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    • 17. 发明专利
    • Amplificación de ácidos nucleicos en emulsión en perlas
    • ES2380893T3
    • 2012-05-21
    • ES09175588
    • 2004-01-28
    • 454 CORP454 LIFE SCIENCES CORP
    • BERKA JANCHEN YI-JULEAMON JOHN HLEFKOWITZ STEVENLOHMAN KENTONMAKHIJANI VINODSARKIS GARY JROTHBERG JONATHANWEINER MICHAELSRINIVASAN MAITHREYAN
    • C12N15/10B01L3/00C07H21/00C12P19/34C12Q1/68G01N21/25G01N21/64
    • Un metodo para enriquecer un amplicón, que comprende: (a) distribuir una solución que comprende una pluralidad de perlas y una pluralidad de especies de moleculas de acido nucleico de molde, en una pluralidad de gotitas de emulsión acuosa en una fase oleosa termoestable; en el que un primer subconjunto de las gotitas comprenden una o mas de las perlas y una o mas de las especies de acido nucleico de molde encapsuladas en ellas, y un segundo subconjunto de las gotitas comprenden una o mas de las perlas sin ninguna de las especies de moleculas de acido nucleico de molde encapsuladas en ellas; (b) amplificar las especies de moleculas de acido nucleico de molde del primer subconjunto de gotitas, en el que una o mas perlas del primer subconjunto de gotitas acuosas tienen un amplicón inmovilizado en ellas; (c) romper las gotitas de emulsión acuosa para liberar las perlas del primer y el segundo subconjuntos; (d) hibridar con el amplicón inmovilizado en las perlas un cebador que es complementario del extremo 3' del amplicón; y o bien: (e) (i) formar un complejo de perla con amplicón inmovilizado y perla de enriquecimiento, en el que la perla de enriquecimiento y el cebador hibridado forman un par de captura-diana, y en el que las perlas de enriquecimiento pueden ser aisladas bajo una condición selectiva; y (f) (i) aplicar la condición selectiva para aislar el complejo de perla con amplicón inmovilizado y perla de enriquecimiento, desde las perlas que no tienen amplicón unido; o bien (e) (ii) exponer las perlas con amplicón inmovilizado a una o mas superficies de unión que comprenden restos de captura, cuyos restos de captura forman pares de captura-diana con el cebador hibridado de las perlas con amplicón inmovilizado, y separar las perlas con amplicón inmovilizado desde las perlas que no tienen amplicón unido.