずに高い生産性で乳酸を産生でき、乳酸産生能と増殖能の両方に優れた形質転換体およびその製造方法、ならびに該形質転換体を用いた乳酸の製造方法の提供。 シゾサッカロミセス・ポンベを宿主とし、ヒト由来の乳酸脱水素酵素遺伝子が3~5コピー組み込まれ、かつ前記シゾサッカロミセス・ポンベ宿主のピルビン酸脱炭酸酵素をコードする遺伝子群の一部の遺伝子が欠失または失活していることを特徴とする形質転換体、500mL容の坂口フラスコに入った、イーストエクストラクト1%、ペプトン2%、およびグルコース6%からなる液体培地100mLに初発菌体濃度を0.04g(dcw)/Lになるように接種し、温度32℃、110rpmかつ振り幅7cmの振盪条件下で20時間培養した培養液の菌体濃度が4.0g(dcw)/L以上であり、前記と同じ条件で20時間培養し得られた菌体を、11.1%グルコース水溶液に初発菌体濃度が36g(乾燥菌体換算)/Lになるように接種し、温度32℃、110rpmかつふり幅7cmの振盪条件下で3時間発酵させた発酵液の乳酸濃度が80g/L以上である形質転換体、およびこれら形質転換体を用いた乳酸の製造方法。
    • 提供:能够以高生产率生产乳酸的转化体,而不需要用碱性试剂中和,并且具有优异的乳酸生产能力和优异的增殖效力; 生产转化体的方法; 以及使用该转化体生产乳酸的方法。 一种转化体,其特征在于:其宿主是粟酒裂殖酵母; 将3-5份人源乳酸脱氢酶基因整合到其中; 并且属于粟酒裂殖酵母属主体的编码丙酮酸脱羧酶的基因组的一些基因在其中被删除或失活。 一种转化体,其特征在于:当将转化体接种到500ml Sakaguchi烧瓶中的100ml液体培养基中时,所述液体培养基包含1%酵母提取物,2%蛋白胨和6%葡萄糖,初始细胞浓度 0.04g(dcw)/ l,然后在32℃温度下振荡110rpm,振动宽度7cm下培养20小时,液体培养物的细胞浓度为4.0g(dcw)/ l或 更大; 当以与上述相同的条件下培养20小时获得的细胞以36g(以干细胞计)/ 1的初始细胞浓度接种到11.1%葡萄糖水溶液中,然后发酵3小时 在温度32℃,摇动110rpm,振动宽度7cm的条件下,发酵液的乳酸浓度为80g / l以上。 使用任何上述转化体生产乳酸的方法。
    • 77. 发明申请
    • DEVELOPMENT OF STRAINS OF THE THERMOTOLERANT YEAST HANSENULA POLYMORPHA CAPABLE OF ALCOHOLIC FERMENTATION OF STARCH AND XYLAN BY EXPRESSION OF STARCH AND XYLAN DEGRADING ENZYMES
    • 通过淀粉和XYLAN降解酶的表达可以发现热稳定性YEAST HANSENULA多糖的菌株能够发酵淀粉和XYLAN的醇溶性发酵
    • WO2009137574A3
    • 2010-04-15
    • PCT/US2009042975
    • 2009-05-06
    • ARCHER DANIELS MIDLAND COABBAS CHARLESSIBIRNY ANDRIYVORONOVSKY ANDRIY Y
    • ABBAS CHARLESSIBIRNY ANDRIYVORONOVSKY ANDRIY Y
    • C12N1/19C12N15/56C12P7/06C12R1/01
    • C12N9/2428C12N9/2414C12N9/242C12P7/06C12Y302/01001C12Y302/01003C12Y302/01008C12Y302/01037C12Y401/01001Y02E50/17Y02P20/52
    • Genes SWA2 and GAMl from the yeast, Schwanniomyces occidentalis, encoding a- amylase and glucoamylase, respectively, were cloned and expressed in H. polymorpha. The expression was achieved by integration of the SWA2 and GAMl genes into the chromosome of H. polymorpha under operably linked to a strong constitutive promoter of the H. polymorpha - glyceraldehyde-3 -phosphate dehydrogenase gene (HpGAP. Resulting transformants acquired the ability to grow on a minimal medium containing soluble starch as a sole carbon source and can produce Ethanol at high-temperature fermentation from starch up to 10 g/L. A XYN2 gene encoding endoxylanase was obtained from the fungus Trichoderma resee, and a xlnD gene coding for ß-xylosidase was obtained from the fungus Aspergillus niger. Co-expression of these genes was also achieved by integration into the H. polymorpha chromosome under control of the HpGAP promoter. The resulting transformants were capable of growth on a minimal medium supplemented with birchwood xylan as a sole carbon source. Successful expression of xylanolytic enzymes resulted in a recipient strain capable of fermentation of birchwood xylan to ethanol at 48° C. Further with co expression of the forgoing genes in a H. polymorpha strain that overexpresses a pyruvate decarboxylase gene further improved ethanol production.
    • 来自酵母的基因SWA2和GAM1分别编码α-淀粉酶和葡糖淀粉酶,分别在多形汉逊酵母中表达。 通过与多形汉逊酵母 - 甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(HpGAP)的强组成型启动子可操作地连接,将SWA2和GAM1基因整合到多形汉逊酵母的染色体中来实现该表达。所得到的转化体获得了生长能力 在含有可溶性淀粉作为唯一碳源的基本培养基上,可以从淀粉高温发酵至10g / L生产乙醇,从真菌木霉菌获得编码内切木聚糖酶的XYN2基因,编码ß的xlnD基因 这些基因的共表达也通过在HpGAP启动子控制下融合到多形汉逊酵母染色体中而得到,所得转化体能够在补充有桦木木聚糖的基本培养基上生长 单独的碳源成功表达木聚糖酶导致能够发酵桦木木聚糖的受体菌株 到48℃的乙醇。此外,在多克隆多因子菌株中共表达过去基因,其过表达丙酮酸脱羧酶基因进一步改善了乙醇生产。