基本信息:
- 专利标题： 一种基于RPA-CRISPR/Cas12a检测海鲈维氏气单胞菌的试剂盒及检测方法与应用
- 申请号：CN202510716748.X 申请日：2025-05-30
- 公开(公告)号：CN120683278A 公开(公告)日：2025-09-23
- 发明人： 姜博尹 , 马悦 , 王启要 , 刘晓红
- 申请人： 华东理工大学
- 申请人地址： 上海市徐汇区梅陇路130号
- 专利权人： 华东理工大学
- 当前专利权人： 华东理工大学
- 当前专利权人地址： 上海市徐汇区梅陇路130号
- 代理机构： 上海科盛知识产权代理有限公司
- 代理人： 褚明伟
- 主分类号： C12Q1/689
- IPC分类号： C12Q1/689 ; C12Q1/6844 ; C12Q1/04 ; C12N15/11 ; C12R1/01
摘要：
本发明提供了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测海鲈维氏气单胞菌的试剂盒及检测方法与应用。所述试剂盒的主要成分为一种鉴别维氏气单胞菌的组合物，包括：基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测维氏气单胞菌gyrB基因的特异引物、Cas12a蛋白、crRNA和荧光报告探针ssDNA Reporter。所述试剂盒的检测方法包括：S1.提取样本基因组DNA；S2.RPA扩增；S3.CRISPR/Cas12a检测；S4.检测结果判读。本发明通过RPA技术恒温快速扩增维氏气单胞菌的目标基因片段，借助CRISPR/Cas12a的精准识别和反式切割能力，特异性靶向维氏气单胞菌的目标基因片段，实现肉眼可视的快速检测。相比于PCR、qPCR等常规检测方法，无需专业的热循环仪，具有灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低廉等优点，有望应用于水产养殖现场及基层实验室的现场即时检测。
IPC结构图谱:
| C | 化学；冶金 |
| --C12 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程 |
| ----C12Q | 包含酶或微生物的测定或检验方法；其所用的组合物或试纸；这种组合物的制备方法；在微生物学方法或酶学方法中的条件反应控制 |
| ------C12Q1/00 | 包含酶或微生物的测定或检验方法；其组合物；这种组合物的制备方法 |
| --------C12Q1/68 | .包括核酸 |
| ----------C12Q1/6813 | ..杂交分析 |
| ------------C12Q1/6883 | ...用于由遗传物质改变而引起的疾病 |
| --------------C12Q1/689 | ....用于细菌 |