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    • 2. 发明专利
    • 以切割-增幅法偵測核酸變異 DETECTION OF NUCLEIC ACID VARIATION BY CLEAVAGE-AMPLIFICATION METHOD
    • 以切割-增幅法侦测核酸变异 DETECTION OF NUCLEIC ACID VARIATION BY CLEAVAGE-AMPLIFICATION METHOD
    • TWI324182B
    • 2010-05-01
    • TW094140952
    • 2005-11-22
    • 王小兵森澤紳勝
    • 王小兵
    • C12QC12P
    • C12Q1/683C12Q1/6827C12Q1/6858C12Q2537/163C12Q2525/155C12Q2523/107C12Q2521/301C12Q2537/113C12Q2525/186C12Q2525/143C12Q2525/131C12Q2537/149
    • 本發明係提供一種用於偵測核酸多態性的方法與組合物。 Methods and compositions for detecting nucleic acid polymorphisms are provided. 【創作特點】 本發明之一型態提供一種用於偵測聚核苷酸中多態性的方法,包括:(1)準備具有不可延展的3’端的一基因專一性探針(下稱探針);(2)使該探針與一標的核酸雜交以形成一二元體;(3)使該二元體暴露於一切割酵素或化學品,其中該酵素或化學品可辨識並切割由該探針與該標的核酸間之錯配所產生之一結構;(4)切割該錯配所產生之結構以自該探針移除該不可延展的3’端,並於該探針以及選擇性地該標的核酸產生一新的可延展的3’端;(5)以該切割的探針或標的核酸作為一引子或/及模版,以選擇性地以RNA聚合酶啟動子為基礎的增幅方法進行增幅;以及(6)偵測增幅的核酸產物,其中該增幅的核酸產物係表示在標的核酸中有序列變異或多態性的存在。
      本發明之另一型態提供一種用於偵測聚核苷酸中多態性的方法,包括:(1)降溫配對一探針至可能具有一多態性之一聚核苷酸區域以形成一複合體,其中該探針包括一不可延展的3’端以及與該多態性不互補;(2)以一酵素或化學品接觸該複合體以在該探針與該聚核苷酸間的一錯配區域切割該探針與該聚核苷酸,產生具有可延展的3’端的一探針;(3)添加一人工模版,其中該切割探針係為增幅該人工模版之一引子;以及(4)增幅該人工模版,其中該增幅子的存在係表示該多態性的存在。
      本發明之另一型態係提供一種方法,先切割變異對偶子再選擇性地增幅該切割的對偶子,而非增幅該野生型對偶子。此一特點增加偵測靈敏度,並可以值偵測具有大量野生型對偶子的樣本中的少量變異對偶子。
    • 本发明系提供一种用于侦测核酸多态性的方法与组合物。 Methods and compositions for detecting nucleic acid polymorphisms are provided. 【创作特点】 本发明之一型态提供一种用于侦测聚核苷酸中多态性的方法,包括:(1)准备具有不可延展的3’端的一基因专一性探针(下称探针);(2)使该探针与一标的核酸杂交以形成一二元体;(3)使该二元体暴露于一切割酶或化学品,其中该酶或化学品可辨识并切割由该探针与该标的核酸间之错配所产生之一结构;(4)切割该错配所产生之结构以自该探针移除该不可延展的3’端,并于该探针以及选择性地该标的核酸产生一新的可延展的3’端;(5)以该切割的探针或标的核酸作为一引子或/及模版,以选择性地以RNA聚合酶启动子为基础的增幅方法进行增幅;以及(6)侦测增幅的核酸产物,其中该增幅的核酸产物系表示在标的核酸中有串行变异或多态性的存在。 本发明之另一型态提供一种用于侦测聚核苷酸中多态性的方法,包括:(1)降温配对一探针至可能具有一多态性之一聚核苷酸区域以形成一复合体,其中该探针包括一不可延展的3’端以及与该多态性不互补;(2)以一酶或化学品接触该复合体以在该探针与该聚核苷酸间的一错配区域切割该探针与该聚核苷酸,产生具有可延展的3’端的一探针;(3)添加一人工模版,其中该切割探针系为增幅该人工模版之一引子;以及(4)增幅该人工模版,其中该增幅子的存在系表示该多态性的存在。 本发明之另一型态系提供一种方法,先切割变异对偶子再选择性地增幅该切割的对偶子,而非增幅该野生型对偶子。此一特点增加侦测灵敏度,并可以值侦测具有大量野生型对偶子的样本中的少量变异对偶子。