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    • 11. 发明申请
    • HOCHSPEZIFISCH MIT DNA INTERAGIERENDE ENZYM-KONJUGATE MIT PROGRAMMIERBARER SPEZIFITÄT
    • 具有可编程特异性的高度特异性DNA-酶促共轭物
    • WO2006027099A2
    • 2006-03-16
    • PCT/EP2005/009028
    • 2005-08-20
    • JUSTUS-LIEBIG-UNIVERSITÄT GIESSENPINGOUD, Alfred, M.JELTSCH, AlbertEISENSCHMIDT, Kristin
    • PINGOUD, Alfred, M.JELTSCH, AlbertEISENSCHMIDT, Kristin
    • C12N9/96C12N9/1007C12N9/22C12N15/111C12N2310/11C12N2310/152C12N2310/3513
    • Die vorliegende Erfindung beschreibt das Prinzip, die Herstellung und die Ver­wendung von hochspezifisch mit DNA interagierenden Enzym-Konjugaten mit programmierbarer Spezifität. Diese erfindungsgemäßen Enzym-Konjugate beste­hen aus Enzymen, die über Linker kovalent mit Oligonukleotidderivaten verknüpft sind. Der Enzymanteil der erfindungsgemäßen Enzym-Konjugate bindet an seine Erkennungssequenz auf der Ziel-DNA, während der Oligonukleotidanteil über eine komplementäre Basenpaarung mit einer Triplex-Bildungsstelle (TFS) der Ziel-DNA eine Tripelhelix ausbildet. Die Enzym-Konjugate lassen sich durch geeignete Kombination von Enzym, Linker und Oligonukleotid maßschneidern und besitzen eine Erkennungsstelle auf der Ziel-DNA. Die erfindungsgemäßen Enzym-Konjugate eignen sich zur gezielten Manipulation großer DNA-Moleküle sowie zum Mapping genomischer DNA in vitro. In vitro und in vivo können sie zur Einführung eines gezielten Doppelstrangbruches verwendet werden, um die homologe Rekombination und / oder die DNA-Reparatur zu stimu­lieren und/oder zur Repression der Genexpression.
    • 本发明描述了具有可编程特异性的高度特异性DNA相互作用酶缀合物的原理,生产和用途。 本发明的这些酶缀合物选自通过接头与寡核苷酸衍生物共价连接的酶。 本发明BEAR ROAD的连接酶偶联物的酶部分Oligonukleotidanteil期间结合到目标DNA上其识别序列,瓦特BEAR OVER与靶DNA的三链形成点(TFS)的互补BEAR重新碱基配对形成三股螺旋。 酶缀合物可以通过酶,接头和寡核苷酸的适当组合来定制,并且在靶DNA上具有识别位点。 根据本发明的酶缀合物适用于大DNA分子的靶向操作和体外基因组DNA的作图。 在体外和体内,它们可用于引入靶向的双链断裂以刺激同源重组和/或DNA修复和/或基因表达的抑制