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    • 59. 发明专利
    • 用於增進肉毒桿菌神經毒素進入細胞之特定攝取的方法
    • 用于增进肉毒杆菌神经毒素进入细胞之特定摄取的方法
    • TW201639875A
    • 2016-11-16
    • TW105105453
    • 2016-02-24
    • 曼茲法瑪股份有限公司MERZ PHARMA GMBH & CO. KGAA
    • 杰茲卡 克勞迪亞JATZKE, CLAUDIA艾斯里 卡爾辛茲EISELE, KARL-HEINZ曼德爾 吉爾德MANDER, GERD芬克 克勞斯FINK, KLAUS
    • C07K14/33A61K38/16C12N5/07G01N33/536
    • A47L9/00C09J7/40G01N33/5058G01N2333/33G02B5/30G02F1/1335
    • 本發明提供一種用於增進神經毒素多胜肽進入細胞之特定攝取的方法,該方法包含:在允許該神經毒素多胜肽發揮其生物活性之條件下,將易受神經毒素毒害細胞與一神經毒素多胜肽培育一時間,該培育包含下列步驟中至少一者:(i)K+介導的細胞去極化,(ii)一降低的神經毒素多胜肽曝露(exposition)時間,及/或(iii)在神經毒素多胜肽曝露期間攪動該細胞,從而增進該神經毒素多胜肽進入該細胞之特定攝取。此外,本發明有關一種用於直接在細胞中測定一神經毒素多胜肽之生物活性的方法,其包含:a)在允許該神經毒素多胜肽發揮其生物活性之條件下,將易受神經毒素毒害細胞與一神經毒素多胜肽培育一時間,該培育包含下列步驟中至少一者:(i)K+介導的細胞去極化,(ii)一降低的神經毒素多胜肽曝露時間,及/或(iii)在神經毒素多胜肽曝露期間攪動該細胞;b)固定該細胞,且任選地以一清潔劑透化(permeabilizing)該細胞;c)將該細胞與特異性結合至該無切割及經神經毒素切割受質之至少一第一捕捉抗體,及特異性結合至該經神經毒素切割受質之切割位點的至少一第二捕捉抗體,在允許該等捕捉抗體結合到該受質之條件下接觸;d)將該等細胞於允許該第一偵測抗體結合至該第一捕捉抗體的條件下,與特異性結合至該第一捕捉抗體之至少一第一偵測抗體接觸,由此形成第一偵測複合物,並於允許該第二偵測抗體結合至該第二捕捉抗體的條件下,與特異性結合至該第二捕捉抗體之至少一第二偵測抗體接觸,由此形成第二偵測複合物;e)測定步驟d)之第一與第二偵測複合物的數量;及f)藉助於該第二偵測複合物,計算在該細胞中由該神經毒素多胜肽所切割的受質數量,從而測定該神經毒素多胜肽在該細胞中之生物活性。
    • 本发明提供一种用于增进神经毒素多胜肽进入细胞之特定摄取的方法,该方法包含:在允许该神经毒素多胜肽发挥其生物活性之条件下,将易受神经毒素毒害细胞与一神经毒素多胜肽培育一时间,该培育包含下列步骤中至少一者:(i)K+介导的细胞去极化,(ii)一降低的神经毒素多胜肽曝露(exposition)时间,及/或(iii)在神经毒素多胜肽曝露期间搅动该细胞,从而增进该神经毒素多胜肽进入该细胞之特定摄取。此外,本发明有关一种用于直接在细胞中测定一神经毒素多胜肽之生物活性的方法,其包含:a)在允许该神经毒素多胜肽发挥其生物活性之条件下,将易受神经毒素毒害细胞与一神经毒素多胜肽培育一时间,该培育包含下列步骤中至少一者:(i)K+介导的细胞去极化,(ii)一降低的神经毒素多胜肽曝露时间,及/或(iii)在神经毒素多胜肽曝露期间搅动该细胞;b)固定该细胞,且任选地以一清洁剂透化(permeabilizing)该细胞;c)将该细胞与特异性结合至该无切割及经神经毒素切割受质之至少一第一捕捉抗体,及特异性结合至该经神经毒素切割受质之切割位点的至少一第二捕捉抗体,在允许该等捕捉抗体结合到该受质之条件下接触;d)将该等细胞于允许该第一侦测抗体结合至该第一捕捉抗体的条件下,与特异性结合至该第一捕捉抗体之至少一第一侦测抗体接触,由此形成第一侦测复合物,并于允许该第二侦测抗体结合至该第二捕捉抗体的条件下,与特异性结合至该第二捕捉抗体之至少一第二侦测抗体接触,由此形成第二侦测复合物;e)测定步骤d)之第一与第二侦测复合物的数量;及f)借助于该第二侦测复合物,计算在该细胞中由该神经毒素多胜肽所切割的受质数量,从而测定该神经毒素多胜肽在该细胞中之生物活性。