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57. 发明专利

TWI319449B 聚酯假捻加工紗之製造方法 POLYESTER FALSE-TWIST TEXTURED YARN AND PROCESS FOR PRODUCING SAME 有权
简体标题：聚酯假捻加工纱之制造方法 POLYESTER FALSE-TWIST TEXTURED YARN AND PROCESS FOR PRODUCING SAME
公开(公告)号：TWI319449B
公开(公告)日：2010-01-11
申请号：TW091137173
申请日：2002-12-24
申请人：帝人股份有限公司
发明人：柳原正明 , 白川良喜 , 逢坂浩幸
IPC分类号： D02G , D01F
摘要：滿足(1)構成紗條之複數的單長纖之截面係各自具有3~6個凹部，凹部之深度(H)及開口寬度(W)間之比(H/W)為0.3以上的凹部個數之平均值對全部凹部個數之比率需為50~80%。
(2)截面扁平係數之平均值需為1.5~3.5，(3)截面扁平係數之標準偏差需為0.3~1.0的聚酯假捻紗係用作具有優越的吸水、速乾性能之編織用紗，較有用的。 A polyester false-twist textured yarn satisfying the requirements (1), (2) and (3): (1) the cross-sectional profiles of a plurality of individual filaments from which the yarn is constituted respectively have 3 to 6 concave portions, and a percentage of an average of the numbers of the concave portions having a ratio (H/W) of the deepness (H) to the opening width (W) of the concave portions of 0.3 or more, based on the number of all the concave portions is 50 to 80%, (2) an average flatness factor of the cross-sectional profiles is 1.5 to 3.5, and (3) a standard deviation of the flatness factors of the cross-sectional profiles is 0.5 to 1.0, is useful as textured yarns for woven knitted fabrics having excellent water absorption and fast drying performance. 【創作特點】本發明之目的，係提供具有優越的吸水．快乾性之纖維布帛的製造上較合適的聚酯假捻加工紗及其製造方法。
本發明人等係為達成上述目的，經精心檢討，結果發現若以特定的條件拉伸同時假捻加工具有特定的截面形狀，尺度之聚酯未拉伸紗時，則可得由具有特異的纖維橫截面形狀之聚酯單長纖維而成的多條長纖維假捻加工紗，若採用該紗時，則可得吸水．快乾性優越的編織物，以至完成本發明。
本發明之聚酯假捻加工紗，係含有聚酯樹脂之多條長纖紗條的假捻加工紗。
構成前述多條長纖紗條之複數的單多條長纖之橫截面的形狀，係滿足下述事項(1)~(3)：
(1)前述複數的單長纖之橫截面係具有3~6個凹部及與該凹部相鄰的3~6個凸部，藉由前述凹部之最大深度(H)及最大開口寬度(W)間之比(H/W)，表示前述凹部之開口深度時，具有前述橫截面中的0.3以上之開口深度的凹部之個數的平均值，需為全部凹部數之50~80%之範圍內。
(2)由前述複數的單長纖之橫截面之最大長度(L1)對此最大長度(L1)之方向垂直的方向之最大寬度(L2)之比L1/L2所表示的橫截面扁平係數之平均值需為1.5~3.5之範圍。
(3)前述複數之單長纖的橫截面扁平係數之標準偏差需為0.3~1.0之範圍內之全部為特徵。
於本發明之聚酯假捻加工紗，前述聚酯樹脂係以含有以含有主要重複單位之對苯二甲酸乙二酯重複單位的聚酯為主成分者為宜。
於本發明之聚酯假捻加工紗，前述聚酯樹脂係於其合成步驟，於其合成步驟中之反應紗內，含有由混合由下述一般式(1)：(惟上述式(4)中，R 1 及R 2 係表示各自相互為相同或不同的一價有機基，M 1 表示鹼金屬原子或鹼土類金屬原子，ma在M 1 表示鹼金屬原子時係表示1，M 1 表示鹼土類金屬原子時，表示1/2)表示的含金屬之磷化合物，及鹼土類金屬化合物所形成的微細孔形成劑(1)者為宜。
又，於本發明之聚酯假捻加工紗，前述聚酯樹脂係含有由以下述一般式(2)：(惟上述式(2)中，R 3 係表示氫原子或酯形成性有機官能基，M 2 及M 3 係表示各自相互獨立的金屬原子，mb及mc係表示各自對應的M 2 及M 3 之原子價的倒數，n表示1或2之整數)所表示的芳香族磺酸金屬鹽選擇的至少一種之微細孔形成劑(2)者為宜。
本發明之聚酯假捻加工紗之製造方法，係熔融聚酯樹脂，將此熔融體通過多數的抽絲孔並擠壓成長纖狀，冷卻固化，捲取並供熔融抽絲步驟，製造未拉伸聚酯多條長纖紗，此時，前述多數的抽絲孔之形狀及熔融抽絲條件予以調整至由前述熔融抽絲步驟而得的未拉伸聚酯多條長纖紗之複數的單條長纖之橫截面的形狀尺度滿足下述事項(4)及(5)：(4)前述複數的未拉伸單條長纖之橫截面的各自形成有3~6個凹部，前述凹部之最大深度(Ha)與最大開口寬度(Wa)間之比值(Ha/Wa)之平均值需為0.3~0.5之範圍內，及(5)由前述複數的單長纖之橫截面之各自最大長度(L1a)對此最大長度(L1a)之方向垂直的方向之最大寬度(L2a)之比L1a/L2a所表示的橫截面扁平係數之平均值需為1.0~1.5之範圍內之兩者，將前述未拉伸聚酯多條纖維紗供拉伸假捻同時加工步驟，製造拉伸假捻加工紗，此時將前述拉伸假捻同時加工步驟經予調整至下述事項(6)及(7)：(6)假捻第一加熱器溫度係經予調整至較前述聚酯樹脂之熔融溫度僅低30~100℃之溫度範圍內，及(7)假捻數(捻數/m)為25,000/D 1/2 ~35,000/D 1/2 [惟上述式中D係表示由前述拉伸假捻同時加工而得的紗條之纖度(dtex)]之範圍內的二者之條件下予以實施，由而製造前述本發明之聚酯假捻加工紗為特徵者。
於本發明之聚酯假捻加工紗之製造方法，以含有前述聚酯樹脂為主要重複單位含有對苯二甲酸乙二酯重複單位之聚酯為主要成分者較宜。
於本發明之聚酯假捻加工紗之製造方法，前述聚酯樹脂含有以對苯二甲酸乙二酯單位之聚酯為主成分作為主要重複單位時，於前述熔融抽絲步驟，抽絲速度為2500~4000m/分鐘，於前述拉伸假捻步驟之假捻第一加熱器之溫度在150~200℃之範圍內為宜。
於本發明之聚酯假捻加工紗之製造方法，前述聚酯樹脂在其合成步驟中之反應紗內，含有由混合由下述一般式(1)：(惟上述式(1)中，R 1 及R 2 係表示各自相互為相同或不同的一價有機基，M 1 表示鹼金屬原子或鹼土類金屬原子，ma在M 1 表示鹼金屬原子時係表示1，M 1 表示鹼土類金屬原子時，表示1/2)表示的含金屬之磷化合物，及鹼土類金屬化合物所形成的微細孔形成劑(1)者為宜。
於本發明之聚酯假捻加工紗之製造，前述聚酯樹脂係含有由以下述一般式(2)：(惟上述式(2)中，R 3 係表示氫原子或酯形成性有機官能基，M 2 及M 3 係表示各自相互獨立的金屬原子，mb及mc係表示各自對應的M 2 及M 3 之原子價的倒數，n表示1或2之整數)所表示的芳香族磺酸金屬鹽選擇的至少一種之微細孔形成劑(2)宜。
简体摘要：满足(1)构成纱条之复数的单长纤之截面系各自具有3~6个凹部，凹部之深度(H)及开口宽度(W)间之比(H/W)为0.3以上的凹部个数之平均值对全部凹部个数之比率需为50~80%。 (2)截面扁平系数之平均值需为1.5~3.5，(3)截面扁平系数之标准偏差需为0.3~1.0的聚酯假捻纱系用作具有优越的吸水、速干性能之编织用纱，较有用的。 A polyester false-twist textured yarn satisfying the requirements (1), (2) and (3): (1) the cross-sectional profiles of a plurality of individual filaments from which the yarn is constituted respectively have 3 to 6 concave portions, and a percentage of an average of the numbers of the concave portions having a ratio (H/W) of the deepness (H) to the opening width (W) of the concave portions of 0.3 or more, based on the number of all the concave portions is 50 to 80%, (2) an average flatness factor of the cross-sectional profiles is 1.5 to 3.5, and (3) a standard deviation of the flatness factors of the cross-sectional profiles is 0.5 to 1.0, is useful as textured yarns for woven knitted fabrics having excellent water absorption and fast drying performance. 【创作特点】本发明之目的，系提供具有优越的吸水．快干性之纤维布帛的制造上较合适的聚酯假捻加工纱及其制造方法。本发明人等系为达成上述目的，经精心检讨，结果发现若以特定的条件拉伸同时假捻加工具有特定的截面形状，尺度之聚酯未拉伸纱时，则可得由具有特异的纤维横截面形状之聚酯单长纤维而成的多条长纤维假捻加工纱，若采用该纱时，则可得吸水．快干性优越的编织物，以至完成本发明。本发明之聚酯假捻加工纱，系含有聚酯树脂之多条长纤纱条的假捻加工纱。构成前述多条长纤纱条之复数的单多条长纤之横截面的形状，系满足下述事项(1)~(3)： (1)前述复数的单长纤之横截面系具有3~6个凹部及与该凹部相邻的3~6个凸部，借由前述凹部之最大深度(H)及最大开口宽度(W)间之比(H/W)，表示前述凹部之开口深度时，具有前述横截面中的0.3以上之开口深度的凹部之个数的平均值，需为全部凹部数之50~80%之范围内。 (2)由前述复数的单长纤之横截面之最大长度(L1)对此最大长度(L1)之方向垂直的方向之最大宽度(L2)之比L1/L2所表示的横截面扁平系数之平均值需为1.5~3.5之范围。 (3)前述复数之单长纤的横截面扁平系数之标准偏差需为0.3~1.0之范围内之全部为特征。于本发明之聚酯假捻加工纱，前述聚酯树脂系以含有以含有主要重复单位之对苯二甲酸乙二酯重复单位的聚酯为主成分者为宜。于本发明之聚酯假捻加工纱，前述聚酯树脂系于其合成步骤，于其合成步骤中之反应纱内，含有由混合由下述一般式(1)：(惟上述式(4)中，R 1 及R 2 系表示各自相互为相同或不同的一价有机基，M 1 表示碱金属原子或碱土类金属原子，ma在M 1 表示碱金属原子时系表示1，M 1 表示碱土类金属原子时，表示1/2)表示的含金属之磷化合物，及碱土类金属化合物所形成的微细孔形成剂(1)者为宜。又，于本发明之聚酯假捻加工纱，前述聚酯树脂系含有由以下述一般式(2)：(惟上述式(2)中，R 3 系表示氢原子或酯形成性有机官能基，M 2 及M 3 系表示各自相互独立的金属原子，mb及mc系表示各自对应的M 2 及M 3 之原子价的倒数，n表示1或2之整数)所表示的芳香族磺酸金属盐选择的至少一种之微细孔形成剂(2)者为宜。本发明之聚酯假捻加工纱之制造方法，系熔融聚酯树脂，将此熔融体通过多数的抽丝孔并挤压成长纤状，冷却固化，卷取并供熔融抽丝步骤，制造未拉伸聚酯多条长纤纱，此时，前述多数的抽丝孔之形状及熔融抽丝条件予以调整至由前述熔融抽丝步骤而得的未拉伸聚酯多条长纤纱之复数的单条长纤之横截面的形状尺度满足下述事项(4)及(5)：(4)前述复数的未拉伸单条长纤之横截面的各自形成有3~6个凹部，前述凹部之最大深度(Ha)与最大开口宽度(Wa)间之比值(Ha/Wa)之平均值需为0.3~0.5之范围内，及(5)由前述复数的单长纤之横截面之各自最大长度(L1a)对此最大长度(L1a)之方向垂直的方向之最大宽度(L2a)之比L1a/L2a所表示的横截面扁平系数之平均值需为1.0~1.5之范围内之两者，将前述未拉伸聚酯多条纤维纱供拉伸假捻同时加工步骤，制造拉伸假捻加工纱，此时将前述拉伸假捻同时加工步骤经予调整至下述事项(6)及(7)：(6)假捻第一加热器温度系经予调整至较前述聚酯树脂之熔融温度仅低30~100℃之温度范围内，及(7)假捻数(捻数/m)为25,000/D 1/2 ~35,000/D 1/2 [惟上述式中D系表示由前述拉伸假捻同时加工而得的纱条之纤度(dtex)]之范围内的二者之条件下予以实施，由而制造前述本发明之聚酯假捻加工纱为特征者。于本发明之聚酯假捻加工纱之制造方法，以含有前述聚酯树脂为主要重复单位含有对苯二甲酸乙二酯重复单位之聚酯为主要成分者较宜。于本发明之聚酯假捻加工纱之制造方法，前述聚酯树脂含有以对苯二甲酸乙二酯单位之聚酯为主成分作为主要重复单位时，于前述熔融抽丝步骤，抽丝速度为2500~4000m/分钟，于前述拉伸假捻步骤之假捻第一加热器之温度在150~200℃之范围内为宜。于本发明之聚酯假捻加工纱之制造方法，前述聚酯树脂在其合成步骤中之反应纱内，含有由混合由下述一般式(1)：(惟上述式(1)中，R 1 及R 2 系表示各自相互为相同或不同的一价有机基，M 1 表示碱金属原子或碱土类金属原子，ma在M 1 表示碱金属原子时系表示1，M 1 表示碱土类金属原子时，表示1/2)表示的含金属之磷化合物，及碱土类金属化合物所形成的微细孔形成剂(1)者为宜。于本发明之聚酯假捻加工纱之制造，前述聚酯树脂系含有由以下述一般式(2)：(惟上述式(2)中，R 3 系表示氢原子或酯形成性有机官能基，M 2 及M 3 系表示各自相互独立的金属原子，mb及mc系表示各自对应的M 2 及M 3 之原子价的倒数，n表示1或2之整数)所表示的芳香族磺酸金属盐选择的至少一种之微细孔形成剂(2)宜。

58. 发明专利

TWI317380B 氣道專一性擬胰蛋白酶酵素及其利用方法 AIRWAY-SPECIFIC TRYPSIN-LIKE ENZYMES AND METHOD OF USING THE SAME 失效
简体标题：气道专一性拟胰蛋白酶酶及其利用方法 AIRWAY-SPECIFIC TRYPSIN-LIKE ENZYMES AND METHOD OF USING THE SAME
公开(公告)号：TWI317380B
公开(公告)日：2009-11-21
申请号：TW096128689
申请日：2001-08-28
申请人：帝人股份有限公司
发明人：江口廣志 , 一寸木學 , 山村聰 , 三田麗子 , 柵木津希夫
IPC分类号： C12N , G01N , C07K
CPC分类号： C12N9/6427 , C07K16/40 , C07K2317/54 , G01N2500/00
摘要：本發明之課題為提供抑制AST活性、或抑制AST所造成的PAR活性、亢進黏液產生、細胞增殖、細胞內鈣流入或EGFR路徑活化之化合物或多肽之篩選方法。更且提供由生體內及生體所得之細胞和試料中之AST的測定方法。
本發明為與序列編號1或序列編號2所示之胺基酸序列之全部或一部分所構成之蛋白質或序列編號1所示之胺基酸序列具有66%以上同質性之哺乳類AST蛋白、前肽部分與擬胰蛋白酶蛋白部分為以雙硫鍵連結之AST。編碼此AST之核酸。此些核酸所結合之抗體。使用此類抗體測定AST之方法。更且，測定對象化合物或多肽之AST抑制活性、或AST所造成之PAR活化或亢進黏液產生、細胞增殖、細胞內鈣流入或EGFR路徑活化之抑制活性的測定方法。【創作特點】發明之揭示
本發明之課題為取得具有活性之真構造的AST。
又，具有活性之真構造之AST所造成之亢進黏液產生作用、EGFR(Epidermal Groth Factor Receptor)路徑活化作用、亢進細胞激動素產生等之亢進發炎作用、惹起細胞內鈣流入作用、PAR(蛋白酶活化受體、定義為經由蛋白酶活性而惹起訊號傳達之受體)活化作用之抑制藥劑的篩選方法及用以檢測其抑制活性之評價系的構築。
更且，提供具有該構造之AST活性之抑制化合物或多肽(包含蛋白質及抗體)、或具有該構造之AST之亢進黏液產生作用、EGFR路徑活化作用、亢進發炎作用、惹起細胞內鈣流入作用、PAR活化作用之抑制化合物或多肽之藥效評價系。
又，經由取得與該構造酵素結合之抗體，且構築測定系，則可提供進行診斷分泌系之異狀、發炎性疾病、凝固纖溶系之異狀、癌等之手段。
即，利用本發明方法所得之抑制AST活性之化合物或多肽，或AST所造成之亢進黏液產生作用、亢進發炎作用、細胞內鈣流入作用、PAR活化作用、EGFR路徑活化作用之抑制化合物或多肽可期待使用抑制或修飾對於具有AST之分泌細胞的分泌促進或亢進黏液產生作用，對於纖維等細胞、上皮細胞、纖毛細胞、平滑肌細胞、杯細胞之增殖及損害作用、對於癌增殖和轉移之作用、對於黏液纖毛運動之作用、抗病毒感染作用等之生理作用，且改善及治療病態。
更且，由於AST為活化PAR，故可期待使用於對於具有PAR之分泌細胞的促進分泌作用(黏液腺細胞、藥液腺細胞、杯細胞之亢進黏液產生作用、對於神經細胞、神經內分泌細胞之亢進分泌作用、氣道上皮細胞中之促進氯離子分泌作用等)、透過上皮細胞或內皮細胞之血管、氣道、腸道等之鬆弛作用、對於平滑肌之收縮作用、纖維等細胞和上皮細胞等之發炎性細胞激動素之誘導產生及增強作用、對於纖維等細胞、上皮細胞(纖毛細胞、杯細胞、基底細胞)、平滑肌細胞、分泌腺細胞等之細胞增殖及損害作用、對於神經細胞抑制或修飾過敏性之增強作用等之生理作用，且改善及治療病態。
更且，由於AST為活化EGFR路徑，故可期待使用於EGFR活化所造成之作用之對於分泌細胞(黏液腺細胞、漿液腺細胞、杯細胞、扁平上皮細胞、癌細胞等)之亢進分泌物產生作用和亢進細胞激動素產生作用、對於纖維等細胞和內皮細胞、上皮細胞、平滑肌細胞等具有EEGR路徑之各式各樣細胞誘導產生發炎性細胞激動素及增強作用、對於纖維等細胞、內皮細胞、上皮細胞、纖毛細胞、杯細胞、基底細胞、扁平上皮細胞、癌細胞、平滑肌細胞、分泌腺細胞等具有EGFR路徑之各式各樣細胞抑制或修飾細胞增殖作用等之生理作用，且改善及治療病態。
由於上述AST直接性、間接性作用，可取得慢性氣道炎症(慢性閉塞性肺疾病，包含慢性支氣道炎、肺氣腫、瀰漫性泛細支氣道炎、支氣道擴張症)、支氣道氣喘)、副鼻腔支氣道症候群、肺纖維症、氣道過敏症、肺高血壓症、凝固線溶系異常所造成之疾病、廣義氣道組織之癌、關節炎、皮膚發炎性疾病用之新治療藥之篩選評價系、診斷藥。
本發明者等人鑑於上述狀況，對於AST之精製方法進行致力研究，結果確立由咳痰中或重組昆蟲細胞中有效精製具有活性之AST之方法。其結果，可取得更多的AST。使用此所取得之精製蛋白，決定胺基酸序列，結果初次闡明經精製之AST活性體之構造，除了先前所報告之擬胰蛋白酶類蛋白之胺基酸構造以外，存在具有前肽與擬胰蛋白之蛋白部分為以雙硫鍵連結構造之蛋白構造之活性體。
又，發現此酵素特別於支氣道上皮和支氣道腺，其中亦以纖毛上皮細胞、基底細胞中多為專一性表現、存在。更且發現具有該構造之AST為具有活化PAR之能力。又，發現AST於來自呼吸器之具有黏液分泌能力之細胞株中，亢進黏液的生產量。本發明者等人為根據此發現而再進一步研究，結果達成本發明。
本發明者等人為根據昆蟲細胞之IIAST(即人類AST)的cDNA序列(特開平8－89246號公報、US－5804410、EP 699763、及Yamaoka K.等人,J.Biol.Chem.,273(19)：11895－11901,1998)，製作重組桿狀病毒載體，且令重組蛋白表現。田此根據實施例1所示之精製方法精製具有活性之蛋白質，並決定活性蛋白之一級構造，結果除了先前報告之擬胰蛋白酶之構造蛋白(特開平7－067640號公報、S.Yasuoka等人,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.,16：p900－908,1997，第187個之異白胺酸(Ile)開始之擬胰蛋白酶蛋白部分)以外，發現含有第1個之甲硫胺酸(Met)至第186個之精胺酸(Arg)之間之胺基酸序列所構成之前肽之一部分的部分序列(具體而言為第145個之天冬醯胺(Asn)或第162個之天冬胺酸(Asp)開始為首的前肽部分)為與擬胰蛋白酶部分透過雙硫鍵結合之構造所構成的蛋白質。其後，發現具有此構造之蛋白質為具有活性之AST的主成分。
更且，由咳痰中精製天然IIAST，且同樣決定胺基酸序列，結果發現存在前肽之一部分的部分序列(具體言為第173個之異白胺酸(Ile)開始為首的前肽部分)為與第187個之異白胺酸(Ile)開始之擬胰蛋白酶部分透過雙硫鍵結合的構造蛋白。其後，發現此構造蛋白為具有活性之AST的主成分。
另一方面，迄今認為HAST為對人類專一性地存在，並被命名為HAT(Human Airway Trypsin－like Protease)(特開平7－067640號公報、S.Yasuoka等人,Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.,16：p300－308,1997)。但是，本發明者等人為使用根據數個絲胺酸蛋白酶之同質性所製作之簡併性引子，並且施行以鼠氣道所製作之cDNA為模板的PCR(聚合酶鏈反應)，決定所得DNA斷片之序列，結果首次發現於無法直立雙足步行之鼠等動物中亦存在擬HAST蛋白。更且，經由施行5'－RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)、3'－RACE則可取得編碼鼠擬AST蛋白的全長cDNA。本發明者等人調查此基因表現的組織專一性時，於鼠中亦觀察到氣道專一心性表現。更且，令如此處理之鼠AST基因於昆蟲細胞中以重組體型式表現，並決定其蛋白一級構造，結果闡明鼠AST亦與人類AST(HAST)同樣地，第1個之甲硫胺酸(Met)至第186個之精胺酸(Arg)之間之胺基酸序列所構成之前肽之部分序列為與第187個之異白胺酸(Ile)開始之擬胰蛋白酶蛋白部分透過雙硫鍵予以結合之構造所構成的酵素。以同樣之方法，亦成功克隆出倉鼠、土撥鼠的AST。
又，使用同上述之方法，於猿、豬、狗、兔、牛等之高等哺乳動物中亦初次察見存在擬HAST蛋白。具體而言，製作以人類及齧齒類之AST的cDNA序列為基礎所設計之簡併性引子，並且進行以氣道萃取之全RNA所合成之cDNA做為模板的PCR，令AST之部分之cDNA序列放大，且決定鹼基序列。以所決定之鹼基序列為基礎所製作之RACE用引子，並經由施行5'－RACE、3'－RACE則可取得編碼擬HAST蛋白之全長cDNA。將如此處理所取得之哺乳類AST基因於人類培養細胞中一次性表現時，明顯可表現與人類AST(HAST)同樣的擬胰蛋白酶活性。更且，令猿AST基因於昆蟲細胞中以重組體型式表現，並決定其蛋白一級構造，結果以等莫耳檢測出IIGG為首之擬胰蛋白酶蛋白部分之N終端胺基酸序列DQAA為首之前肽之一部分的胺基酸序列。猿AST亦與人類AST同樣地，第1個之甲硫胺酸(Met)至第186個之精胺酸(Arg)之間之胺基酸序列所構成之前肽之部分序列為與第187個之異白胺酸(Ile)開始之擬胰蛋白酶蛋白部分透過雙硫鍵予以結合之構造所構成的酵素。
於如上述動物中之AST存在的發現可評估動物AST基因程度或蛋白程度之表現，且經由評估於動物疾模型中之動物AST的表現和活性，則可非常有用於明確該病態中AST的參與。又，經由使用反意義寡核苷酸抑制AST表現，並且導入表現載體令AST之表現上升，則可調查病態模型動物中之AST的參與。更且，提供評價動物模型中之AST抑制劑或抑制多肽(包含蛋白、抗體)之藥效上重要，且於檢討、評價動物種差亦為重要的情報。
其次，令具有上述構造之重組AST於重組PAR表現昆蟲細胞中作用，以鈣流入為指標評價PAR之活化時，於表現PAR1及PAR2之昆蟲細胞中惹起鈣流入，並且初次察見AST為令PAR活化。
更且，初次發現AST於正常人類氣道上皮細胞及氣道上皮細胞株中活化PAR，並惹起鈣流入，且該構造之AST為透過PAR之訊號傳達系引起IL－8產生增強和細胞增殖，並且闡明AST於氣道疾病中為透過PAR之訊號傳達系而修飾其病態。其次，依此根據具有上述構造之重組蛋白的酵素活性或PAR活化作用構築克隆系。
更且，首次發現於人類黏液分泌細胞株中，該構造之AST為亢進黏液產生、惹起細胞內鈣流入、及活化EGFR路徑而引起IL－8產生增強和細胞增殖。其後，闡明亢進黏液產生之慢性氣道疾病中AST為經由亢進黏液產生，引起細胞內鈣流入、及活化PAR、EGFR路徑等並引起IL－8產生增強和細胞增殖、造成其病態被修飾。
更且，發現依此可根據具有上述構造之重組蛋白之酵素活性或亢進黏液產生作用、PAR活化作用、惹起細胞內鈣流入作用、EGFR路徑活化作用及增強IL－8產生作用或促進細胞增殖作用構築克隆系，並且完成本發明。
即，本發明為具有前肽部分為與擬胰蛋白酶蛋白部分過透雙鍵結合構造之AST。
更且，以具有該構造之酵素之亢進黏液產生作用、PAR活化作用、惹起細胞內鈣流入作用、EGFR路徑活化作用及增強IL－8產生作用或促進細胞增殖作用為指標之抑制劑或抑制多肽之篩選系。
更且，本發明亦包含產生此類構造之AST的昆蟲細胞等動物細胞。
又，與具有該構造之酵素結合之抗體，為具有經由酵素免疫測定法檢測出生體內之該酵素之結合性的單株抗體或多株抗體、或具有於免疫組織染色中檢測出組織中及細胞中之該酵素之結合性的單株抗體或多株抗體、或可抑制該酵素活性之單株抗體或多株抗體。
更且，本發明亦包含產生此類單株抗體之融合瘤細胞等之動物細胞。
如下列更具體描述本發明。
(1)一種AST，其為由序列編號1所示之胺基酸序列之全部或一部分所構成之蛋白，具有第1個之Met至第186個之Arg之間之胺基酸序列全部或一部分所構成之前肽部分，與第187個之Ile至第481個之Ile為止之232個胺基酸序列所構成之擬胰蛋白酶蛋白部分為經一個雙硫鍵所連結之構造。
(2)一種哺乳動物AST，其為與序列編號1所示之胺基酸序列具有66%以上同質性之哺乳動物之AST對手(counterpart)蛋白，具有該前肽部分所相當部分與該擬胰蛋白酶蛋白部分所相當部分為經一個雙硫鍵所連結之構造。
(3)一種哺乳動物AST，其為由序列編號2、27、29、31、33、35、37、或39所示之胺基酸序列之全部或一部分所構成之蛋白，具有第1個之Met至第185個或第186個之Arg之間之胺基酸序列之全部或一部分所構成之多肽部分、與第186個或第187個之Ile至第417個或第418個之Ile或Val為止之232個胺基酸序列所構成之多肽部分為經一個雙硫鍵所連結之構造。
(以下，將具有上述(1)至(3)任一種構造之AST記載為「氣道專一性擬胰蛋白酶酵素」或「AST」)。
(4)一種專一性結合AST之抗體。
(5)一種單株抗體，其為抑制人類AST活性、或抑制其活化。
(6)一種檢測或測定AST之方法，其為使用前述抗體。
(7)一種檢測方法，其為將酵素基質和測定對象化合物或多肽混合，並與AST或該酵素表現細胞或該酵素表現組織於適切條件下培養使得與該酵素基質反應，並且經由測定其反應產物則可檢測出測定對象化合物或多肽之AST抑制活性。
(8)一種檢測方法，其為將AST或該酵素表現細胞或該酵素表現組織、與測定對象化合物或多肽、再與AST表現細胞混合，並以PAR活化做為指標檢測出測定對象化合物或多肽之AST所造成之PAR活化的抑制活性。
(9)一種檢測方法，其為將AST或該酵素表現細胞或該酵素表現組織、與測定對象化合物或多肽、再與具有細胞內鈣流入能力之細胞混合，且以細胞內鈣流入為指標檢測出測定對象化合物或多肽之AST所造成之細胞內鈣流入的抑制活性。
(10)一種檢測方法，其為將AST或該酵素表現細胞或該酵素表現組織、與測定對象化合物或多肽、再與具有黏液分泌能力之細胞混合，且以分泌物做為指標檢測出測定對象化合物或多肽之AST所造成之亢進黏液產生作用的抑制活性。
(11)一種檢測方法，其為將AST或該酵素表現細胞或該酵素表現組織、與測定對象化合物或多肽、再與具有EGFR－L(EGFR－配位基)之細胞混合，且以EGFR－L游離量做為指標檢測出測定對象化合物或聚肽之AST所造成之EGFR－L游離能力的抑制活性。
(12)一種檢測方法，其為將AST或該酵素表現細胞或該酵素表現組織、與測定對象化合物或多肽、再與具有EGFR訊號傳達路徑之細胞混合，且以EGFR路徑之訊號傳達做為指標檢測出測定對象化合物或多肽之AST所造成之EGFR訊號傳達系活化作用的抑制活性。
(13)一種天然哺乳類AST基因的編碼區域。
(14)一種來自哺乳類AST基因之mRNA或cDNA。(「例」序列編號3、4、5、6、26、28、30、32、34、36、38)。
(15)一種哺乳類AST。
(16)一種使用前述(13)或(14)之核酸所製作之表現載體體。其為經轉感染或轉形之細胞。由此細胞精製AST之方法及經精製的AST。
(17)一種檢測方法，其為使用前述核酸之全體或一部分之資料，檢測出此些核酸所對應之AST基因的表現量。
(18)一種抑制AST活性、或抑制該酵素活化之物質的篩選方法或其治療效果判定方法，其為對於具有AST活化過度或正調節(up regulate)為其特徵之疾病之哺乳類，投與測定對象之化合物或多肽。
(19)一種AST所造成之亢進黏液產生作用、亢進細胞激動素產生等所造成之亢進發炎作用、細胞內鈣流入作用、PAR活化作用、EGFR路徑活化作用之抑制物質的篩選方法或其治療效果判定方法，其為對於具有AST所造成之亢進黏液產生、亢進發炎、惹起細胞內鈣流入、EGFR路徑活化、PAR活化為其特徵之疾病之哺乳類，投與測測定對象化合物或多肽。
(20)一種以抑制AST活性或抑制其活化判定治療效果之方法，其為對於具有AST活化過度或正調節為其特徵之疾病之哺乳類，投與含有前述反意義寡核苷酸之藥劑。
用以實施發明的最佳形態
於序列編號1所示的胺基酸序列之全部或一部分所構成之本發明氣道專一性擬胰蛋白酶用酵素中，以前肽部分與擬胰蛋白酶蛋白部分為第173個之Cvs和第292個之Cys以雙硫鍵所連結者為佳。關於序列編號2所示之胺基酸序列之全部或一部分所構成之本發明氣道專一性擬胰蛋白酶用酵素，以前肽部分所相當部分與擬胰蛋白酶蛋白部分所相當部分為以第172個Cys與第291個Cys以雙硫鍵所連結者為佳。關於與序列編號1所示之胺基酸序列具有66%以上之同質性之本發明哺乳類氣道專一性擬胰蛋白酶用酵素，以前肽部分所相當部分與擬胰蛋白酶蛋白部分相當部分為以序列編號1所示之AST之第173個Cys與第292個Cys所相當之半胱胺酸部分以雙硫鍵所連結者為佳。
人類AST之情況，此類前肽部分為以其N終端(胺基終端)胺基酸為第1個Met至第170個Ile之間之胺基酸，第44個Asp至第170個Ile之間之胺基酸，第145個Asn至第170個Ile之間之胺基酸為佳。特別以第145個之Asn，第162個Asp或第170個之Ile之任一者開始，至C終端(羧基終端)為第186個之Arg為止者為佳。第162個之Asp或第170個之Ile之任一者開始至186個之Arg為止者為最佳。
對本發明前述AST專一性結合之抗體以單株抗體為佳，且以抑制人類AST活性、或抑制其活化者為特佳。
使用本發明抗體之AST檢測或測定方法使用酵素免疫測定法為佳。
本發明之於測定對象化合物或多肽之AST抑制活性篩選方法中所使用的AST或AST表現細胞，若為具有本發明構造之AST或產生該AST之細胞即可，且以AST表現細胞或器官、組織為來自口腔組織、鼻腔組織、副鼻腔組織、咽頭組織、喉頭組織、氣道或支氣道或肺組織、或來自此些組織之細胞或其細胞株為佳。特別以上皮細胞、特別為纖毛上皮細胞或基底細胞或來自其的細胞株為佳。供於評價上，以經精製，具有前述構造之本發明之AST為最佳。
本發明之檢定對象化合物或多肽之AST所造成之對於亢進黏液產生作用之抑制活性的篩選方法中，亢進黏液產生作用之指標較佳者可列舉黏液糖蛋白之以AB－PAS染色法的染色量、高分子硫酸標幟體之釋出量、黏蛋白之產生量、黏蛋白(特別為Muc 5AC)之mRNA表現量、黏蛋白(特別為Muc 5AC)之啟動子的轉錄活性、EGF受體之配位基的產生量或游離量、參與EGF受體訊號傳遞路徑之蛋白之酪胺酸磷酸氧化體之分量、MAPK(MAP激酶)之磷酸化體之量。
本發明之測定對象化合物或多肽之AST所造成之對於EGFR路徑活化作用之抑制活性篩選方法中，EGFR路徑活化之指標為EGFR－L(EGFR－配位基)之切斷和游離量、或已報導之EGFR訊號傳遞系(Wells.A.,Int.J.of Biochem.& Cell Biology,31：637－643,1999)之測定對象物，或使用此訊號傳達結果所發生之現象等，測定AST所造成之EGFR訊號傳達系的活化。
例如，細胞增殖分析、和包含NFKB、AP－1等轉錄元素之基因(IL－8、IL－6、GM－CSF等)之轉錄活性和生成蛋白的測定、細胞內之肌醇磷酸之分解活性的測定，產生前列腺素E2的測定，產生凝血烷A2的測定，cAMP(環狀AMP)的測定、黏液產生量之測定、黏蛋白之產生量、黏蛋白(特別為Muc 5AC)之mRNA表現量、黏蛋白(特別為Muc 5AC)之啟動子的轉錄活性、參與EGF受體訊號傳達路徑之蛋白之酪胺酸磷酸化體之量(EGFR和MAPK(MAP激酶)等之磷酸化體之量)等。
本發明之測定對象化合物或多肽之AST所造成之對於PAR活化作用之抑制活性篩選方法中，PAR活化之訊號傳達的指標可使用已報告之測定對象物測定AST所造成之PAR之訊號傳達系的活化。
例如，細胞內鈣流入、和細胞增殖分析、包含NFKB、AP－1等之轉錄元素之基因(IL－8、IL－6、GM－CSF等)之轉錄活性各生成蛋白的測定、細胞內之肌醇磷酸之分解活性的測定、產生前列腺素E2的測定、產生凝血烷A2的測定、cAMP(環狀AMP)的測定、直接或間接測定NO(氧化氮)之成之方法、使用Xenopus Oocyte之鈣釋出和電流之測定、透過氯通道之氯離子轉達量之測定、黏液分泌量之測定等。
又，AST表現細胞較佳為該酵素表現重組細胞。更且，AST表現細胞或該酵素表現組織為來自口腔組織、鼻腔組織、副鼻腔組織、咽頭組織、喉頭組織、氣道、支氣道或肺組織、或來自此些組織之細胞、器官或組織、或其細胞株為佳。來自此類組織之細胞或細胞株包含癌細胞、癌細胞株。特別以上皮細胞，其中以氣道上皮細胞，特別為纖毛上皮細胞或基底細胞或來自其的細胞株為佳。此外，AST表現細胞可列舉杯細胞或來自杯細胞之細胞株、黏液腺細胞或來自黏液腺細胞之細胞株、漿液腺細胞或來自漿液腺細胞之細胞株等。
評價分泌之細胞可例示黏液分泌細胞株NCI－H292，且以口腔組織、鼻腔組織、副鼻腔組織、咽頭組織、喉頭組織、氣道、支氣道或肺組織存在之具有分泌能力之細胞、器官或組織，特別為氣道上皮細胞，其中亦以纖毛上皮細胞或基底細胞或來自其之細胞株為佳。來自此類組織之細胞或細胞株為包含癌細胞、癌細胞株。此外，具有分泌能力之細胞較佳者可列舉杯細胞或來自杯細胞之細胞株、黏液腺細胞或來自黏液腺細胞之細胞株、漿液腺細胞或來自漿液腺細胞之細胞株。以細胞株型式所樹立的NCI－H292細胞和A549細胞等供於評價為最佳。
PAR表現細胞可例示PAR表現重組昆蟲細胞，且以口腔組織、鼻腔組織、副鼻腔組織、咽頭組織、喉頭組織、氣道、支氣道或肺組織存在之細胞、器官或組織，特別為氣道上皮細胞，其中以纖毛上皮細胞或基底細胞或來自其之細胞株為佳。此外，PAR表現細胞較佳者可列舉杯細胞或來自杯細胞之細胞株、黏液腺細胞或來自黏液腺細胞之細胞株、漿液腺細胞或來自漿液腺細胞之細胞株、氣道平滑肌細胞、肺纖維芽細胞、神經細胞等。以細胞株型式所樹立之BEAS－2B等供於評價為最佳。
PAR之具體例可為經由AST所活化之蛋白酶活化受體，於已知之PAR1、PAR2、PAR3、PAR4中以PAR1、PAR2為佳，且於上述四種PAR中以PAR－2為佳者。
EGFR－L表現細胞可例示重組EGFR－L表現動物細胞，且以口腔組織、鼻腔組織、副鼻腔組織、咽頭組織、喉頭組織、氣道、支氣道或肺組織存在之細胞、器官或組織，特別為氣道上皮細胞，其中以纖毛上皮細胞或基底細胞或來自其之細胞株為佳。此外，EGFR－L表現細胞較佳者可列舉杯細胞或來自杯細胞之細胞株、黏液腺細胞或來自黏液腺細胞之細胞株、漿液腺細胞或來自漿液腺細之細胞株、氣道平滑肌細胞、肺纖維芽細胞、神經細胞等。具體而言為以細胞株型式所樹立之HCI－H292、A549等。供於評價上以重組EGFR－L表現重組昆蟲細胞或動物細胞為佳。
EGFR－L之具體例可為經由AST所游離之EGFR－L，且可列舉已知的EGF、B－EGF、TGF－α、Amphilegulin、Belacellulin等。其中以EGF、HB－EGF為佳，且以EGF為最佳。
EGFR表現細胞可例示NCI－H292細胞株，且以口腔組織、鼻腔組織、副鼻腔組織、咽頭組織、喉頭組織、氣道、支氣道或肺組織存在之細胞、器官或組織，特別為氣道上皮細胞，其中以纖毛上皮細胞、扁平上皮細胞或基底細胞或來自其之癌細胞或細胞株為佳。此外，EGFR表現細胞較佳者可列舉杯細胞或來自杯細胞之細胞株、黏液腺細胞或來自黏液腺細胞之細胞株、漿液腺胞胞或來自漿液腺細胞之細胞株、氣道平滑肌細胞、肺纖維芽細胞、神經細胞或來自其之細胞株等。最佳為以細胞株型所樹立之HCI－H292、A549等。
EGFR－L之具體例可為經由AST所游離之FGFR－L，且可列舉已知的EGF、HB－EGF、TGF－α、Amphiregulin、Betacellulin等。其中以EGF、HB－EGF為佳，且以EGF為最佳。
本發明之來自哺乳類AST基因的mRNA或cDNA可例示小鼠的mRNA或cDNA。例如為編碼序列編號5或序列編號6所示之AST的mRNA或cDNA。同樣地，本發明之哺乳類AST可例示猿、豬、狗、兔牛、倉鼠、土撥鼠等的AST，且具體而言可列舉序列編號27、29、31、33、35、37、39所示之編碼AST的mRNA或cDNA。
本發明為包含使用此些核酸序列之全體或一部分資料所製作之指示本發明AST表現的表現載體，其所轉感染或轉形之細胞，將此細胞培養並由培養液或培養細胞中回收具有本發明構造的活性AST之AST的製造方法，及根據此製造方法所得之AST。更且，本發明亦包含由天然哺乳類AST所存在之哺乳類體液、細胞、或細胞株所精製的天然哺乳類AST。
更且，本發明為使用此些核酸之全體或一部分資料，且檢測出此些核酸所對應之AST基因之表現量的方法，其檢測手法可例示Northern雜交法、基因放大法。本發明亦包含實施此類基因放大法中所用之天然哺乳類AST基因序列的資料，例如根據此cDNA序列之資料所製作之意義引子或反意義引子。
本發明為對於具有上述AST活化過度或正調節為其特徵之疾病的哺乳類、投與測定對象之化合物或多肽所構成之抑制AST活性、或抑制該酵素活化之物質的篩選方法或其治療效果之判定方法。
此類AST活化過度或正調節為其特徵之疾病可列舉慢性氣道炎症、慢性閉塞性肺疾病、慢性支道炎、肺氣腫、瀰慢性法細支氣道炎、支氣道擴張症、氣喘、副鼻腔支氣道症候群、纖維症、神經過敏症、凝固線溶系異常所造成之疾病、癌、關節炎、或皮膚發炎性之疾病。特別，可例示呼吸器系中之發炎性疾病或口腔組織、鼻腔組織、副鼻腔組織、咽頭組織、喉頭組織、氣道、支氣道、肺組織中分泌異狀、細胞外基質合成異狀、細胞增殖異狀。細胞分化異狀、神經系之異狀、免疫系之異狀、黏液纖毛輸送系之異狀、或凝固線溶系異狀所造成之病態之疾病。
此類AST所造成之亢進黏液產生、亢進發炎、惹起細胞內鈣流入、EGFR路徑活化、PAR活化為其特徵之疾病可列舉慢性氣道炎症、慢性閉塞性肺疾病、慢性支道炎、肺氣腫、瀰慢性法細支氣道炎、支氣道擴張症、氣喘、副鼻腔支氣道症候群、纖維症、神經過敏症、凝固線溶系異常所造成之疾病、癌、關節炎或皮膚發炎性之疾病。特別，可例示呼吸器系中之發炎性疾病或口腔組織、鼻腔組織、副鼻腔組織、咽頭組織、喉頭組織、氣道、支氣道肺組織中分泌異狀、細胞外基質合成異狀、細胞增殖異狀。細胞分化異狀、神經系之異狀、免疫系之異狀、黏液纖毛輸送系之異狀、或凝固線溶系異狀所造成之病態之疾病。
又，本發明為使用上述本發明之核酸之一部分所製作之反意義寡核苷酸，本發明為亦包含對於具有上述AST活化過度或正調節為其特徵之疾病之哺乳類、投與含有此類反意義寡核苷酸之藥劑，則可判定AST活性抑制或其活化抑制所造成之治療效果之方法，及含有此類反意義寡核苷酸做為有效成分之該疾病的治療藥。此AST之活化過度或正調節為其特徵之疾病的具體例可例示同上述之疾病。
於本發明之實施例13、14中使用NCI－H292細胞株，進行AST之亢進黏液產生作用的評價，且AST抑制劑之亢進黏液產差抑制篩選系中所用之細胞，期望為具有分泌能力之細胞，且以呼吸器系中具有分泌能力之細胞、器官或組織為更佳。以細胞株型式所樹立之NCI－H292細胞和A459細胞等供於評價一為最佳。
指標分泌物為有機物、無機物，而有機物以糖蛋白質為佳，更佳為黏液，因為其構成成分之黏蛋白為與分泌指標之病態有關，故為最佳(Tsuda,T.等人，「呼吸器疾病之分子生物學」87－92，(1998)。更且，黏蛋白中以COPD等之過分泌病態中被注目之Muc 5AC(Meerzaman,D.等人,J.Biol.Chem.,269：12932－12939,1994)、Muc 2(Gum,J.R.Jr.等人,J.Biol.Chem,269(4)：2440－2446,1994)等為特佳。
根據亢進黏液產生作用之HAST抑制劑篩選系中之測定指標的實施型態，(1)於糖蛋白階段較佳可列舉為以相對於黏蛋白抗原之抗體單株抗體17Q2(以人類氣道黏蛋白做為抗原)(Thomas,E.等人,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.,14：104－112,1996)等之酵素免疫測定法、和實施例13所示之黏液染色法(AB－PAS染色)及高分子硫酸標幟體之釋出量的測定法。(2)於基因階段較佳可列舉測定黏蛋白(Muc 5AC、Muc 2為佳)之mRNA量之方法之實施例14所揭示的實時PCR法、和評價基因之轉錄活性的方法之利用黏蛋白啟動子區域之報導基因分析系等。
又，如實施例14所示般根據HAST活性之Muc 5AC之mRNA量上升為經由EGF－R中和抗體而被封阻，故推定EGF－R路徑之訊號傳達為AST所造成之亢進黏液產生的主要路徑(Takeyama,K.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA：96：3081－3086,1999)之一，且經由令參與此EGF－R訊號傳達路徑之反應(Louis,M.L.等人,Current Opinion in Cell Biology,11：177－183,1999)定量化，則可測定AST抑制劑之效果。若於參與上述之路徑中可定量化，則全部具有可使用做為測定指標的可能性。例如，標的細胞中之EGF－R之酪胺酸殘基之磷酸化和MAPK(mitogen－activated protein kinase)之磷酸化等可使用免疫測定法做為指標。
根據亢進黏液產生作用之AST抑制劑篩選系的實施型態可列舉對於具有黏液分泌能力之組、器官或培養細胞添加AST，並於其中加入化合物等，測定分泌物i量、mRNA量或該基因之轉錄活性等，則可測定抑制黏液產生效果之方法。又，如上述，根據直接測定器官或細胞培養上清液中之EGFR－L之含量之方法、或間接於其他細胞系中添加並且測定之方法等亦可判定抑制效果。測定對象之EGFR－L較佳可列舉EGF(Epidermal Growth Factor、Carpeuter,G.等人,J.Biol.Chem.,265：7709－7712,1990)、HB－EGF(Heparin－binding EGF－like Growth Factor、Abraham,J.A.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.,190：125－133,1993)、TGF－α(Transforming Growth Factor－α、Lce,D.C.等人,Pharm.Rev.,47：51－85,1995)雙調蛋白(Plowman,G.D.等人,Mol.Cell.Biol.,10：1969－1981,1990)、Betacellulin(Shing,Y.等人,Science,259：1604－1607,1993)等(Gerhard,R.等人,Biochim.Biophys.Acta,1333：F179－F199,1997)。特別以EGF、HB－EGF為佳。
简体摘要：本发明之课题为提供抑制AST活性、或抑制AST所造成的PAR活性、亢进黏液产生、细胞增殖、细胞内钙流入或EGFR路径活化之化合物或多肽之筛选方法。更且提供由生体内及生体所得之细胞和试料中之AST的测定方法。本发明为与串行编号1或串行编号2所示之氨基酸串行之全部或一部分所构成之蛋白质或串行编号1所示之氨基酸串行具有66%以上同质性之哺乳类AST蛋白、前肽部分与拟胰蛋白酶蛋白部分为以双硫键链接之AST。编码此AST之核酸。此些核酸所结合之抗体。使用此类抗体测定AST之方法。更且，测定对象化合物或多肽之AST抑制活性、或AST所造成之PAR活化或亢进黏液产生、细胞增殖、细胞内钙流入或EGFR路径活化之抑制活性的测定方法。【创作特点】发明之揭示本发明之课题为取得具有活性之真构造的AST。又，具有活性之真构造之AST所造成之亢进黏液产生作用、EGFR(Epidermal Groth Factor Receptor)路径活化作用、亢进细胞激动素产生等之亢进发炎作用、惹起细胞内钙流入作用、PAR(蛋白酶活化受体、定义为经由蛋白酶活性而惹起信号传达之受体)活化作用之抑制药剂的筛选方法及用以检测其抑制活性之评价系的构筑。更且，提供具有该构造之AST活性之抑制化合物或多肽(包含蛋白质及抗体)、或具有该构造之AST之亢进黏液产生作用、EGFR路径活化作用、亢进发炎作用、惹起细胞内钙流入作用、PAR活化作用之抑制化合物或多肽之药效评价系。又，经由取得与该构造酶结合之抗体，且构筑测定系，则可提供进行诊断分泌系之异状、发炎性疾病、凝固纤溶系之异状、癌等之手段。即，利用本发明方法所得之抑制AST活性之化合物或多肽，或AST所造成之亢进黏液产生作用、亢进发炎作用、细胞内钙流入作用、PAR活化作用、EGFR路径活化作用之抑制化合物或多肽可期待使用抑制或修饰对于具有AST之分泌细胞的分泌促进或亢进黏液产生作用，对于纤维等细胞、上皮细胞、纤毛细胞、平滑肌细胞、杯细胞之增殖及损害作用、对于癌增殖和转移之作用、对于黏液纤毛运动之作用、抗病毒感染作用等之生理作用，且改善及治疗病态。更且，由于AST为活化PAR，故可期待使用于对于具有PAR之分泌细胞的促进分泌作用(黏液腺细胞、药液腺细胞、杯细胞之亢进黏液产生作用、对于神经细胞、神经内分泌细胞之亢进分泌作用、气道上皮细胞中之促进氯离子分泌作用等)、透过上皮细胞或内皮细胞之血管、气道、肠道等之松弛作用、对于平滑肌之收缩作用、纤维等细胞和上皮细胞等之发炎性细胞激动素之诱导产生及增强作用、对于纤维等细胞、上皮细胞(纤毛细胞、杯细胞、基底细胞)、平滑肌细胞、分泌腺细胞等之细胞增殖及损害作用、对于神经细胞抑制或修饰过敏性之增强作用等之生理作用，且改善及治疗病态。更且，由于AST为活化EGFR路径，故可期待使用于EGFR活化所造成之作用之对于分泌细胞(黏液腺细胞、浆液腺细胞、杯细胞、扁平上皮细胞、癌细胞等)之亢进分泌物产生作用和亢进细胞激动素产生作用、对于纤维等细胞和内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞等具有EEGR路径之各式各样细胞诱导产生发炎性细胞激动素及增强作用、对于纤维等细胞、内皮细胞、上皮细胞、纤毛细胞、杯细胞、基底细胞、扁平上皮细胞、癌细胞、平滑肌细胞、分泌腺细胞等具有EGFR路径之各式各样细胞抑制或修饰细胞增殖作用等之生理作用，且改善及治疗病态。由于上述AST直接性、间接性作用，可取得慢性气道炎症(慢性闭塞性肺疾病，包含慢性支气道炎、肺气肿、弥漫性泛细支气道炎、支气道扩张症)、支气道气喘)、副鼻腔支气道症候群、肺纤维症、气道过敏症、肺高血压症、凝固线溶系异常所造成之疾病、广义气道组织之癌、关节炎、皮肤发炎性疾病用之新治疗药之筛选评价系、诊断药。本发明者等人鉴于上述状况，对于AST之精制方法进行致力研究，结果确立由咳痰中或重组昆虫细胞中有效精制具有活性之AST之方法。其结果，可取得更多的AST。使用此所取得之精制蛋白，决定氨基酸串行，结果初次阐明经精制之AST活性体之构造，除了先前所报告之拟胰蛋白酶类蛋白之氨基酸构造以外，存在具有前肽与拟胰蛋白之蛋白部分为以双硫键链接构造之蛋白构造之活性体。又，发现此酶特别于支气道上皮和支气道腺，其中亦以纤毛上皮细胞、基底细胞中多为专一性表现、存在。更且发现具有该构造之AST为具有活化PAR之能力。又，发现AST于来自呼吸器之具有黏液分泌能力之细胞株中，亢进黏液的生产量。本发明者等人为根据此发现而再进一步研究，结果达成本发明。本发明者等人为根据昆虫细胞之IIAST(即人类AST)的cDNA串行(特开平8－89246号公报、US－5804410、EP 699763、及Yamaoka K.等人,J.Biol.Chem.,273(19)：11895－11901,1998)，制作重组杆状病毒载体，且令重组蛋白表现。田此根据实施例1所示之精制方法精制具有活性之蛋白质，并决定活性蛋白之一级构造，结果除了先前报告之拟胰蛋白酶之构造蛋白(特开平7－067640号公报、S.Yasuoka等人,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.,16：p900－908,1997，第187个之异白胺酸(Ile)开始之拟胰蛋白酶蛋白部分)以外，发现含有第1个之甲硫胺酸(Met)至第186个之精胺酸(Arg)之间之氨基酸串行所构成之前肽之一部分的部分串行(具体而言为第145个之天冬酰胺(Asn)或第162个之天冬胺酸(Asp)开始为首的前肽部分)为与拟胰蛋白酶部分透过双硫键结合之构造所构成的蛋白质。其后，发现具有此构造之蛋白质为具有活性之AST的主成分。更且，由咳痰中精制天然IIAST，且同样决定氨基酸串行，结果发现存在前肽之一部分的部分串行(具体言为第173个之异白胺酸(Ile)开始为首的前肽部分)为与第187个之异白胺酸(Ile)开始之拟胰蛋白酶部分透过双硫键结合的构造蛋白。其后，发现此构造蛋白为具有活性之AST的主成分。另一方面，迄今认为HAST为对人类专一性地存在，并被命名为HAT(Human Airway Trypsin－like Protease)(特开平7－067640号公报、S.Yasuoka等人,Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.,16：p300－308,1997)。但是，本发明者等人为使用根据数个丝胺酸蛋白酶之同质性所制作之简并性引子，并且施行以鼠气道所制作之cDNA为模板的PCR(聚合酶链反应)，决定所得DNA断片之串行，结果首次发现于无法直立双足步行之鼠等动物中亦存在拟HAST蛋白。更且，经由施行5'－RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)、3'－RACE则可取得编码鼠拟AST蛋白的全长cDNA。本发明者等人调查此基因表现的组织专一性时，于鼠中亦观察到气道专一心性表现。更且，令如此处理之鼠AST基因于昆虫细胞中以重组体型式表现，并决定其蛋白一级构造，结果阐明鼠AST亦与人类AST(HAST)同样地，第1个之甲硫胺酸(Met)至第186个之精胺酸(Arg)之间之氨基酸串行所构成之前肽之部分串行为与第187个之异白胺酸(Ile)开始之拟胰蛋白酶蛋白部分透过双硫键予以结合之构造所构成的酶。以同样之方法，亦成功克隆出仓鼠、土拨鼠的AST。又，使用同上述之方法，于猿、猪、狗、兔、牛等之高等哺乳动物中亦初次察见存在拟HAST蛋白。具体而言，制作以人类及啮齿类之AST的cDNA串行为基础所设计之简并性引子，并且进行以气道萃取之全RNA所合成之cDNA做为模板的PCR，令AST之部分之cDNA串行放大，且决定碱基串行。以所决定之碱基串行为基础所制作之RACE用引子，并经由施行5'－RACE、3'－RACE则可取得编码拟HAST蛋白之全长cDNA。将如此处理所取得之哺乳类AST基因于人类培养细胞中一次性表现时，明显可表现与人类AST(HAST)同样的拟胰蛋白酶活性。更且，令猿AST基因于昆虫细胞中以重组体型式表现，并决定其蛋白一级构造，结果以等莫耳检测出IIGG为首之拟胰蛋白酶蛋白部分之N终端氨基酸串行DQAA为首之前肽之一部分的氨基酸串行。猿AST亦与人类AST同样地，第1个之甲硫胺酸(Met)至第186个之精胺酸(Arg)之间之氨基酸串行所构成之前肽之部分串行为与第187个之异白胺酸(Ile)开始之拟胰蛋白酶蛋白部分透过双硫键予以结合之构造所构成的酶。于如上述动物中之AST存在的发现可评估动物AST基因程度或蛋白程度之表现，且经由评估于动物疾模型中之动物AST的表现和活性，则可非常有用于明确该病态中AST的参与。又，经由使用反意义寡核苷酸抑制AST表现，并且导入表现载体令AST之表现上升，则可调查病态模型动物中之AST的参与。更且，提供评价动物模型中之AST抑制剂或抑制多肽(包含蛋白、抗体)之药效上重要，且于检讨、评价动物种差亦为重要的情报。其次，令具有上述构造之重组AST于重组PAR表现昆虫细胞中作用，以钙流入为指针评价PAR之活化时，于表现PAR1及PAR2之昆虫细胞中惹起钙流入，并且初次察见AST为令PAR活化。更且，初次发现AST于正常人类气道上皮细胞及气道上皮细胞株中活化PAR，并惹起钙流入，且该构造之AST为透过PAR之信号传达系引起IL－8产生增强和细胞增殖，并且阐明AST于气道疾病中为透过PAR之信号传达系而修饰其病态。其次，依此根据具有上述构造之重组蛋白的酶活性或PAR活化作用构筑克隆系。更且，首次发现于人类黏液分泌细胞株中，该构造之AST为亢进黏液产生、惹起细胞内钙流入、及活化EGFR路径而引起IL－8产生增强和细胞增殖。其后，阐明亢进黏液产生之慢性气道疾病中AST为经由亢进黏液产生，引起细胞内钙流入、及活化PAR、EGFR路径等并引起IL－8产生增强和细胞增殖、造成其病态被修饰。更且，发现依此可根据具有上述构造之重组蛋白之酶活性或亢进黏液产生作用、PAR活化作用、惹起细胞内钙流入作用、EGFR路径活化作用及增强IL－8产生作用或促进细胞增殖作用构筑克隆系，并且完成本发明。即，本发明为具有前肽部分为与拟胰蛋白酶蛋白部分过透双键结合构造之AST。更且，以具有该构造之酶之亢进黏液产生作用、PAR活化作用、惹起细胞内钙流入作用、EGFR路径活化作用及增强IL－8产生作用或促进细胞增殖作用为指针之抑制剂或抑制多肽之筛选系。更且，本发明亦包含产生此类构造之AST的昆虫细胞等动物细胞。又，与具有该构造之酶结合之抗体，为具有经由酶免疫测定法检测出生体内之该酶之结合性的单株抗体或多株抗体、或具有于免疫组织染色中检测出组织中及细胞中之该酶之结合性的单株抗体或多株抗体、或可抑制该酶活性之单株抗体或多株抗体。更且，本发明亦包含产生此类单株抗体之融合瘤细胞等之动物细胞。如下列更具体描述本发明。 (1)一种AST，其为由串行编号1所示之氨基酸串行之全部或一部分所构成之蛋白，具有第1个之Met至第186个之Arg之间之氨基酸串行全部或一部分所构成之前肽部分，与第187个之Ile至第481个之Ile为止之232个氨基酸串行所构成之拟胰蛋白酶蛋白部分为经一个双硫键所链接之构造。 (2)一种哺乳动物AST，其为与串行编号1所示之氨基酸串行具有66%以上同质性之哺乳动物之AST对手(counterpart)蛋白，具有该前肽部分所相当部分与该拟胰蛋白酶蛋白部分所相当部分为经一个双硫键所链接之构造。 (3)一种哺乳动物AST，其为由串行编号2、27、29、31、33、35、37、或39所示之氨基酸串行之全部或一部分所构成之蛋白，具有第1个之Met至第185个或第186个之Arg之间之氨基酸串行之全部或一部分所构成之多肽部分、与第186个或第187个之Ile至第417个或第418个之Ile或Val为止之232个氨基酸串行所构成之多肽部分为经一个双硫键所链接之构造。 (以下，将具有上述(1)至(3)任一种构造之AST记载为“气道专一性拟胰蛋白酶酶”或“AST”)。 (4)一种专一性结合AST之抗体。 (5)一种单株抗体，其为抑制人类AST活性、或抑制其活化。 (6)一种检测或测定AST之方法，其为使用前述抗体。 (7)一种检测方法，其为将酶基质和测定对象化合物或多肽混合，并与AST或该酶表现细胞或该酶表现组织于适切条件下培养使得与该酶基质反应，并且经由测定其反应产物则可检测出测定对象化合物或多肽之AST抑制活性。 (8)一种检测方法，其为将AST或该酶表现细胞或该酶表现组织、与测定对象化合物或多肽、再与AST表现细胞混合，并以PAR活化做为指针检测出测定对象化合物或多肽之AST所造成之PAR活化的抑制活性。 (9)一种检测方法，其为将AST或该酶表现细胞或该酶表现组织、与测定对象化合物或多肽、再与具有细胞内钙流入能力之细胞混合，且以细胞内钙流入为指针检测出测定对象化合物或多肽之AST所造成之细胞内钙流入的抑制活性。 (10)一种检测方法，其为将AST或该酶表现细胞或该酶表现组织、与测定对象化合物或多肽、再与具有黏液分泌能力之细胞混合，且以分泌物做为指针检测出测定对象化合物或多肽之AST所造成之亢进黏液产生作用的抑制活性。 (11)一种检测方法，其为将AST或该酶表现细胞或该酶表现组织、与测定对象化合物或多肽、再与具有EGFR－L(EGFR－配位基)之细胞混合，且以EGFR－L游离量做为指针检测出测定对象化合物或聚肽之AST所造成之EGFR－L游离能力的抑制活性。 (12)一种检测方法，其为将AST或该酶表现细胞或该酶表现组织、与测定对象化合物或多肽、再与具有EGFR信号传达路径之细胞混合，且以EGFR路径之信号传达做为指针检测出测定对象化合物或多肽之AST所造成之EGFR信号传达系活化作用的抑制活性。 (13)一种天然哺乳类AST基因的编码区域。 (14)一种来自哺乳类AST基因之mRNA或cDNA。(“例”串行编号3、4、5、6、26、28、30、32、34、36、38)。 (15)一种哺乳类AST。 (16)一种使用前述(13)或(14)之核酸所制作之表现载体体。其为经转感染或转形之细胞。由此细胞精制AST之方法及经精制的AST。 (17)一种检测方法，其为使用前述核酸之全体或一部分之数据，检测出此些核酸所对应之AST基因的表现量。 (18)一种抑制AST活性、或抑制该酶活化之物质的筛选方法或其治疗效果判定方法，其为对于具有AST活化过度或正调节(up regulate)为其特征之疾病之哺乳类，投与测定对象之化合物或多肽。 (19)一种AST所造成之亢进黏液产生作用、亢进细胞激动素产生等所造成之亢进发炎作用、细胞内钙流入作用、PAR活化作用、EGFR路径活化作用之抑制物质的筛选方法或其治疗效果判定方法，其为对于具有AST所造成之亢进黏液产生、亢进发炎、惹起细胞内钙流入、EGFR路径活化、PAR活化为其特征之疾病之哺乳类，投与测测定对象化合物或多肽。 (20)一种以抑制AST活性或抑制其活化判定治疗效果之方法，其为对于具有AST活化过度或正调节为其特征之疾病之哺乳类，投与含有前述反意义寡核苷酸之药剂。用以实施发明的最佳形态于串行编号1所示的氨基酸串行之全部或一部分所构成之本发明气道专一性拟胰蛋白酶用酶中，以前肽部分与拟胰蛋白酶蛋白部分为第173个之Cvs和第292个之Cys以双硫键所链接者为佳。关于串行编号2所示之氨基酸串行之全部或一部分所构成之本发明气道专一性拟胰蛋白酶用酶，以前肽部分所相当部分与拟胰蛋白酶蛋白部分所相当部分为以第172个Cys与第291个Cys以双硫键所链接者为佳。关于与串行编号1所示之氨基酸串行具有66%以上之同质性之本发明哺乳类气道专一性拟胰蛋白酶用酶，以前肽部分所相当部分与拟胰蛋白酶蛋白部分相当部分为以串行编号1所示之AST之第173个Cys与第292个Cys所相当之半胱胺酸部分以双硫键所链接者为佳。人类AST之情况，此类前肽部分为以其N终端(胺基终端)氨基酸为第1个Met至第170个Ile之间之氨基酸，第44个Asp至第170个Ile之间之氨基酸，第145个Asn至第170个Ile之间之氨基酸为佳。特别以第145个之Asn，第162个Asp或第170个之Ile之任一者开始，至C终端(羧基终端)为第186个之Arg为止者为佳。第162个之Asp或第170个之Ile之任一者开始至186个之Arg为止者为最佳。对本发明前述AST专一性结合之抗体以单株抗体为佳，且以抑制人类AST活性、或抑制其活化者为特佳。使用本发明抗体之AST检测或测定方法使用酶免疫测定法为佳。本发明之于测定对象化合物或多肽之AST抑制活性筛选方法中所使用的AST或AST表现细胞，若为具有本发明构造之AST或产生该AST之细胞即可，且以AST表现细胞或器官、组织为来自口腔组织、鼻腔组织、副鼻腔组织、咽头组织、喉头组织、气道或支气道或肺组织、或来自此些组织之细胞或其细胞株为佳。特别以上皮细胞、特别为纤毛上皮细胞或基底细胞或来自其的细胞株为佳。供于评价上，以经精制，具有前述构造之本发明之AST为最佳。本发明之检定对象化合物或多肽之AST所造成之对于亢进黏液产生作用之抑制活性的筛选方法中，亢进黏液产生作用之指针较佳者可枚举黏液糖蛋白之以AB－PAS染色法的染色量、高分子硫酸标帜体之发佈量、黏蛋白之产生量、黏蛋白(特别为Muc 5AC)之mRNA表现量、黏蛋白(特别为Muc 5AC)之启动子的转录活性、EGF受体之配位基的产生量或游离量、参与EGF受体信号传递路径之蛋白之酪胺酸磷酸氧化体之分量、MAPK(MAP激酶)之磷酸化体之量。本发明之测定对象化合物或多肽之AST所造成之对于EGFR路径活化作用之抑制活性筛选方法中，EGFR路径活化之指针为EGFR－L(EGFR－配位基)之切断和游离量、或已报导之EGFR信号传递系(Wells.A.,Int.J.of Biochem.& Cell Biology,31：637－643,1999)之测定对象物，或使用此信号传达结果所发生之现象等，测定AST所造成之EGFR信号传达系的活化。例如，细胞增殖分析、和包含NFKB、AP－1等转录元素之基因(IL－8、IL－6、GM－CSF等)之转录活性和生成蛋白的测定、细胞内之肌醇磷酸之分解活性的测定，产生前列腺素E2的测定，产生凝血烷A2的测定，cAMP(环状AMP)的测定、黏液产生量之测定、黏蛋白之产生量、黏蛋白(特别为Muc 5AC)之mRNA表现量、黏蛋白(特别为Muc 5AC)之启动子的转录活性、参与EGF受体信号传达路径之蛋白之酪胺酸磷酸化体之量(EGFR和MAPK(MAP激酶)等之磷酸化体之量)等。本发明之测定对象化合物或多肽之AST所造成之对于PAR活化作用之抑制活性筛选方法中，PAR活化之信号传达的指针可使用已报告之测定对象物测定AST所造成之PAR之信号传达系的活化。例如，细胞内钙流入、和细胞增殖分析、包含NFKB、AP－1等之转录元素之基因(IL－8、IL－6、GM－CSF等)之转录活性各生成蛋白的测定、细胞内之肌醇磷酸之分解活性的测定、产生前列腺素E2的测定、产生凝血烷A2的测定、cAMP(环状AMP)的测定、直接或间接测定NO(氧化氮)之成之方法、使用Xenopus Oocyte之钙发佈和电流之测定、透过氯信道之氯离子转达量之测定、黏液分泌量之测定等。又，AST表现细胞较佳为该酶表现重组细胞。更且，AST表现细胞或该酶表现组织为来自口腔组织、鼻腔组织、副鼻腔组织、咽头组织、喉头组织、气道、支气道或肺组织、或来自此些组织之细胞、器官或组织、或其细胞株为佳。来自此类组织之细胞或细胞株包含癌细胞、癌细胞株。特别以上皮细胞，其中以气道上皮细胞，特别为纤毛上皮细胞或基底细胞或来自其的细胞株为佳。此外，AST表现细胞可枚举杯细胞或来自杯细胞之细胞株、黏液腺细胞或来自黏液腺细胞之细胞株、浆液腺细胞或来自浆液腺细胞之细胞株等。评价分泌之细胞可例示黏液分泌细胞株NCI－H292，且以口腔组织、鼻腔组织、副鼻腔组织、咽头组织、喉头组织、气道、支气道或肺组织存在之具有分泌能力之细胞、器官或组织，特别为气道上皮细胞，其中亦以纤毛上皮细胞或基底细胞或来自其之细胞株为佳。来自此类组织之细胞或细胞株为包含癌细胞、癌细胞株。此外，具有分泌能力之细胞较佳者可枚举杯细胞或来自杯细胞之细胞株、黏液腺细胞或来自黏液腺细胞之细胞株、浆液腺细胞或来自浆液腺细胞之细胞株。以细胞株型式所树立的NCI－H292细胞和A549细胞等供于评价为最佳。 PAR表现细胞可例示PAR表现重组昆虫细胞，且以口腔组织、鼻腔组织、副鼻腔组织、咽头组织、喉头组织、气道、支气道或肺组织存在之细胞、器官或组织，特别为气道上皮细胞，其中以纤毛上皮细胞或基底细胞或来自其之细胞株为佳。此外，PAR表现细胞较佳者可枚举杯细胞或来自杯细胞之细胞株、黏液腺细胞或来自黏液腺细胞之细胞株、浆液腺细胞或来自浆液腺细胞之细胞株、气道平滑肌细胞、肺纤维芽细胞、神经细胞等。以细胞株型式所树立之BEAS－2B等供于评价为最佳。 PAR之具体例可为经由AST所活化之蛋白酶活化受体，于已知之PAR1、PAR2、PAR3、PAR4中以PAR1、PAR2为佳，且于上述四种PAR中以PAR－2为佳者。 EGFR－L表现细胞可例示重组EGFR－L表现动物细胞，且以口腔组织、鼻腔组织、副鼻腔组织、咽头组织、喉头组织、气道、支气道或肺组织存在之细胞、器官或组织，特别为气道上皮细胞，其中以纤毛上皮细胞或基底细胞或来自其之细胞株为佳。此外，EGFR－L表现细胞较佳者可枚举杯细胞或来自杯细胞之细胞株、黏液腺细胞或来自黏液腺细胞之细胞株、浆液腺细胞或来自浆液腺细之细胞株、气道平滑肌细胞、肺纤维芽细胞、神经细胞等。具体而言为以细胞株型式所树立之HCI－H292、A549等。供于评价上以重组EGFR－L表现重组昆虫细胞或动物细胞为佳。 EGFR－L之具体例可为经由AST所游离之EGFR－L，且可枚举已知的EGF、B－EGF、TGF－α、Amphilegulin、Belacellulin等。其中以EGF、HB－EGF为佳，且以EGF为最佳。 EGFR表现细胞可例示NCI－H292细胞株，且以口腔组织、鼻腔组织、副鼻腔组织、咽头组织、喉头组织、气道、支气道或肺组织存在之细胞、器官或组织，特别为气道上皮细胞，其中以纤毛上皮细胞、扁平上皮细胞或基底细胞或来自其之癌细胞或细胞株为佳。此外，EGFR表现细胞较佳者可枚举杯细胞或来自杯细胞之细胞株、黏液腺细胞或来自黏液腺细胞之细胞株、浆液腺胞胞或来自浆液腺细胞之细胞株、气道平滑肌细胞、肺纤维芽细胞、神经细胞或来自其之细胞株等。最佳为以细胞株型所树立之HCI－H292、A549等。 EGFR－L之具体例可为经由AST所游离之FGFR－L，且可枚举已知的EGF、HB－EGF、TGF－α、Amphiregulin、Betacellulin等。其中以EGF、HB－EGF为佳，且以EGF为最佳。本发明之来自哺乳类AST基因的mRNA或cDNA可例示小鼠的mRNA或cDNA。例如为编码串行编号5或串行编号6所示之AST的mRNA或cDNA。同样地，本发明之哺乳类AST可例示猿、猪、狗、兔牛、仓鼠、土拨鼠等的AST，且具体而言可枚举串行编号27、29、31、33、35、37、39所示之编码AST的mRNA或cDNA。本发明为包含使用此些核酸串行之全体或一部分数据所制作之指示本发明AST表现的表现载体，其所转感染或转形之细胞，将此细胞培养并由培养液或培养细胞中回收具有本发明构造的活性AST之AST的制造方法，及根据此制造方法所得之AST。更且，本发明亦包含由天然哺乳类AST所存在之哺乳类体液、细胞、或细胞株所精制的天然哺乳类AST。更且，本发明为使用此些核酸之全体或一部分数据，且检测出此些核酸所对应之AST基因之表现量的方法，其检测手法可例示Northern杂交法、基因放大法。本发明亦包含实施此类基因放大法中所用之天然哺乳类AST基因串行的数据，例如根据此cDNA串行之数据所制作之意义引子或反意义引子。本发明为对于具有上述AST活化过度或正调节为其特征之疾病的哺乳类、投与测定对象之化合物或多肽所构成之抑制AST活性、或抑制该酶活化之物质的筛选方法或其治疗效果之判定方法。此类AST活化过度或正调节为其特征之疾病可枚举慢性气道炎症、慢性闭塞性肺疾病、慢性支道炎、肺气肿、弥慢性法细支气道炎、支气道扩张症、气喘、副鼻腔支气道症候群、纤维症、神经过敏症、凝固线溶系异常所造成之疾病、癌、关节炎、或皮肤发炎性之疾病。特别，可例示呼吸器系中之发炎性疾病或口腔组织、鼻腔组织、副鼻腔组织、咽头组织、喉头组织、气道、支气道、肺组织中分泌异状、细胞外基质合成异状、细胞增殖异状。细胞分化异状、神经系之异状、免疫系之异状、黏液纤毛输送系之异状、或凝固线溶系异状所造成之病态之疾病。此类AST所造成之亢进黏液产生、亢进发炎、惹起细胞内钙流入、EGFR路径活化、PAR活化为其特征之疾病可枚举慢性气道炎症、慢性闭塞性肺疾病、慢性支道炎、肺气肿、弥慢性法细支气道炎、支气道扩张症、气喘、副鼻腔支气道症候群、纤维症、神经过敏症、凝固线溶系异常所造成之疾病、癌、关节炎或皮肤发炎性之疾病。特别，可例示呼吸器系中之发炎性疾病或口腔组织、鼻腔组织、副鼻腔组织、咽头组织、喉头组织、气道、支气道肺组织中分泌异状、细胞外基质合成异状、细胞增殖异状。细胞分化异状、神经系之异状、免疫系之异状、黏液纤毛输送系之异状、或凝固线溶系异状所造成之病态之疾病。又，本发明为使用上述本发明之核酸之一部分所制作之反意义寡核苷酸，本发明为亦包含对于具有上述AST活化过度或正调节为其特征之疾病之哺乳类、投与含有此类反意义寡核苷酸之药剂，则可判定AST活性抑制或其活化抑制所造成之治疗效果之方法，及含有此类反意义寡核苷酸做为有效成分之该疾病的治疗药。此AST之活化过度或正调节为其特征之疾病的具体例可例示同上述之疾病。于本发明之实施例13、14中使用NCI－H292细胞株，进行AST之亢进黏液产生作用的评价，且AST抑制剂之亢进黏液产差抑制筛选系中所用之细胞，期望为具有分泌能力之细胞，且以呼吸器系中具有分泌能力之细胞、器官或组织为更佳。以细胞株型式所树立之NCI－H292细胞和A459细胞等供于评价一为最佳。指针分泌物为有机物、无机物，而有机物以糖蛋白质为佳，更佳为黏液，因为其构成成分之黏蛋白为与分泌指针之病态有关，故为最佳(Tsuda,T.等人，“呼吸器疾病之分子生物学”87－92，(1998)。更且，黏蛋白中以COPD等之过分泌病态中被注目之Muc 5AC(Meerzaman,D.等人,J.Biol.Chem.,269：12932－12939,1994)、Muc 2(Gum,J.R.Jr.等人,J.Biol.Chem,269(4)：2440－2446,1994)等为特佳。根据亢进黏液产生作用之HAST抑制剂筛选系中之测定指针的实施型态，(1)于糖蛋白阶段较佳可枚举为以相对于黏蛋白抗原之抗体单株抗体17Q2(以人类气道黏蛋白做为抗原)(Thomas,E.等人,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.,14：104－112,1996)等之酶免疫测定法、和实施例13所示之黏液染色法(AB－PAS染色)及高分子硫酸标帜体之发佈量的测定法。(2)于基因阶段较佳可枚举测定黏蛋白(Muc 5AC、Muc 2为佳)之mRNA量之方法之实施例14所揭示的实时PCR法、和评价基因之转录活性的方法之利用黏蛋白启动子区域之报导基因分析系等。又，如实施例14所示般根据HAST活性之Muc 5AC之mRNA量上升为经由EGF－R中和抗体而被封阻，故推定EGF－R路径之信号传达为AST所造成之亢进黏液产生的主要路径(Takeyama,K.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA：96：3081－3086,1999)之一，且经由令参与此EGF－R信号传达路径之反应(Louis,M.L.等人,Current Opinion in Cell Biology,11：177－183,1999)定量化，则可测定AST抑制剂之效果。若于参与上述之路径中可定量化，则全部具有可使用做为测定指针的可能性。例如，标的细胞中之EGF－R之酪胺酸残基之磷酸化和MAPK(mitogen－activated protein kinase)之磷酸化等可使用免疫测定法做为指针。根据亢进黏液产生作用之AST抑制剂筛选系的实施型态可枚举对于具有黏液分泌能力之组、器官或培养细胞添加AST，并于其中加入化合物等，测定分泌物i量、mRNA量或该基因之转录活性等，则可测定抑制黏液产生效果之方法。又，如上述，根据直接测定器官或细胞培养上清液中之EGFR－L之含量之方法、或间接于其他细胞系中添加并且测定之方法等亦可判定抑制效果。测定对象之EGFR－L较佳可枚举EGF(Epidermal Growth Factor、Carpeuter,G.等人,J.Biol.Chem.,265：7709－7712,1990)、HB－EGF(Heparin－binding EGF－like Growth Factor、Abraham,J.A.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.,190：125－133,1993)、TGF－α(Transforming Growth Factor－α、Lce,D.C.等人,Pharm.Rev.,47：51－85,1995)双调蛋白(Plowman,G.D.等人,Mol.Cell.Biol.,10：1969－1981,1990)、Betacellulin(Shing,Y.等人,Science,259：1604－1607,1993)等(Gerhard,R.等人,Biochim.Biophys.Acta,1333：F179－F199,1997)。特别以EGF、HB－EGF为佳。

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